【大学课件】仪器分析实验

荧光物质的浓度c等有关，可表示为：
IF= K F I0 bc
式中：K为比例常数，与仪器性能有关； 为摩尔吸光系数；b为 液层厚度。 当仪器参数固定后，以最大激发波长的光为入射光，测定最大 发射波长时的荧光强度IF与荧光物质的浓度c成正比。
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乙酰水杨酸（ASA，即阿司匹林）水解能生成水杨酸
（SA），而在乙酰水杨酸中，或多或少都存在着水杨酸。 由于两者都有苯环，也有一定的荧光效率，因而在以三氯 甲烷为溶剂的条件下可用荧光法进行测定。从乙酰水杨酸 和水杨酸的激发光谱和荧光光谱图中可以发现：乙酰水杨 酸和水杨酸的激发波长和发射波长均不同，利用此性质， 可在各自的激发波长和发射波长下分别测定。
• 1、在荧光测定中，为什么激发光的入射与荧光的接收不在一条 直线上，而是呈一定的角度。
• 2、从乙酰水杨酸和水杨酸的激发光谱和发射光谱曲线，解释本 实验可在同一溶液中分别测定两种组分的原因。
• 3、荧光光度计与分光光度计的结构及操作有何异同？ • 4、溶液环境的哪些因素影响荧光发射？
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• 三、仪器与试剂
• 仪器： Cary Eclipse荧光光度计，容量瓶，移液管
• 试剂：乙酰水杨酸、水杨酸、三氯甲烷、乙酸均 为A.R级， 阿司匹林药片
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• 四、实验步骤
• 1）4.00μg/ml乙酰水杨酸和7.50μg/ml水杨酸使用液的配制 • 2）激发光谱和荧光光谱的绘制 • 3）标准曲线的制作 • 4）样品的分析
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• 六、注意事项
1、比色皿使用之前应清洗干净。若比色皿很脏，清洗方法为：先 将比色皿置于铬酸洗液中浸泡半小时左右，再用蒸馏水洗净， 凉干留用。
2、比色皿用完之后，应先用无水乙醇清洗，后再用蒸馏水洗净， 凉干后收于比色皿盒中。
3、定期清理仪器的比色部分，以保持仪器内部的整洁和洁净。
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• 七、思考题
荧光物质的最大激发波长（λex）和最大荧光波长（λem）是 鉴别物质的根据，也是定量测定时的最灵敏的条件。
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• 一、实验目的
• 1、学习荧光分析法的基本原理和仪器的操作。 • 2、学习荧光分析法进行多组分含量分析的原理及方法。
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• 二、基本原理
• 在稀溶液中，荧光强度IF与入射光强度I0、荧光量子效率F以及
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• 五、结果与讨论
• 1、从绘制的水杨酸和乙酰水杨酸激发光谱和发射光谱图上，确定 它们的最大激发波长和最大发射波长。
水杨酸：最大激发波长 nm；最大发射波长
nm
乙酰水杨酸：最大激发波长
nm；最大发射波长 nm
2、分别绘制水杨酸和乙酰水杨酸标准曲线，并从标准曲线上确定 试样溶液中水杨酸和乙酰水杨酸的浓度，并计算每片阿司匹林药 片中它们的含量（mg）。
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荧光分光光度计的结构
发光源：采用高压氙灯。
试样池：荧光分析用的试样池需用低荧光材料，常用石英池， 形状为四面透光的方形。
检测器：荧光的强度比较弱，因此要求检测器有较高的灵敏度， 常用光电倍增管。
单色器：采用光栅作为单色器。
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• 激发光谱和荧光光谱
任何发射荧光的物质都具有两个特征光谱，即激发光谱 （excitation spectrum）和荧光光谱(fluorescence spectrum)。它们 是荧光分析中定性和定量的基础。
仪器分析实验
分子荧光法测定水杨酸和乙酰水杨酸
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Cary Eclipse分子荧光光谱仪
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分子发光分析法
荧光分析（fluorescence analysis） 磷光分析（phosphorescence analysis） 化学发光分析（chemiluminescence analysis） 该类分析方法与吸收分光光度法有密切关系。
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荧光分析法的应用
荧光分析可应用于物质的定性检测及定量分析。
荧光法主要应用在医学检验、生物医学、药物、环境监测、食 品分析等方面，尤其对体内活性物质及药物代谢物的测定更为 重要。
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• 荧光分析法的特点
1）灵敏度高，检出限为10-7-10-9g/ml，比紫外可见分光光度法 高10~1000倍。 2）荧光法的选择性强，能吸收光的物质并不一定能产生荧光， 且不同物质由于结构不同，虽吸收同一波长，产生的荧光强度 也不同。 3）它还有用样量少、操作简便等的优点。 荧光法的缺点是，由于许多物质不发射荧光，因此使它的应用范 围受到限制。