农杆菌介导的植物遗传转化研究进展

枣树遗传转化研究进展周义杰;姜梦嫣;闫希焕;高亭豪;杨明峰;马兰青【摘要】[目的]枣树是中国第一大干果树种,具有重要的经济价值和生态价值.枣树长期面临着病害严重、育种缓慢等问题,急需定向培育优良品种.[方法]枣树遗传转化一般使用农杆菌介导法,通过对遗传转化过程中的各因素进行优化,可以有效提高遗传转化效率.得到转基因植株后要验证目的基因是否整合到植物基因组并能够发挥预期的功能,验证通过后再进行后续的炼苗移栽等工作.[结果]通过枣树遗传转化试验,可以定向改良枣树品种,缩短育种年限,培育出符合实际需求的新品种.[结论]综述中国枣树遗传转化的方法和成果,总结比较枣树遗传转化过程中各个影响因素的作用,为利用基因工程手段进行枣树品种改良提供借鉴.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2019(034)001【总页数】6页(P107-112)【关键词】枣树;遗传转化;转化验证【作者】周义杰;姜梦嫣;闫希焕;高亭豪;杨明峰;马兰青【作者单位】北京农学院植物科学技术学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京102206;北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京102206;北京农学院植物科学技术学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京102206;北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京102206;北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京102206;北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京102206;北京农学院北京林果业生态环境功能提升协同创新中心,北京102206【正文语种】中文【中图分类】Q943.2枣树(Ziziphus jujuba)为鼠李科(Rhamhaceae)枣属(Ziziphus Mill.)植物，起源于黄河中下游[1]，至今已经有3 000多年的栽培历史[2]，是中国重要的果树树种之一，也是中国第一大干果树种。

利用转基因技术对农作物性状进行改良是目前转基因技术在农业上的重要应用，该技术可以突破物种间的遗传障碍、跨越物种间的不亲和性、丰富作物的基因资源，从而达到改良农作物性状的目的[1]。

转基因玉米是全球种植面积较大、商业化较早的转基因作物之一，其遗传转化一直备受人们关注[2~8]。

到目前为止，虽然对农杆菌介导玉米的遗传转化有很多报道，但大多以幼胚等二倍体为受体材料，且转基因植株需经若干代的自交筛选才能得到纯合的转基因植株，育种程序复杂。

随着单倍体和转基因技术的成熟，国内外开始了以单倍体为受体的转基因研究，并且在小麦[9]、水稻[10]、烟草[11]和亚麻[12]等植物上得到了成功应用。

玉米的胚芽鞘[13]和茎尖组织[14]等单倍体受体也已经实现了基因转化，但由于植株生长势弱，移栽不易存活，因而未能成为主流的转基因受体。

陈琦[15]利用玉米单倍体幼胚和成熟胚为受体材料进行转基因研究，开拓了单倍体转基因的新方向。

玉米单倍体的遗传转化是一个复杂过程，受到多种因素的影响。

侵染条件的优化对提高其转化效率具有重要作用。

通过继代可以让愈伤组织长时间保持胚性，而胚性愈伤组织是进行侵染的先决条件。

截至目前，该方面的报道内容多集中于如何高频率地诱导愈伤组织，而对于继代条件的研究很少。

菌株选择是影响转化效率的关键。

农杆菌菌株的侵染力在不同玉米基因型之间存在很大差异，因而，不同的玉米自交系对应存在着最为敏感的农杆菌菌株[16]。

权瑞党等[17]和庄志扬等[18]认为，高浓度的农杆菌有利于玉米细胞转化，但菌液浓度过高会导致转化率降低。

侵染时间过短，农杆菌未吸附或吸附的农杆菌少，会导致转化赵爱菊，陈希勇，高增玉，王江浩*（河北省作物遗传育种实验室，河北省农林科学院粮油作物研究所，河北石家庄050035）摘要：以玉米诱导系HHI69诱导玉米自交系获得的单倍体愈伤组织为受体材料，GUS 基因为报告基因，采用农杆菌介导法进行遗传转化，对影响转化效率的侵染条件进行了研究。

三叶草基因工程研究进展摘要 三叶草作为优良的牧草，具有营养丰富、品质优良、适口性好等特点。

现代生物技术的不断发展为三叶草育种和种质创新提供了新的技术手段，笔者从三叶草再生和遗传转化体系，转基因三叶草在品质改良、抗病性、抗虫性、抗逆性及作为植物反应器等方面的研究进展进行了全面综述，分析了三叶草基因工程研究中存在的主要问题，并对其应用前景和研究方向进行了展望。

关键词 三叶草 再生体系 转化体系 转基因中图分类号前言三叶草属，也称车轴草属，全球约250余种，原产亚洲南部和欧洲东南部。

野生种分布于温带及亚热带地区，为栽培历史较悠久的牧草之一，现已遍布世界各国，其中栽培面积最大的是西欧、北美、大洋洲和原苏联地区。

三叶草主要用作反刍动物的饲草饲料。

是一种世界性分布与栽培的优良豆科牧草。

该属在农业上有经济价值的有25种，其中最重要的约10种。

我国是世界上第2草地大国，三叶草在我国广泛种植，常见的野生种有白三叶、红三叶、草莓三叶草和野火球4种；引自国外的有杂三叶、绛三叶、地三叶和埃及三叶4种；目前栽培研究较多的是白三叶、红三叶及地三叶[1]。

三叶草具有生态适宜性强、侵占性强、耐践踏、利用年限长、营养丰富、产量高、耐粗放栽培管理、抗病虫危害和种植利用成本费用低等优点。

作为我国最重要的豆科牧草之一,三叶草不仅是重要的饲料作物,还在土壤改良、水土保持以及生态环境保护方面发挥着积极的作用。

但是,三叶草缺乏含硫氨基酸、较不耐旱、抗虫性差、易感染苜蓿花叶病毒等问题,常规育种难以解决,通过基因工程方法将目的基因导入三叶草是改良三叶草品质,增强其抗病、抗虫、抗逆能力的有效手段.近年来随着植物基因工程研究的进展,越来越多的转基因成功的报道也不断出现。

三叶草通过生物技术研究,可实现高蛋白基因、固氮基因、病虫害基因及抗逆性基因等转移,培育造福人类的牧草新品种，而必将会极大地促进畜牧业发展，促进地被覆盖和生态建设，对当地人民生活水平和生活环境的提高和改善具有重要的实践意义。

北方园艺2007(1):147～149・生物技术・梨组织培养与遗传转化研究进展谭雪辉,刘洪章(吉林农业大学园艺学院,长春130118) 摘　要:综述了梨树的组织培养技术和梨遗传转化研究取得的成绩。

侧重介绍了应用于梨树研究的叶片培养法、茎尖培养法两种主要的组织培养技术和以农杆菌介导法为主的遗传转化方法;详细介绍了培养基类型,生长调节剂,培养条件等对梨组织培养的影响;初步介绍了影响梨树遗传转化的因素以及存在的问题和展望。

关键词:梨;组织培养;遗传转化中图分类号:S661.203.6　文献标识码:B　文章编号:1001-0009(2007)01-0147-03 梨(Pyrus)属蔷薇科植物,有30个种。

我国梨栽培品种有白梨(P.bretschnei deri),秋子梨(suriensis),沙梨(P.py ri f olia)和西洋梨(munis),其中前三种为东方梨,原产我国。

梨是我国传统的果品。

我国梨的栽培历史悠久,是东方梨的主要生产国,是世界梨的原产中心之一。

梨的果实含有多种营养成分,如蛋白质,脂肪,糖,维生素以及多种矿质元素等,这些都是人体所必需的,因而深受人们的喜爱。

然而梨树在生产中还存在某些亟待解决的问题。

由于童期长和基因高度杂合两大特点使其传统的有性杂交育种成效低,工作量大。

如何缩短育种时间和提高育种效率成为梨树育种工作者长期追求的目标。

随着分子生物学,特别是组织培养和基因工程技术的不断进步,利用生物技术进行育种已成为可能。

现就梨组织培养和遗传转化研究进展作一综述。

1　组织培养早在20世纪30年代,T ukey(1935)进行梨的胚胎培养获得成功。

1975年,前苏联学者进行洋梨幼胚培养获得植株。

1979年赵惠祥等进行早熟系208×早酥梨杂种胚胎培养,得到比亲本更为早熟的优良单株,他还在1981年从锦丰梨胚乳培养诱导出完整植株。

1979年David和1981年赵惠祥从茎尖培养中,分别得到试管苗和完整植株。

XU E SHU TA N TA O学术探讨拟南芥的遗传转化河南农业职业学院刘晓丽魏楠摘要：通过构建重组表达载体，转化农杆菌制作浸染液，实现农杆菌介导法进行目的基因的拟南芥遗传转化，将目的基因转入到野生型拟南芥中。

通过筛选和鉴定后，得到阳性的转基因植株，最终得到纯合T3代转基因株系。

后续可以通过对纯合转基因株系和野生型拟南芥进行比较鉴定，即可推断目的基因在拟南芥中的功能。

关键词：拟南芥；遗传转化；实验一、实验材料（一）试验材料转基因所需的菌株：农杆菌EHA105；转基因所需的模式植物：野生型拟南芥；转基因所需的植物表达载体：pCAMBIA3301。

（二）试验试剂本实验所需试剂主要有：Mu⁃rashige Skoog（MS）培养基：M519（Phyto Technology Laboratories，LLC）；YEB、YEP液体培养基；YEP固体培养基；抗生素氯霉素（chlorampheni⁃col，Chl）、卡那霉素（kanamycin，Kan）；草铵膦（phosphinothricin，PPT）；v／v（1∶5）的次氯酸钠溶液；琼脂；蔗糖；表面活性剂silwet L－77等。

二、实验方法（一）超表达载体的构建采用质粒小提试剂盒提取扩增、测序结果均正确无误的pGM－T－目的基因的质粒，具体步骤如下：第一，取2ml过夜培养的含目的基因的大肠杆菌Trans5α转化菌液，12，000rpm 离心1min，吸除上清；第二，向留有菌体沉淀的离心管中加入150μl溶液P1（已加入RNase A和0.5％的TIANRed），使用涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀；第三，向离心管中加入150μl溶液P2，温和地上下翻转6～8次，使菌体充分裂解；第四，向离心管中加入350μl溶液P5，立即快速地上下颠倒12～20次，充分混匀，将出现絮状沉淀，然后，12，000rpm离心2min；第五，将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中，注意尽量不要吸出沉淀。

-----------------------------------Docin Choose -----------------------------------豆 丁 推 荐↓精 品 文 档The Best Literature----------------------------------The Best Literature综述文章编号：１００９－０００２（２００７）０４－０７１９－０４花生遗传转化的主要方法和研究进展刘峰１，２ｂ，李春娟２ａ，许婷婷２ａ，单世华２ａ，毕玉平２ｂ，万书波２ｃ１．山东师范大学生命科学学院，山东济南２５００１４；２．山东省农业科学院ａ．山东省花生研究所，山东青岛２６６１００；ｂ．高新技术研究中心，山东济南２５０１００；ｃ．山东省农业科学院，山东济南２５０１００［摘要］花生遗传转化研究对于花生品种改良、新品种繁育具有重要意义。

农杆菌介导的遗传转化法和基因枪法是花生遗传转化的主要方法。

随着对花生研究的深入开展，花生的遗传转化技术也越来越成熟。

介绍了农杆菌介导的遗传转化法和基因枪法在花生遗传转化研究中的应用现状及存在的问题。

［关键词］花生；遗传转化；农杆菌；基因枪［中图分类号］Ｑ９４３．２［文献标识码］ＡＭａｉｎＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＡｄｖａｎｃｅｓｏｆｔｈｅＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＰｅａｎｕｔＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎＬＩＵＦｅｎｇ１，２ｂ，ＬＩＣｈｕｎ－ｊｕａｎ２ａ，ＸＵＴｉｎｇ－ｔｉｎｇ２ａ，ＳＨＡＮＳｈｉ－ｈｕａ２ａ，ＢＩＹｕ－ｐｉｎｇ２ｂ，ＷＡＮＳｈｕ－ｂｏ２ｃ１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ２５００１４I２．ａ．ＳｈａｎｄｏｎｇＰｅａｎｕｔＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６１００Iｂ．Ｈｉｇｈ－ＴｅｃｈＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒIｃ．ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉｎａｎ２５０１００IＣｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｐｅａｎｕｔｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｔｈｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｌｅｇｕｍｅｃｒｏｐ．Ａ－ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐａｒｔｉｃｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔａｒｅｔｗｏｍａｉｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｍｅｔｈｏｄｓｏｎｐｅａｎｕｔｇｅ－ｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｍｏｒｅｅｆｆｏｒｔｓｗｅｈａｖｅｍａｄｅｔｏｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｐｅａｎｕｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｂｅｔｔｅｒｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｐｐｒｏａｃｈｅｓａｒｅｆｏｒｐｅａｎｕｔ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ，ｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｐａｒｔｉｃｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ，ａｎｄａｄｖａｎｃｅｓｏｆｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｐｅａｎｕｔｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｗｅｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｐｅａｎｕｔIｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎIＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓIｐａｒｔｉｃｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ花生是最重要的油料作物之一，我国花生的总产量居世界首位。

华南农业大学学报 Journal of South China Agricultural University 2023, 44(6): 843-853DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.202307001郭涛, 沈任佳, 王加峰. 水稻基因遗传转化方法研究进展[J]. 华南农业大学学报, 2023, 44(6): 843-853.GUO Tao, SHEN Renjia, WANG Jiafeng. Research progress on genetic transformation methods of rice[J]. Journal of South China Agricultural University, 2023, 44(6): 843-853.特约综述水稻基因遗传转化方法研究进展郭　涛 ，沈任佳，王加峰(华南农业大学 农学院/国家植物航天育种工程技术研究中心, 广东 广州 510642)摘要: 介绍水稻遗传转化方法的发展历程和科研成果，为水稻遗传转化体系的研究和应用提供借鉴。

从生物介导转化法和非生物介导转化法2类方法出发，介绍各种转化方法在水稻上的首次报道和重要进展并进行了展望。

生物介导转化法中，农杆菌Agrobacterium介导转化法通过侵染种胚、稻穗、愈伤组织和茎尖进行转化，种胚及其诱导的愈伤组织作为材料的转化体系较为成熟，稻穗和茎尖转化法则操作简便、转化再生周期短；此外，有研究尝试用根瘤菌Sinorhizobium和Rhizobium以及附着剑菌Ensifer adhaerens转化水稻。

非生物介导转化法中，物理方法转化法(基因枪法、电击法、花粉管通道法和显微注射法)是较为传统的转化方法，基因枪法应用较为成熟，花粉管通道法则取得较多育种成果；介质介导转化法中，纳米材料的应用正逐步成为研究热点。

水稻遗传转化体系的发展可从转化材料的筛选和优化介导转化的载体入手，同时将转化体系和DNA-free、单倍体诱导等技术结合起来，以提高转化效率和安全性，缩短转化再生周期。

2023年12月第43卷第6期广西糖业GUANGXI SUGAR INDUSTRYVol.43，No.6，Dec.20230引言甘蔗是全球第一大糖料作物，也是重要的能源作物，世界糖产量的75%来源于甘蔗，而我国85%以上的糖产量来源于甘蔗［1］，因此，保证糖料供应是保障国家蔗糖安全的重要举措。

甘蔗作为异源多倍体作物，遗传背景复杂，生长周期较长，进行传统育种困难较多，很难同时改变多种不良性状［2］。

目前我国登记的甘蔗品种较多，但商业化种植品种依然较单一，只有新台糖（ROC ）、桂糖和桂柳系列等［3］。

甘蔗育种主要目标为高糖、高产、抗病、抗虫、抗旱、宿根性长和适宜机械收割等，但通过常规育种很难达到目的。

转基因技术具有缩短育种时间、按需导入目的基因和避免常规育种出现大量基因重组所导致的复杂筛选过程等优势［4］。

通过转基因育种技术，在重要粮食作物、经济作物及园艺作物增产、抗逆和改善品质等方面已取得重大突破，培育了性状优异的小麦［5，6］、玉米［7］和水稻［8］等作物新品种。

由于甘蔗直接用于榨糖或制备能源燃料，没有人类直接食用过程，所以转基因甘蔗株系不会对人体造成负面影响。

因此，在国际上转基因甘蔗被认为是风险最低（I 级）的转基因作物，科研工作者已在不断探索基因工程在甘蔗上的应用前景，发现其具有巨大应用潜力［9］。

文章对植物的遗传转化方法和转基因技术进行系统综述，并讨论目前适合于甘蔗转基因育种的方案。

在此基础上阐述甘蔗通过转基因技术育种存在的困难，分析甘蔗转基因技术培育新品种的解决方案，针对存在的转化效率低、转基因株系鉴定结果不明确和愈伤组织培育易水渍化和褐化等问题，探讨解决方法，旨在为甘蔗遗传转化和转基因技术应用提供借鉴。

1转基因技术1.1农杆菌转化法农杆菌是一种土栖革兰氏阴性细菌，具有将Ti 质粒的一部分移动并整合到被感染植物细胞核中的天然能力［10］。

利用农杆菌的这种能力，Fraley 等［11］已通过其开发的缺乏肿瘤形成基因的改良农收稿日期：2023-10-28基金项目：广西高校中青年教师科研基础能力提升项目（2023KY1233）；广西农业职业技术大学校级科研项目（XKJ2316）通讯作者：黄振（1994-），男，讲师，主要从事甘蔗育种研究工作，E-mail ：*******************第一作者：黄堂伟（1988-），男，讲师，主要从事作物栽培及育种研究工作，E-mail ：*****************.cn甘蔗遗传转化与基因编辑技术研究进展黄堂伟1，许誉芝2，黄振1*（1.广西农业职业技术大学农业工程学院，广西南宁530007；2.广西大学农学院，广西南宁530004）摘要：甘蔗遗传背景复杂，采用常规育种方法进行甘蔗品种选育耗时较长，对亲本的要求也较高，杂交后代分离严重，且会携带一些不需要的基因。

植物学通报 2005, 22 (2): 231￣237Chinese Bulletin of Botany①国家自然科学基金项目（３０１７０６６６）资助。

②通讯作者。

Ａｕｔｈｏｒ　ｆｏｒ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ． Ｅ－ｍａｉｌ：　ｍｚｂａｏ＠ｍａｉｌ．ｈｚａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ收稿日期：２００３－１２－２５ 接受日期：２００４－０５－０８ 责任编辑：孙冬花，　于昕专题介绍月季的植株再生及遗传转化研究进展①高莉萍 包满珠②（华中农业大学园艺林学学院，　园艺植物生物学教育部重点实验室 武汉 ４３００７０）摘要 本文对近２０年月季植株再生和转基因研究进展进行了较为系统的回顾和总结。

月季通过器官和体细胞胚发生途径都能再生植株，但遗传转化主要是利用体细胞胚发生途径。

通过农杆菌介导法和基因枪法，外源基因如报告基因、抗病基因和改变花色的基因等已转化成功。

文章还对今后月季转基因研究的方向进行了讨论。

关键词 月季，再生，遗传转化Advances in Plant Regeneration and GeneticTransformation of RosesＧＡＯ　Ｌｉ－Ｐｉｎｇ ＢＡＯ　Ｍａｎ－Ｚｈｕ②（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，　Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｗｕｈａｎ　４３００７０）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｄｅｓｃｒｉｂｅｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｒｏｓｅ　ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎ　ｔｈｅ　ｌａｓｔ　２０　ｙｅａｒｓ．　Ｒｏｓｅ　ｐｌａｎｔｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｂｙ　ｂｏｔｈ　ｏｒｇａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｒ　ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ，　ｂｕｔ　ｓｏｍａｔｉｃ　ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｒｏｓｅ　ｐｌａｎｔｓ．　Ｆｏｒｅｉｇｎ　ｇｅｎｅｓ，　ｓｕｃｈ　ａｓ　ｒｅｐｏｒｔｅｒ　ｇｅｎｅｓ，　ｄｉｓｅａｓｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｅｎｅｓ　ｏｒ　ｃｏｌｏｒ－ｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ，　ｗｅｒｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　ｒｏｓｅｓ　ｖｉａ　ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉａ　ｏｒ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ．　Ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｉｅｓ　ｉｎ　ｒｏｓｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｕｔｕｒｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ　ａｒｅ　ａｌｓｏｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｒｏｓａ　ｈｙｂｒｉｄａ　Ｌ．，　Ｐｌａｎｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，　Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ月季（Ｒｏｓａ　ｈｙｂｒｉｄａ　Ｌ．）是世界上最重要的观赏植物之一。

转基因技术在大豆育种上的研究进展及发展趋势摘要：近年来，转基因技术在大豆上的研究重点主要集中在建立高效再生体系和稳定地遗传转化体系方面，随着遗传转化技术的发展，我国已获得了抗病、抗虫转基因的大豆植株并取得突破性进展。

本文就大豆遗传转化在受体系统(器官发生受体系统、体细胞胚胎发生受体系统、原生质体受体系统)以及转化方法(农杆菌介导法、基因枪法)等方面的研究进展情况进行了综述，并对今后大豆转基因研究方向进行了探讨。

关键词：大豆；遗传转化；转基因；农杆菌；基因枪1 大豆再生体系研究进展大豆的组织培养于20世纪60年代开始，一直到80年代分别建立了组织、细胞、原生质体水平的植株再生技术，为大豆的外源DNA导人提供了有效的受体系统。

1．1 大豆体细胞胚胎发生再生系统大豆体细胞胚胎发生本身繁殖快、单细胞起源、两极性等优点，是遗传转化的基础，不会出现嵌合体问题，而且体细胞胚团高密度高质量，遗传上稳定，可以一次获得大量植株；体细胞胚团可以在适宜的条件下保存，仍然具有再生能力，因此是基因枪和农杆菌转化的最适宜的受体系统。

大豆体细胞胚胎发生再生系统采用的外植体主要为未成熟子叶、胚轴、完整幼胚。

诱导培养基主要为Ms以及改良培养基，生长调节物质主要为2，4．D和NAA。

80年代初期，Christianson等旧1以幼胚轴为外植体，诱导体细胞胚胎发生，首先获得再生植株。

随后，Ranch等对2，4．D诱导的大豆未成熟胚的体细胞胚胎发生系统进行了较为详细的研究。

Lazzeri等用10mg．L～2，4．D诱导了大豆幼胚子叶的体细胞胚胎发生。

他们认为2，4一D诱导大豆体细胞胚胎发生虽然频率高，但形态不正常，难以萌发形成完整植株。

NAA诱导的大豆体细胞胚胎发生虽然频率低，但是形态正常，可以不经过愈伤组织而直接生成子叶期体细胞胚。

最后获得可育再生植株。

周思军等通过大豆幼胚培养，经过体细胞胚胎发生和组织培养获得再生植株，并对影响大豆体细胞胚胎发生的因素进行了系统研究。

农杆菌的活化培养及介导的遗传转化农杆菌的活化培养及介导的遗传转化一、目的要求通过实验掌握农杆菌的活化与培养技术与农杆菌介导获得目的基因的转化植株。

二、基本原理农杆菌共培养法最早是由Marton 等（1979 年）以原生质体为受体建立起来的，经过一系列改进后，目前已经成为最常用的转化方法。

共培养法是利用Ti 质粒系统，将农杆菌与植物原生质体、悬浮培养细胞、叶盘、睫段等共同培养的一种转化方法。

三、材料及方法1.含目的基因共整合载体或双元载体的根癌农杆菌。

2.植物幼苗。

（一）细菌培养液直接浸染法操作︰（1）无菌受体材料的准备︰叶片、睫段、胚轴、子叶等均可做受体材料，有两种来源。

取自无菌试管苗。

取自田间或温室栽培植株︰叶片、睫尖、睫段用蒸馏水冲冼1 遍后，70％乙醇洗45 秒，0.1％升汞消毒6～8 分钟，无菌水冲洗三遍，无菌滤纸吸干水分。

（2）受体材料预培养︰将无菌叶片剪成0.5cm×0.5cm 的小块或用6mm 打孔器凿成圆盘，无菌胚轴、睫切成约0.8～1cm 长的切段，接种在愈伤组织诱导或分化培养基上进行预培养，注意叶片近轴面向下︰预培养2～3 天，材料切口处刚刚开始膨大时即可进行侵染。

（3）农杆菌培养︰从平板上挑取单菌落，接种到20mL 附加相应抗生素的细菌培养液体培养基（pH7.0）中，在恒温摇床上，于27℃, 180r/ min 培养至OD600 为0.6～0.8。

取OD600 为0.6～0.8 的菌液，按1％～2％的比例，转入新配制的无抗生素的细菌培养液体培养基中，可在与上相同的条件下培养6 小时左右，OD600 为0.2～0.5 时即可用于转化；或同时加入100～500μmol/的AS；（4）侵染︰于超净工作台上，将菌液倒入无菌小培养皿中（可根据材料对菌液的敏感情况进行不同倍数的稀释）。

从培养瓶中取出预培养过的外植体，放入菌液中，浸泡适当时间（一般1～5 分钟，不同材料处理时间不同）。

番茄的遗传转化班级姓名学号摘要：本研究以小型番茄为试材,建立其以子叶、下胚轴为外植体的高效、稳定再生体系及遗传转化体系。

子叶外植体与农杆菌共培养后,经过诱导,根的再生，初步建立了农杆菌介导的遗传转化体系。

是目前最有效的途径之一。

农杆菌对植物释放的化学物产生趋化反应，向植物受伤组织集中。

经共培养后，受伤部位的化学诱导物透过农杆菌的细胞膜使Ti质粒上的Vir基因活化。

Vir基因产物使Ti 质粒上的T—DNA进入植物细胞，并整合到植物核基因组中。

插入在T—DNA 左右边界区内的目的基因也随之整合到植物染色体上，从而使目的基因在植物细胞中得到表达。

近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物中也得到了广泛应用。

关键字：番茄下胚轴子叶转化一、实验材料、试剂和仪器设备1.实验材料：番茄种子2.试剂：大量元素、氯化钙、微量元素、铁盐、有机成分、琼脂、蔗糖、蒸馏水、1mol∕LNaOH、6BA、NAA、升汞、蛋白胨、酵母粉、卡那霉素、75％乙醇3.仪器设备：天平、烧杯、量筒、移液管、药勺、称量纸、玻璃棒、吸耳球、PH 试纸、培养瓶、封口膜、橡皮筋、高压灭菌锅、电炉、标签纸、记号笔、滤纸、镊子、剪子、移液枪、枪头、酒精灯、培养皿二、实验步骤1.外植体的制备(1) MS培养基母液的配制按以下的成分与浓缩比例配制母液大量元素50mg∕L氯化钙50mg∕L微量元素1 mg∕L有机成分1 mg∕L蔗糖30 g∕L琼脂 6 g∕L(2)MS培养基的配置配制200ml的MS培养基，将所需要的试剂混合后加热溶解，用1mol∕LNaOH 调节PH至5.8，宁大勿小偏酸不凝固，然后分装到灭好菌的培养瓶中。

(3)高压灭菌将配制好的培养基、培养瓶、无菌水、有滤纸的培养皿灭菌(4)铺种子打开超净工作台紫外灯照射约30min，然后关闭紫外灯，打开超净工作台的风机。

先数好所需要的种子，放在一个小烧杯中，到入升汞，没过种子，五到六分钟。

然后回收升汞，把无菌水倒入摇晃，用灭菌好的无菌水洗3—4次，拿镊子灭菌，要灭透。

农杆菌介导microRNA1510a基因转化大豆的初步研究摘要：microrna（mirna）是生物体内普遍存在的、内源的、非编码的小分子单链rna，并被证明在植物抵抗生物和非生物胁迫中起着重要作用。

mirna1510a是课题组前期从大豆逆境胁迫mirna表达谱中挑选出的表达量明显上调的一个小rna。

本研究在构建mirna1510a表达载体基础上，以大豆品种吉育72为材料，利用农杆菌介导的子叶节遗传转化法将mirna1510a基因转入大豆中。

通过pcr检测，最终确定有3株阳性植株，转化率为1.5%。

该结果表明mirna1510a基因已成功转入大豆，为进一步分析mirna1510a调控大豆抗逆的分子机制奠定了基础。

关键词：大豆；mirna1510a基因；农杆菌介导法；pcr检测中图分类号：s565.1 文献标识码：a1 前言1.1 大豆的概述大豆，是最重要的高蛋白油料经济作物之一，但大面积盐碱、干旱土地的存在严重影响到人类对大豆这种农业经济作物的需求。

所以利用基因工程手段改良大豆的耐盐碱、干旱性状，达到利用盐碱、干旱土地的目的已经成为当前研究热点。

1.2 micrornas的概述microrna（mirna）是一类在生物体内普遍存在的、内源的、非编码的小分子单链rna，长度约为21～24nt。

1.3 植物遗传转化方法现代生物技术的研究和发展为通过基因工程改良植物品系提供了必要的前提，目前应用于大豆遗传转化的方法主要有基因枪转化法、农杆菌介导转化法、花粉管通道法、病毒介导转化（瞬时转染）、脂质体介导原生质体转化等[1]。

其中应用的最广泛的是基因枪法和农杆菌介导法[2]。

农杆菌介导的遗传转化方法，是利用根癌农杆菌对植物的侵染特性从而把外援基因导入植物基因组的方法。

因为其拷贝数低，整合完整，遗传比较稳定，受目的基因分子量的影响较小以及操作简便，广泛的应用于植物的遗传转化[3-4]。

2 实验材料和方法2.1 实验材料2.1.1 植物材料选择大豆品种为吉育72。