一株肠道病毒71型广西分离株全基因序列分析
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肠道病毒71型VP1蛋白二级结构及B细胞表位的预测王锦;许国章;倪红霞【摘要】The purpose of this study was to predict the secondary structure and B cell epitopes of enterovirus type 71 of VP1 Gene of C4 subgenotype, so as to provide theory evidence for the study of vaccine preparation for EV71. EV71 strains were isolated from hand ,foot and mouth disease in Ningbo in 2010. Homology and phylogenetic analysis based on VP1 with others EV71 have published in GenBank were conducted. The secondary structure of EV71 based on VP1 was analyzed using the GOR4 and SOPMA,and the B cell epitope of EV71 was predicted by combining the hydrophilicity, flexility and surface probability. The Ningbo strain shared the highest homology of nucleotide and amino acid with the type C4a were 93. 6%-99.3% and 98. 35%-100%, phylogenetic analysis revealed that Ningbo strains clusterd within the C4a evolution branch of C4 subgenotype. The secondary structure of EV71 VP1 showed random coils and |3-sheet mainly with a number of antigen index higher section. The B cell epitopes was probably located at the regions of 39-40,159-167.212-220, and 287-290 of VP1 Gene. The secondary structure and B cell epitopes of EV71 VP1 could be predicted by bioinformatics methods, which providing theory evidence for the study of vaccine preparation for EV71.%目的预测C4基因亚型肠道病毒71型的VP1蛋白二级结构及B细胞表位,为EV71疫苗研制提供理论基础.方法本研究将宁波地区EV71分离株与国内外EV71代表株进行同源性分析和并构建亲缘进化树.以VP1基因序列为材料,应用EX-PASY服务器上的GOR4、SOPMA两种方法分析预测蛋白质二级结构,并结合蛋白质的亲水性、柔韧性、表面可能性等指标综合评价VP1蛋白的B细胞抗原表位.结果同源性分析和亲缘进化分析得出,2010年宁波EV71分离株属于C4a基因亚型,与基因库检索到的C4a基因亚型代表株核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为93.6%~99.3%和98.3%~100%.VP1蛋白二级结构以无规则卷曲和β-片层为主,有多处抗原指数较高的区段,结合亲水性、柔韧性、表面可能性等指标,综合预测VP1蛋白的B细胞抗原表位在第39~40、159~167、212~220、287~290位氨基酸残基的可能性较大.结论 EV71 VP1蛋白多个区段具有抗原潜力通过生物信息学方法预测VP1蛋白二级结构及B细胞表位为EV71疫苗研制提供理论基础.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2011(027)010【总页数】4页(P905-908)【关键词】肠道病毒71型;VP1;蛋白质二级结构;B细胞表位【作者】王锦;许国章;倪红霞【作者单位】宁波大学医学院,宁波 315211;宁波市疾病预防控制中心,宁波315010;宁波市疾病预防控制中心,宁波315010【正文语种】中文【中图分类】R373.2肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是小RNA病毒科(Picornaviridae)肠道病毒(Enterovirus,EV)A组成员,1969年由Schmidt等从美国加利福尼亚州患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中分离到。
肠道病毒71型衣壳蛋白VP1基因部分序列在大肠杆菌中的表达唐启慧;田新贵;林斌;向开军;周荣【期刊名称】《热带医学杂志》【年(卷),期】2008(8)1【摘要】目的克隆、表达和鉴定肠道病毒71型广州株EVGZ06VP1基因部分序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。
方法在成功克隆肠道病毒71型广州株EVGZ06全长VP1蛋白基因并测序的基础上,将部分VP1蛋白基因克隆到表达载体pET28a(+)上,构建了重组表达质粒pET28a(+)/(502~891)VP1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。
结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量为19 000,与预计大小一致。
ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。
结论本研究成功克隆和表达了肠道病毒71型VP1基因部分序列,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。
【总页数】4页(P15-18)【关键词】肠道病毒71型;VP1基因;克隆表达【作者】唐启慧;田新贵;林斌;向开军;周荣【作者单位】中国科学院南海海洋研究所;广州市儿童医院;广州华银医药科技有限公司【正文语种】中文【中图分类】R378.21【相关文献】1.肠道病毒71型衣壳蛋白VP1的原核表达和纯化及其抗原性和免疫原性的验证[J], 朱赟;李剑波;高孟;唐彩华;罗永能2.肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌的表达和纯化 [J], 吴亚安;邓丽芬;龚雨婷;陈端萍;谢端;肖承荣;蔡陈珣;赵晓蓉3.肠道病毒71型外壳蛋白VP1全长在大肠杆菌中的高效表达及初步活性测定 [J], 张向颖;修冰水;毛群颖;姚昕;梁争论;张贺秋4.肠道病毒71型衣壳蛋白VP1研究进展 [J], 刘永娟;周井义;赵绍林;苗莉;张春艳;张婷;霍娟;杨自金5.肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达 [J], 周世力;李琳琳;何雅青因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
肠道病毒71型SHZH03株VP1基因在毕赤酵母中的表达周世力;李琳琳;何雅青【期刊名称】《华中师范大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2007(041)002【摘要】利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增得到肠道病毒71型(EV71SHZH03)外壳蛋白VP1基因,经序列测定证实后,构建重组表达质粒VP1/pPIC9K,转化Pichia pastoris 酵母宿主菌Gs115,以Myc-Tag多克隆抗体作为一抗,利用双层滤膜法筛选酵母转化子.甲醇诱导表达.SDS-PAGE分析显示:表达产物的分子量约为30000,与天然VP1大小一致,ELISA实验表明,表达上清液可与EV71患者急性感染期血清呈阳性反应,表明重组蛋白VP1具有免疫原性.【总页数】4页(P259-262)【作者】周世力;李琳琳;何雅青【作者单位】江汉大学,医学与生命科学学院,武汉,430056;中国疾病预防与控制中心病,毒基因工程国家重点实验室,北京,100052;深圳市疾病预防与控制中心,广东,深圳,518001【正文语种】中文【中图分类】Q812【相关文献】1.肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型分离株的VP1基因特征分析 [J], 张建华;江炳福;程险峰;游贤惠;孟继鸿2.FMDV VP1基因与HSP70基因在毕赤酵母中的融合表达及免疫特性 [J], 苏春霞;段相国;王秀青;任雪枫;曹瑞兵;周斌;陈溥言3.肠道病毒71型SHZH03株VP1基因的进化分析 [J], 周世力;李琳琳;田波4.O型口蹄疫病毒VP1基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析 [J], 焦颖;龚劲峰;何校澎;黄辉荣;刘德辉;张春红;吴锋;黄毓茂5.肠道病毒71型衣壳蛋白VP1基因部分序列在大肠杆菌中的表达 [J], 唐启慧;田新贵;林斌;向开军;周荣因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
广东农业科学Guangdong Agricultural Sciences 2024,51(3):124-135 DOI:10.16768/j.issn.1004-874X.2024.03.012常鑫,蒋智勇,卞志标,徐民生,杨冬霞,杨傲冰,翟少伦. 一株高病毒载量PCV2毒株的基因组特征及[J]. 广东农业科学,2024,51(3):124-135. CHANG Xin, JIANG Zhiyong, BIAN Zhibiao, XU Minsheng, YANG Dongxia, YANG Aobing, ZHAI Shaolun. Genome characterization and sequence analysis of porcine circovirus type 2 isolated with high viral load[J]. Guangdong Agricultural Sciences, 2024,51(3):124-135.一株高病毒载量PCV2毒株的基因组特征及序列分析常 鑫1,2,蒋智勇2,卞志标2,徐民生2,杨冬霞2,杨傲冰3,翟少伦2(1.仲恺农业工程学院动物科技学院,广东 广州 510305;2. 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站,广东 广州 510640;3.广东永顺生物制药股份有限公司,广东 广州 511356)摘 要:【目的】了解广东省某猪群中猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株的遗传进化情况,丰富PCV2分子流行病学数据,为当地PCV2疫苗候选株的选用和研发提供参考。
【方法】使用qPCR方法对疑似PCV2的样品进行检测,发现1株具有高病毒载量的PCV2毒株,命名为GD222858。
通过PCR方法进行全基因组分子克隆及遗传进化分析。
272 Applied Prev Med,October 201 1,Vol 17 No.5
文章编号:1673—785X(201 1)o5—0272—05 中图分类号:R 373.2 文献标识码:A
一株肠道病毒71型广西分离株全基因序列分析 闭福银,谢镇国,陈敏玫,周开娇,康宁,居昱,莫兆军,谭毅 广西壮族自治区疾病预防控制中心(南宁530028)
[摘要】目的了解肠道病毒71型CZ01株的全基因组分子特征。方法应用覆盖病毒全基因组的15对特异性 引物对毒株进行RT—PCR扩增,PCR产物直接测序,拼接后得到全基因序列,应用ClustalX(1.81、DNASTAR、Mega 4.1等生物软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析。结果CZ01株病毒全基因组核苷酸序列 长度为7 406bp,与中国大陆北京毒株BJ08一ZO1 1-4和安徽阜阳毒株Fuyang.Anhui/17.08/2整个基因组核苷酸同源性为 98.8%和98.5%,氨基酸同源性分别为99.7%和99.6%;与EV71国际标准株MS/7423/87和BrCr基因组核苷酸同源性仅 为81.7%和80.O%,氨基酸同源性为95.6%和94.9%。对外壳蛋白VP1编码区进行种系发生分析显示CZ01株为c4亚型 的毒株。结论EV71型病毒CZ01株全基因组的组成和结构符合肠道病毒特征,与其它EV71型病毒具有相同的基因 组结构,CZ01株是EV71型的C4亚型的毒株。 [关键词】 肠道病毒;EV71;全基因组;序列分析 Analysis of genome of an enterovirus 71 strain isolated in Guangxi Province BI Fu—yin,XIE Zhen-guo,CHEN Min-meL eta1.Guang ̄iZhuangAutonomous Region CenterforDiseasePrevention and Control,Nanning530028,China [Abstract】Objective To understand the characteristics of the complete nucleotide and amino acid sequences of Enterovirus 71(EV71)isolated in Guangxi Province.Methods The 15 pairs of primer covering viral genome were used to amplify overlapped gene fragments by RT-PCR and the products of amplification were sequenced directly.Bioinformatics softwares were used to analyze the nucleotide,amino acid sequence and phylogenetic tree including Clustal X(1.8),DNAStar, and Mega(4.1).Results The full—length of nucleotide sequence of CZO1 strain was 7406 bps,The nucleotide homologies of complete genomes between CZ01 strain and Beijing strain(BJ08-Z01 1-4)and Anhui Fuyang strain(17.08/2)were 98.8%and 98.5%respectively.while the amino acid homologies between them were 99.7%and 99.6%respectively.The nucleotide homologies between CZ01strain and two standard strains fMS/7423/87 and BrCr)were only 81.7%and 80.0%respectively. while the amino acid homologies between them were 95.6%and 94.9%respectively.Phylogenetic analysis of VP1 coding region showed that the CZ01 strain was the C4 sub-genotype.Conclusion The genome structure of CZ01 strain was consistent with enterovirus.CZ01 strain was the C4 sub—genotype.belonging to enterovirus 7 1 【Key words] Enterovirus;EV7 1;Genome;Sequence analysis
近年来肠道病毒71型Human Enterovims 71,EV71) 在广西的流行呈上升趋势,不断在各个地区的儿童中 发生手足口病(Hand—Foot—Mouth Disease,HFMD)疫 情。为了解EV71病毒在广西的流行和变异情况,本 实验室对EV71型广西病毒株(CZ01)全基因组核苷酸 序列进行了测定分析,为广西EV71病毒的流行病学 调查及手足口病的防控提供理论基础。 1材料与方法 1.1 毒株及病例背景待测病毒株是2010年广西疾 病预防控制中心(cDc)分离并保存的病毒株。毒株分 离自黄X×,男,2岁,散居儿童,2010年4月19日 作者简介:闭福银(1980一),男(壮族),广西天等人,主管技师, 主要从事病毒性疾病的实验室研究工作。 发病,2010年4月22日死亡,病例症状主要有发热 (39.2℃)、心律失常,被医院诊断为病毒性脑炎。 1.2试剂RNA提取试剂盒(QIAGEN Rneasy Mini Kit)和RT-PCR(QIAGEN( ̄)OneStep RT-PCR Kit)均购 自美国QIAGEN公司。 1.3引物来源引物序列参考文献 ,由上海生工生 物工程技术服务有限公司合成。 1.4 ̄-RNA提取将细胞培养物反复冻融3次后, 取上清100 L按RNA提取试剂盒的说明书进行操作。 1.5 RT—PCR反应体系 5×QIAGEN OneStep RT—PCR Buffer 10 L,dNTPs 2 L,QIAGEN OneStep RT—PCR Enzyme Mix 2 L,Rnsin 0.2 L,Rnase—free ddH20 28.8 L,Upstream primer 1 L,Downstream primer 1 L,Template RNA 5 L。反应条件:5O℃ 应用预防医学2011年10月第17卷第5期 30rain 95℃15min,然后94oC45s、55℃45s、72oClmin, 35个循环,最后72 ̄C10rain。PCR产物送北京博迈德 科技发展有限公司测序。 1.6序列比对和进化分析核苷酸及氨基酸序列分 析和同源性比较利用DNAStar软件完成,进化树通过 MEGA4.1软件采用邻接法(Neighbor-joining)绘制,用 于比较分析的毒株序列来自GenBank,见表1。
2结果 2.1 EV71病毒CZ01株全基因组序列测定分析经 过序列测定、拼接、比对并分析岳,获得EV71病毒CZ01 株的全基因组核苷酸序列,全长长度为7 406 bp,其中 A占27.07%,G占23.94%,C占24-33%,T占24.66%, 腺嘌呤核苷酸和尿嘧啶核苷酸丰富(A+u=51.73%), 5’端非编码xK(5’UTR)长743bp,病毒基因组在744~7 325 之间仅有一个开放阅读框(ORF)全长6 582个核苷 酸,编码2 194个氨基酸的多聚蛋白(Polyprotein),3’端非 编码xE(3’UTR)长81bp。广西毒株CZ01基因组的组成 和结构符合肠道病毒的特征。毒株在编码区及非编 码区均没有核苷酸的缺失和插入。病毒基因组结构 符合肠道病毒的特征。 2.2种系发生分析以Cox.A16作为外群,对EV71 病毒CZ01株与其他毒株的外壳蛋白VP1编码区进行 遗传进化分析(见图1),广西病毒株CZ01与Fuyang. Anhui/17.08/2、BJ08一Z011-4、GX/LZ08—04/08/CHN、 EV71/LanzhouO1、 Zhejiang08、 SHZH98 和 3254-TAI一98集中在一个大分支上,属于EV71病毒 C4亚型,与国际标准株BrCr和MS/7423/87的进化关 系较远。 23病毒基因组核苷酸同源性比较EV71病毒CZ01 株与其他EV71C4亚型毒株核苷酸同源性比较结果见 表2。从全基因组、5'UTR、编码基因、P1、P2、P3 和3’UTR的比较来看,CZ01与其他地区EV71C4亚型 毒株核苷酸同源性均较高,但与云南分离株KM186/09 和KMM09的同源性相对较低,在88.9%~94.5%之间; 与1998年广东深圳分离株SHZH98的同源性最低。 2.4病毒编码蛋白氨基酸同源性比较 由核苷酸序 列推导的氨基酸序列同源性比较结果显示,CZ01与 其他地区毒株的同源性均较高,但与云南分离株 KM186/09和KMM09的同源性相对较低;与1998年 广东深圳分离株SHZH98的同源眭最低,仅为95.8%。 见表3。
表1 研究中相关比较的毒株 273