基因型对诱导大豆子叶节不定芽的影响

大豆蚜对抗性相关基因的分星泊加斯与表达大豆蚜对抗性相关基因的分子机制探究大豆蚜（Aphis glycines）是大豆（Glycine max）的主要害虫之一，其危害严重影响了大豆的产量和质量。

大豆蚜在大豆根部寄生，通过吸食植物汁液给大豆造成严重的损害。

为了抵御大豆蚜对大豆的危害，研究人员透过对大豆蚜对抗性的研究，发现存在着抗蚜相关基因，且这些基因的表达对大豆蚜的抵抗力具有重要的作用。

我国是大豆生产大国，抗蚜基因的研究对于我国的农业生产有着重要的意义。

为了揭示大豆蚜抗性相关基因的分子机制，以及其表达的规律，研究人员采用分子生物学和生物信息学等研究手段，进行了一系列的研究。

大豆蚜抗性相关QTL分析研究人员采用遗传学方法，对大豆抗蚜性进行了基因定位。

QTL（Quantitative Trait Loci，数量性状基因）是遗传学中常用的一种基因分析方法，可以分析影响数量性状的基因的位置和作用方式。

通过分析大豆的遗传物质，确定了多个与大豆蚜抗性相关的QTL。

这些QTL包括抗蚜基因A1、A2、A3、A4、A5、A6、B1、B2、B3、B4等。

这些QTL并不是准确的基因位置，而是基因出现的可能性较高的区域。

大豆蚜抗性相关基因的克隆与鉴定目前，已经鉴定出大豆蚜抗性相关基因中较为重要的NBS-LRR基因。

NBS-LRR基因是一类植物免疫系统中的关键基因，主要参与植物对抗病原体和虫害等外部环境的免疫防御。

该基因通过特异性的识别病原体和虫害，并通过ATP酶等多种生化机制，触发植物免疫反应，从而保护植物免遭病原体和虫害的入侵。

进一步研究发现，大豆蚜抗性相关基因也包括了些和自身信号转导、激素代谢等过程相关的基因。

这些基因在大豆蚜抗性的性状表现中具有重要的作用。

因此，对这些基因的克隆和鉴定，有助于深入探究大豆蚜抗性的分子机制。

同时，对这些基因进行研究，可以为新品种的选育和新抗虫药的研发提供重要的理论基础。

大豆蚜抗性相关基因的表达大豆蚜对抗性相关基因的表达规律对于研究基因在抗蚜过程中的功能具有重要的作用。

V ol 131,N o 12pp 1170-176　Feb 1,2005作　物　学　报ACT A AG RONOMICA SI NICA第31卷第2期2005年2月　170～176页农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究李桂兰1,2　乔亚科1　杨少辉2　靳朝霞2　李明刚2(1河北科技师范学院,河北昌黎066600;2南开大学分子生物学研究所,天津300071)摘　要:直接以农杆菌转化系统为平台,以栽培大豆(G lycine max L 1)吉林35、中黄28、南农、铁丰29、铁丰30和开育12的子叶节为外植体,用LBA4404农杆菌(含pPC 2K S A 质粒)研究了影响大豆子叶节转化的因素。

结果表明,大豆品种之间转化存在着差异,吉林35转化率最高,平均转化率为2116%,单次最高转化率达6112%;中黄28次之,平均转化率为119%,单次最高转化率达3133%;南农转化率为1105%;铁丰29居第4位,转化率为0195%;铁丰30和开育12无转化植株。

用4d 苗龄的子叶节,农杆菌浸染30min ,共培养3d 比较合适。

萌发培养基和不定芽诱导培养基对转化率的影响存在交互作用,对于吉林35来说,大豆萌发培养基(G )和不定芽诱导培养基(Y )的最佳组配方式为G 2+Y 1(转化率6112%)和G 1+Y 2组合(转化率5126%)。

农杆菌介导的转化系统中,转化植株的筛选方式对转化率影响很大,筛选培养初期,采用比较低的筛选浓度,在继代培养过程中逐次提高筛选压力,可以获得较好的转化效果。

关键词:大豆;根癌农杆菌;子叶节;转化中图分类号:S565,Q78Study of the Agrobacterium 2mediated T ransformation Systems of Soybean Cotyle 2donary N odeLI G ui 2Lan 1,2,QIAO Y a 2K e 1,Y ANG Shao 2Hui 2,J IN Zhao 2X ia 2,LI M ing 2G ang 2(1H ebei Normal Univer sity o f Science &Technology ,Changli 066600,H ebei ;2Institute o f Molecular Biology ,Nankai Univer sity ,Tianjin 300071,China )Abstract :Suitable soybean genetic trans formation system has not been established by now 1The factors in fluencingAgrobacterium 2mediated soybean cotyledonary node trans formation were studied in this research so as to im prove the trans 2formation frequency of soybean 1The results showed that the trans formation frequency was different am ong cultivars of soy 2bean 1Jilin 35was the highest in trans formation rate ,Zhonghuang 28was the second and followed by Nannong and T iefeng 29,and there was no trans formed plant in T iefeng 30and K aiyu 121The average and the highest trans formation rate were 2116%and 6112%for Jilin 35,and 119%and 3133%for Zhonghuang 28,respectively (T able 1)1The suitable seedling age was about 4days 2old (Fig 15)and the appropriate duration of in fection and co 2culture with Agrobacterium were about 30m inutes and 3days respectively (Fig 14)1There was an interaction between the germ ination medium and shoots regenera 2tion medium for trans formation frequency 1The better combination pattern of germ ination medium and shoots regeneration medium were G 2+Y 1(trans formation rate was 6112%)and G 1+Y 2(trans formation rate was 5126%)in this research (Fig 16)1The screening method had a significant effect on increasing the trans formation frequency of the Agrobacterium 2me 2diated trans formation system (T able 2)1K anamycin was used as a screening agent in this study 1H igher trans formation rate was obtained by using the screening m odel S1which the kanamycin concentration increased gradually from 60mg ΠL to 100mg ΠL when subculture in the shoots regeneration stage 1It was suggested that the lower concentration of screening agent should be used in the earlier screening stage ,then the higher concentrations increased gradually in the later stages 1K ey w ords :S oybean ;Agrobacterium tumef aciens ;C otyledonary node ;T rans formation 早在1984年,Deblock 和H orsch 就进行了大豆转基因研究[1],1988年Hinchee 首先以农杆菌介导法获得大豆转基因植株[2],现在抗除草剂转基因大豆虽然已经商品化,但大豆转化的频率仍很低,重复基金项目:河北省自然科学基金(301295);国家863资助(2002AA213061);河北省科技攻关项目;河北科技师范学院博士基金。

不同基因型与环境因素对高油大豆品质性状的影响的开题
报告
标题：不同基因型与环境因素对高油大豆品质性状的影响研究
背景和意义：
大豆是世界四大油料作物之一，不仅可以提取植物油，而且是人类重要的膳食蛋白质
来源之一。

高油大豆是指油分含量在20%以上的品种，发展高油大豆可以增加大豆的经济效益，促进我国油料工业的发展。

然而，油分含量高的大豆品种往往对其他品质
性状存在不利影响，如品质较硬、粒重降低、蛋白含量降低等。

因此，需要探究不同
基因型和环境因素对高油大豆品质性状的影响，为研究和发展高油大豆提供理论依据
和实验数据。

研究内容：
1.筛选合适的高油大豆基因型：通过测定不同大豆品种的油分含量，筛选出油分含量
为20%以上的高油大豆品种。

2.测定高油大豆品质性状：利用相应方法测定高油大豆的主要品质性状，包括种子形态、蛋白质含量、粒重、油脂含量等。

3.不同基因型和环境因素对高油大豆品质性状的影响分析：对不同基因型和环境因素
下的高油大豆品质性状进行分析和比较，探究不同基因型和环境因素对高油大豆品质
性状的影响及其相互作用。

意义和预期成果：
本研究将探究不同基因型和环境因素对高油大豆品质性状的影响，为研究和发展高油
大豆提供理论依据和实验数据。

预期成果包括筛选出适宜用于发展高油大豆的基因型，认识不同基因型和环境因素对高油大豆品质性状的影响规律，为优化高油大豆育种策
略提供科学依据。

第29卷　第1期2010年 2月大豆科学S OY BEAN SC I ENCEVol 129　No 11Feb .　2010中国转基因大豆的研究进展及其产业化收稿日期:2009209228基金项目:引进国际先进农业科学技术计划资助项目(20092Z34);转基因生物新品种培育科技重大专项资助项目(2008ZX080042005;2009ZX080182001B )。

第一作者简介:余永亮(19792),男,助理研究员,硕士,研究方向为大豆品质遗传改良与分子育种。

通讯作者:梁慧珍,研究员,博士。

E 2mail:lhzh66666@ 。

余永亮,梁慧珍,王树峰,练　云,位艳丽,王庭峰(河南省农业科学院经济作物研究所,国家大豆改良中心郑州分中心,河南郑州450002)摘　要:大豆的转基因研究是国内外植物分子生物学研究的热点之一。

转基因大豆已成为世界大豆主产国大豆产业发展的主要动力。

我国应该借鉴国外转基因大豆发展经验,立足已有的技术、人才和材料储备,在农业转基因生物安全管理等相关法律、政策下,完善和健全我国转基因大豆技术及其产业化体系。

大力发展我国转基因大豆,可以降低生产成本,提高种植效益,提升我国大豆产业的市场竞争力、保障国家粮食安全、促进农民增收。

该文概述我国转基因大豆技术的研究进展及其产业化现状,并对其发展前景进行了探讨和展望。

关键词:转基因大豆;再生体系;遗传转化;外源基因;产业化中图分类号:S565.1 文献标识码:A 文章编号:100029841(2010)0120143208Research Progress and Comm erc i a li za ti on on Tran sgen i c Soybean i n Ch i n aY U Yong 2liang,L I A NG Hui 2zhen,WANG Shu 2feng,L I A N Yun,W E I Yan 2li,WANG Ting 2feng(I nstitute of I ndustrial Cr op s,Henan Acade my of Agricultural Science,Zhengzhou Subcenter of Nati onal Center for Soybean I m p r ov ment,Zhengzhou 450002,Henan,China )Abstract:Soybean transfor mati on research is a “hot s pot ”in the area of p lant molecular genetics .Transgenic s oybean has become the i m portant power of s oybean ′s industry devel opment in the world’s maj or p r oducers of s oybean .By using its own technol ogy,pers onnel and materials under the related la ws and policies of agricultural genetically modified bi o 2safety man 2age ment and dra wing on the experience of other countries,China should consu mmate and i m p r ove the technol ogy and the in 2dustrial p r oducti on syste m of transgenic s oybean .The devel opment of transgenic s oybean is of i m portance for enhancing mar 2ket competitive of s oybean industry in China,strengthening nati onal f ood security and increasing far mer ′s income by decrea 2sing p r oducti on cost,i m p r oving econom ic returns and p r omoting science and technol ogy advance ment .The status of research and commercializati on on transgenic s oybean technol ogy was su mmarized,and its future devel opment and p r os pects was dis 2cussed .Key words:Transgenic s oybean;Regenerati on syste m;Genetic transfor mati on;Exogenous gene;Commercializati on 大豆是重要的油料作物和高蛋白粮饲兼用作物,含有丰富的蛋白质、脂肪和多种人体有益的生理活性物质,是蛋白质、油脂及保健活性物质的重要来源,又是食品、饲料等多种加工工业的优质原料。

大豆论文：改良的大豆子叶节转基因方法【中文摘要】随着基因工程技术的发展,采用遗传转化导入外源基因,改善大豆品质及抗病抗逆性,已成为大豆改良的重要方法之一。

本文从多个层面对转基因方法的原理和进展作了详细综述,最终选取相对高效的农杆菌介导法作为大豆转基因的基础研究方法,并从种子消毒,外植体选择,农杆菌侵染和共培养,以及各培养时期植物激素种类和浓度等方面作了分析研究,以探讨大豆转基因优化研究步骤,以期在一定程度上达到提高转基因效率的。

文章以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)毒性蛋白基因Bt为基因,先研究未进行转染时期11种不同硼酸浓度处理对大豆子叶节丛生芽再生的影响,再从中选取代表性的硼酸浓度处理诱导期转染的大豆,观察三种硼酸浓度对大豆再生丛生芽转基因的影响,结果表明不加入硼酸时表现为严重缺硼症状,不仅生长点没有长出,而且根的生长也受到严重抑制。

结果表明高浓度硼酸有较多的愈伤组织形成,外植体短期内容易死亡,不利于转基因丛生芽的再生。

适宜浓度硼酸培养基诱导的大豆丛生芽长势最好,而且转基因效率也高达3.3%。

对大豆抗性幼苗的根和叶片分别采用PCR、逆转录PCR和Southern blotting等方法进行筛选与鉴定,结果均获得阳性幼苗,证明外源基因已经成功转入大豆基因组中。

【英文摘要】Plant genetic engineering techniques have unprecedented potential for crop improvement. The technique ofgenetic transformation has been applied in the improvement of seed quality and disease resistance in soybean. Based on the principle and advatages of transgenetic technology the agrobacterium-mediated technique was eventually chosed as the basic transformation method. Sterile seedling, explant choice, agrobacterium infection and coincubation, and concentration of plant hormone during the training period were tried in the investigation of plant regeneration, in order to optimize the medium for regeneration and greatly improve the transgenic efficiency.The agrobacterium-mediated transgenic technique combined with the treatment of boric acid was studied for the transformation of foreign gene Bt to explant, soybean cotyledon nodes. 11 different boric acid concentration processing multiple shoot of soybean cotyledons section were chosen, then transfomed soybeans during the induction period were treated seperately by the concentration of typical boric acid. The results showed that the transformation seedlings without boric acid had no growing point, and the roots growth were also severely restrained.At the same time,the high boric acid concentration growed more callus, the explants short-term easily died, which were not conducive to the regeneration of transformed multiple shoots. However,the shoots regeneratedfrom the explants were multiplied best at appropriate boric acid concentration, and the transformation ratio reached 3.3%. Regenerated seedling were screened by genomic PCR amplification and resistant seedlings on inductive medium was obtained and proved to be positive by reverse PCR and Southern blotting. It was demonstrated that the target gene had been transformed into the soybean genome.【关键词】大豆转基因农杆菌硼酸丛生芽【备注】索购全文在线加好友：1.3.9.9.3.8848同时提供论文写作一对一指导和论文发表委托服务【英文关键词】Soybean Transgene Agrobacterium Boron acid Multiple shoots 【目录】改良的大豆子叶节转基因方法中文摘要4-5Abstract5引言10-12第一章综述12-28 1 大豆再生体系的建立12-13 1.1 大豆器官的发生和植株再生12-13 1.2 大豆体细胞胚胎发生和植株再生13 2 大豆遗传转化的方法13-17 2.1 农杆菌侵染法13-14 2.1.1 农杆菌介导大豆基因转化的进展13-14 2.1.2 农杆菌转化大豆的影响因素14 2.2 基因枪转化法14-15 2.3 种质转化法15-17 2.3.1 花粉管通道法15-16 2.3.2 子房注射法16-17 2.4 其他转基因方法的应用17 3 大豆基因转化的优选方案17-23 3.1 大豆种子的消毒17-18 3.2 大豆种子的萌发18 3.3 外植体的选择18-19 3.4 预培养对大豆丛生芽诱导的影响19 3.5 大豆转化的主要影响因素19-20 3.5.1 外植体的切取方式19 3.5.2 侵染时间的选择19-20 3.5.3 共培养时间20 3.5.4 其他影响因素20 3.6 大豆生长各时期培养基的选择20-22 3.6.1 丛生芽诱导培养基的选择21 3.6.2 丛生芽生长培养基的选择21-22 3.6.3 生根培养基的选择22 3.6.4 抗性再生幼苗的移植22 3.7 抗性芽的筛选22-23 4 植物中硼的作用23-25 4.1 土壤中硼的含量及分布23 4.2 硼胁迫对植株生长的影响23-24 4.2.1 低硼胁迫下植物的影响23-24 4.2.2 高硼胁迫对植物的影响24 4.3 硼参与细胞壁的结构及功能24-25 4.3.1 硼参与细胞壁的结构24-25 4.3.2 硼的功能25 4.3.2.1 硼对糖类代谢及其运输的影响25 4.3.2.2 硼对蛋白质和核酸代谢的影响25 5 目的基因的转化和特点25-27 5.1 目的基因的直接转化法25-26 5.2 目的基因—抗虫基因26 5.2.1 抗虫基因Bt 的致病机理26 5.2.2 抗虫基因的特点26 5.3 抗虫基因的应用26-27 6 转基因技术的应用前景27-28第二章大豆子叶节丛生芽的诱导28-33 1 材料与方法28-30 1.1 材料28 1.1.1 大豆品种28 1.1.2 培养基28 1.2 方法28-30 1.2.1 无菌外植体的建立28 1.2.2 外植体的萌发28 1.2.3 大豆子叶节丛生芽的诱导28-30 2 结果与分析30-32 2.1 酒精消毒时间对大豆萌发的影响30 2.2 不同萌发培养基对大豆萌发的影响30-31 2.3 植物激素的不同种类和浓度对大豆子叶节诱导的影响31-32 3 讨论32-33第三章硼对大豆子叶节丛生芽的影响33-37 1 材料与方法33 1.1 材料33 1.2 方法33 1.2.1 无菌外植体的建立33 1.2.2 不同硼酸浓度诱导培养基的丛生芽诱导33 2 结果与分析33-35 2.1 硼酸浓度对丛生芽数量的影响33 2.2 硼酸浓度对丛生芽生长状况的影响33-35 3 讨论35-37 3.1 缺硼对植物细胞壁和生物膜的影响35 3.2 硼对细胞成分伸展蛋白的影响35-36 3.3 硼和其它元素的平衡作用36-37第四章硼介导的外源基因(Bt)的转化37-45 1 材料与方法37-41 1.1 材料和试剂37-38 1.1.1 植物材料37 1.1.2 目的基因和菌种37 1.1.3 培养基37 1.1.3.1 LB 固体培养基37 1.1.3.2 YEP 液体培养基37 1.1.3.3 植物基本培养基37 1.1.4 试剂37-38 1.1.4.1 碱法提取质粒的试剂37-38 1.1.4.2 50×核酸电泳缓冲液TAE38 1.1.4.3 TE 缓冲液38 1.1.4.4 试剂盒38 1.2 实验方法38-41 1.2.1 菌种的复苏38 1.2.2 碱法少量快速抽提质粒DNA38 1.2.3 质粒的酶切鉴定38-39 1.2.4 大豆外植体的侵染39 1.2.5 侵染后外植体的培养39 1.2.6 大豆叶片总RNA 的提取39-40 1.2.7 逆转录试验40 1.2.8 Bt 基因的分子生物学检测40-41 1.2.8.1 PCR 检测40-41 1.2.8.2 逆转录PCR 检测41 1.2.8.3 Southern blotting 检测41 2 结果与分析41-43 2.1 菌种的鉴定41-42 2.2 PCR 和逆转录PCR 检测结果42-43 2.3 Southern blotting 检测结果43 3 讨论43-45第五章结论与展望45-48 5.1 大豆子叶节诱导体系45 5.2 硼的选择对大豆基因转化的影响45 5.3 外源基因Bt 的转化方法与表达检测45-46 5.4 问题与展望46-48参考文献48-57攻读硕士学位期间发表的学术论文57-58常用词缩写表58-59致谢59-60。