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仪器分析实验报告

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仪器分析实验报告

荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量

院系：化学化工学院

专业年级: 2013级应用化学

姓名: 马芳

学号: 41307253

2015年11月12日 一、实验目的

1、学习荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的分析原理；

2、掌握荧光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B2的方法。

二、实验原理

1、维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶。维生素B2易溶于水二不易溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

2、维生素B2水溶液在430~440nm蓝光或紫外光照射下回发生绿色荧光，荧光峰在535nm，在pH=6~7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失。

3、多维葡萄糖中含有维生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中维生素C和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B2的测定。 维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。

4、荧光分析法：常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。 在稀溶液中荧光IF与物质的浓度c有以下的关系：

IF=2.303φI0εbc

(φ：量子产率，I0：入射光强度，ε：荧光分子的摩尔吸光系数，b：液槽厚度)

当实验条件一定时，荧光强度IF与荧光物质的浓度c成线性关系：IF=Kc

5、荧光光谱：

（1）激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。

（2）发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。

6、荧光分析仪器

（1）常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成

三、实验仪器与试剂 荧光光度计

5 mL移液管1只，2 mL移液管1只， 50 mL容量瓶10只，10.0μg·mL-1维生素B2标准溶液（置阴暗处保存），冰乙酸（AR），多维葡萄糖粉试样。

四、实验步骤

1、打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器，预热；

2、在6个干净的50 mL容量瓶中，用吸量管分别吸取0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00mL的10.0μg·mL-1维生素B2标准溶液，再分别加入2.00 mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。得到不同浓度的溶液分别是：0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6μg·mL-1的维生素B2溶液；

3、仪器初始化完毕后，在比色皿中装入0.3μg·mL-1的维生素B2溶液，在工作界面上选择测量项目（并设置适当的仪器参数：如灵敏度＝2，入射缝宽和出射缝宽均为10nm等）：

（1）固定发射波长为526nm，扫描激发波长（范围是400~480nm），记录所得数据

（2）再固定激发波长为452nm，扫描发射波长（范围是500~550nm），记录所得数据

4、标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定：根据步骤3中所得数据，确定激发波长为452nm，发射波长为535nm，将之前配置的0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6μg·mL-1的维生素B2溶液，从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度，每种各测量三次，记录所得数据 5、未知试样的测定：用电子天平准确称取0.15~0.20 g多维葡萄糖粉试样，用少量水溶解后转入50 mL容量瓶中，加2.00 mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。用测定标准系列时相同的条件，平行测量其荧光强度3次，记录所得数据；

五、数据处理

1.由实验步骤3所得最大发射波长为535nm，最大激发波长为452nm。2.用标准系列溶液的荧光强度绘制标准工作曲线

浓度（µg/mL） 1 2 3 平均

0.1 86 85.79 85.67 85.82

0.2 161.1 161.5 160.3 161.0

0.3 250.2 250.4 249.7 250.1

0.4 326.9 326.5 326.1 326.5

0.5 399.4 399.1 400.8 399.8

0.6 481.7 483.2 481.7 482.2

由图可知，R2=0.9994，证明线性关系良好，可用于计算待测样浓度

3、未知样品浓度的测定： y = 793.6x + 6.353R² = 0.999010020030040050060000.10.20.30.40.50.60.7称取的多维葡萄糖粉质量m1=0.1755g，m2=0.17g,m3=0.1767g

试样 荧光强度① 荧光强度② 荧光强度③ 荧光强度平均

1 153.1 152.2 151.5 152.3

2 152.8 152.8 151.4 152.3

3 152.5 152.6 151.2 152.1

由标准曲线得出的线性方程y=793.66x+6.3533得

C1=0.1839µg/mL,C2=0.1839µg/mL,C3=0.1836µg/mL

C(平均值)=0.1838µg/mL

标准偏差=1.732*10-4

相对标准偏差=1.732*10-4/0.1838*100%=0.0942%

所以多维葡萄糖粉中维生素B2的含量

试样一的含量=(0.1839×50×10-6)/0.1767×100％=0.00520％

试样二的含量=(0.1839×50×10-6)/0.1755×100％=0.00524％

试样三的含量=(0.1836×50×10-6)/0.1747×100％=0.00525％

平均值=0.00523%

标准偏差=2.646*10-5

相对标准偏差=2.646*10-5/0.00523%=0.0506

六、实验反思

本次实验比较简单，完成得较成功，在配置溶液上比较准确，实验结果也,较好，在标准曲线中的方差为0.9994。但在实验中还应注意以下几个细节：

1、在实验中，激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键，我们应该固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长；

2、在使用比色皿时，因为比色皿是四面透光型的，所以不要用手直接触摸比色皿表面，应握住侧棱。

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核磁仪器实验报告(3篇)

核磁仪器实验报告(3篇)

第1篇

一、实验目的

1. 了解核磁共振波谱仪的基本原理和结构。

2. 掌握核磁共振波谱仪的操作方法和数据处理技巧。

3. 通过核磁共振波谱分析，鉴定未知化合物的结构。

二、实验原理

核磁共振波谱法（NMR）是利用原子核在强磁场中发生共振吸收电磁波的现象，通过分析共振吸收的频率、强度和峰形等，来研究物质的分子结构、化学组成和动态特性。核磁共振波谱仪由磁体、射频发射器、探测器、放大器和计算机等组成。

三、实验仪器与试剂

1. 仪器：核磁共振波谱仪、核磁管、样品管、计算机、数据处理软件等。

2. 试剂：未知化合物样品、四甲基硅烷（TMS）作为内标物、去离子水等。

四、实验步骤

1. 样品准备：将未知化合物样品溶解于适当溶剂中，配制成一定浓度的溶液，并加入少量TMS作为内标物。

2. 核磁共振波谱仪操作：

a. 打开核磁共振波谱仪，预热至工作温度。

b. 调整样品管，使其位于磁场中心。

c. 设置实验参数，如扫描频率、扫描范围、脉冲序列等。

d. 开始扫描，记录核磁共振波谱数据。

3. 数据处理与分析：

a. 将核磁共振波谱数据导入计算机，利用数据处理软件进行分析。

b. 分析核磁共振波谱图，识别峰位、峰形、峰面积等信息。

c. 根据核磁共振波谱图，推断未知化合物的结构。 五、实验结果与分析

1. 核磁共振波谱图分析

a. 1H NMR谱图：观察到多个峰，根据峰位、峰形和峰面积，推断未知化合物中氢原子的化学环境。

b. 13C NMR谱图：观察到多个峰，根据峰位和峰形，推断未知化合物中碳原子的化学环境。

c. DEPT谱图：根据峰形，判断碳原子连接的氢原子数目。

d. COSY谱图：根据峰的连接关系，推断核之间的化学键。

e. NOESY谱图：根据峰的连接关系，推断核之间的空间距离。

2. 未知化合物结构鉴定

根据核磁共振波谱图分析结果，推断未知化合物可能的结构，并与已知化合物进行比对，最终确定未知化合物的结构。

仪器分析实验5-紫外可见光谱分析

仪器分析实验5-紫外可见光谱分析

仪器分析实验报告 PB15030785 齐燕处 2018.4.10

实验五 色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的紫外吸收光谱分析

一、 实验目的

1. 掌握紫外-可见分光光度计的工作原理和基本操作。

2. 掌握紫外-可见吸收光谱的绘制（包括导数光谱）以及定量测定方法。

3. 掌握。

4. 了解氨基酸类物质的紫外吸收光谱特点。

二、 实验原理

1. 紫外-可见吸收光谱法测定蛋白质含量的基本原理

紫外-可见吸收光谱法是根据溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区

辐射能的吸收来研究物质的组成和结构的方法，也称作紫外和可见吸收广度法，

它包括比色分析法和紫外-可见分光光度法。

紫外-可见分光光度法属于吸收光谱法，分子中的电子总是处在某一种运动状

态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。电子由于受到光、热、

电等的激发，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。当这些电子吸收了外来

辐射的能量，就从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。

图1 电子跃迁示意图

物质对不同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的

入射光的波长，并纪录该物质在每一波长处的吸光度(A),然后以波长为横坐标，

以吸光度为纵坐标作图，这样得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。

当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度I。与透过光强度I之比的

对数与该物质的浓度c及样品池厚度b成正比。其数学表达式为:

此式为Lambert-Beer定律，是分光光度法定量分析的基础，其中A为吸光度。

由于不同物质具有不同的分子结构，对不同波长的光会产生选择性吸收，

具有不同的吸收光谱，因而，我们可以利用紫外-可见吸收光谱法对物质结构进

行鉴定和进行定量分析、根据被测量物质分子对紫外-可见波段范

围仪器分析实验报告 PB15030785 齐燕处 2018.4.10

(150~800nm)单色辐射的吸收或反射强度来进行物质的定性、定量或结构分析

仪器分析实验总结

仪器分析实验总结

仪器分析实验总结

1014061525 虞梦娜

一、红外光谱仪实验报告

1. 仪器结构

仪器设备：SHIMADZU IRPresting-21型傅立叶变换红外光谱仪

SHIMADZU IRPresting-21

仪器结构：

傅傅立叶变换红外光谱仪的工作原理图

固定平面镜、分光器和可调凹面镜组成傅立叶变换红外光谱仪的核心部件－迈克尔干涉仪。由光源发出的红外光经过固定平面镜反射镜后，由分光器分为两束：50％的光透射到可调凹面镜，另外50％的光反射到固定平面镜。

可调凹面镜移动至两束光光程差为半波长的偶数倍时，这两束光发生相长干涉，干涉图由红外检测器获得，经过计算机傅立叶变换处理后得到红外光谱图。

IRPresting-21型傅立叶变换红外光谱仪具300入射迈克尔逊密闭型干涉仪，单光束光学系统，空冷陶瓷光源，镀锗KBr基片分束器，温度可调的DLATGS检测器，波数范围7,800～350cm-1，S/N大于40000∶1（4cm-1，1分钟，2100cm-1附近，P—P），具有自诊断功能和状态监控器。可收集中红外、近红外、远红外范围光谱。

常用红外光谱-红外光谱仪

①棱镜和光栅光谱仪

光栅光谱仪

属于色散型光谱仪，它的单色器为棱镜或光栅，属单通道测量，即每次只测量一个窄波段的光谱元。转动棱镜或光栅，逐点改变其方位后，可测得光源的光谱分布。随着信息技术和电子计算机的发展，出现了以多通道测量为特点的新型红外光谱仪，即在一次测量中，探测器就可同时测出光源中各个光谱元的信息。

②傅里叶变换红外光谱仪 它是非色散型的，核心部分是一台双光束干涉仪，常用的是迈克耳孙干涉仪。当动镜移动时，经过干涉仪的两束相干光间的光程差就改变，探测器所测得的光强也随之变化，从而得到干涉图。

傅里叶变换红外光谱仪

傅里叶变换光谱仪的主要优点是：

①多通道测量使信噪比提高；

②没有入射和出射狭缝限制，因而光通量高，提高了仪器的灵敏度；

仪器分析实验报告2

仪器分析实验报告2

荧光分析法测定邻羟基苯甲酸和间羟基苯甲酸

一、实验目的

1.学习荧光分析法的基本原理和操作。

2.掌握邻间羟甲基苯甲酸的荧光性质。

二、实验原理

使用荧光光度计测定邻—羟基苯甲酸(亦称水杨酸)和二组分混合物的荧光强度,邻—羟基苯甲酸(亦称水杨酸)和间—羟基苯甲酸分子组成相同,均含一个能发射荧光的苯环,但因其取代基的位置不同而具不同的荧光性质。在pH= 12的碱性溶液中,二者在310nm附近紫外光的激发下均会发射荧光;在pH= 5. 5的近中性溶液中,间—羟基苯甲酸不发荧光,邻—羟基苯甲酸因分子内形成氢键增加分子刚性而有较强荧光,且其荧光强度与pH= 12时相同。利用此性质,可在pH= 5. 5时测定二者混合物中邻羟基苯甲酸含量,间—羟基苯甲酸不干扰。另取同样量混合物溶液,测定pH= 12时的荧光强度,减去pH= 5. 5时测得的邻—羟基苯甲酸的荧光强度,即可求出间—羟基苯甲酸的含量。

三、仪器与试剂

仪器：

日立M850型荧光分光光度计；

10 ml 比色管；

分度吸量管。

试剂：

邻羟基苯甲酸标准溶液：60 ug/ml（水溶液）；

间羟基苯甲酸标准溶液：60ug/ml（水溶液）；

Hac-NaAc缓冲溶液：47gNaAc和6g冰醋酸溶于水并稀释至1L，得pH5.5的缓冲液；

NaOH溶液：0.1 mol/L。

四、实验内容与步骤

配置标准系列和未知溶液

1、分别移取0.40,0.80,1.20,1.60,和2.00 mL邻羟基苯甲酸溶液于已编号的10mL比色管中，各加入1.0mLpH 5.5 HAc-NaAc缓冲液，用去离子水稀释至刻度，摇匀备用。

2、分别移取0.40,0.80,1.20,1.60,和2.00 mL间羟基苯甲酸溶液于已编号的10

mL比色管中，各加入1.20 mL 0.1 mol/L NaOH溶液，用去离子水稀释至刻度，摇匀备用。

3、取未知溶液各2.0 mL于10 mL比色管中，其中一份加入1.0 mL pH 5.5的HAc-NaAc缓冲溶液，另一份加入1.2 mL 0.1 mol/L NaOH溶液，均用去离子水稀释到刻度备用。