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sFat-1转基因猪对主要传染性疾病易感性的观察

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ｓ ａ一 转 基 因猪 对 主 要传 染性 疾病 易 感 性 的观 察 Ｆ ｔ１
华 文 君 ，刘 西梅 ，程 妮 ，乔 宪凤 ，郑 新 民
（ 北 省 农 业 科 学 院畜 牧 兽 医研 究 所 ，湖 北 武 汉 湖 摘 ４０６） ３０ ４

要 ：转 基 因 猪 可 能 因 为 外 源 基 因 导 人 造 成 体 质 损 伤 ，健 康 体 质 下 降 的 转 基 因猪 对 常 见 疾 病 的感 染 比率 有 可
Ｅ ＩＡ 检 测 试剂 盒 和核 酸 扩增 检 测 试剂 盒完 成 。在 阴 性猪 中猪 水 泡 病 感 染 比率 为 ５ ， 阳性 猪 感 染 比率 为 ２ ， ＬＳ ％ Ｏ ｓ ａ一 基 因 猪 对 猪 水 泡 病 的 易 感 性 显 著 提 高 ，另 外 ８种 疾 病 易 感 性 没 有 明显 差 别 。 阴 性 成 年 猪 的 死 亡 率 为 Ｆｔ １转
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福建 农 业学报 ２ （ ） １０ １ ３ ２ １ ６ ２ ：８ ～ ８ ，０ １
文 章 编 号 ：１ ０ —０ ８ （ ０ １ ２ １ Ｏ ４ ０ ８ ３ ４ ２ １ ）Ｏ — ８ ～Ｏ
关 键 词 ：转 基 因猪 ；ｏ ３ 肪 酸 去 饱 和 酶 ；易 感 性 Ｊ 脂 － 中图 分 类 号 ：Ｓ８ ８ ２ ５ ． ８ 文 献 标 识 码 ：Ａ
Ｍ ａｏ ｎ ｅ ｔ ｕ ｓａ ｅ ｕｃ ｐ ｉ ｌ ｏｓ ａ－ ａ ｓ ｅ ｉ ｉｓ ｊ ｒＩ ｆｃｉ ｓＤｉｅ ｓｓＳ ｓｅ ｔ ｅｔ Ｆ ｔ１Ｔｒ ｎ ｇ ｎ ｃＰ ｇ ｏ ｂ
能 超 过 正 常 生 产 猪 ，不 仅 使 猪 生 产 性 能 下 降 ，也 加 大 对 环 境 传 播 疾 病 。转 基 因 猪 对 主 要 传 染 性 疾 病 易 感 性 的 观 察 是 转 基 因猪 环 境 安 全 性 评 价 的一 项 重 要 研 究 内容 。本 试 验 对 ２ １头 阴性 试 验 对 照 猪 和 ２ Ｏ头 转 ｓ ａ一 基 因 猪 ９ Ｆ ｔ１ 种 主 要 传 染 性 疾 病 的感 染 情 况 进 行 了检 测 ，并 对 日常 饲 养 疾 病 感 染 情 况 进 行 了统 计 。 这 ９种 疾 病 分 别 是 ： 口蹄 疫 、猪 瘟 、蓝 耳 病 、猪 伪 狂 犬 病 、结 核 病 、猪 水 泡 病 、布 鲁 氏 杆 菌 病 、非 洲 猪 瘟 、肠 病 毒 性 脑 脊 炎 ，检 测 使 用
８ ，阳性 成 年 猪 的 死亡 率 为 ３ ％ ，阳性 猪 死 亡率 明 显 提 高 。测 试 结 果 表 明 有 一 部 分 转 ｓ ａ一 基 因 猪 体 质 下 降 ， ７ Ｆ ｔ１ 这 种 情 况 与 转 ｓ ａ １ 因猪 生 理 生 化 指 标 与 繁殖 性 能 测 试 结 果 相 符 合 ，ｓ ａ一 转 基 因猪 对 猪 水 泡 病 的 易 感 性 显 Ｆｔ 基 一 Ｆ ｔ１ 著 提 高 是 部 分 转 基 因 阳性 猪 肝 功 能 受 到 轻 度 损 伤 造 成 的 。
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猪转移因子-新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验

猪转移因子-新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验

ＸＮ ０ Ｇ Ｕ ＩＮ Ｎ Ｃ Ｎ
２ １ 年第 ８ ０ １ 期
猪转移因子 一 新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验
韦 建 刚
（ 西省 河 池 市 南 丹 县 水 产 畜 牧 兽 医局 ，广 西 河 池 ５ ７ ０ ） 广 ４ ２ ０
摘 要 ：猪转移 因子 一新必妥是从 猪体免疫器官 ｑ提取 的能够转移免 疫致敏信 息的低分子肽 一核苷 酸复合物 ，它能够增 强 －
１ ” 异地将供体的细胞免疫信息转移给受体 ，从而增强受体的 灭 活疫 苗可 以显 著提 高鸡 体 的抗体 滴度 ＿。马 凤龙 等发 现 鸡Ｔ Ｆ活疫 苗 和油 乳 剂灭 活 苗在 首 免 和加 强 免疫 时 均 具有 免 疫 功能 【，被誉 为 Ｔ细 胞活 性 的触 发 剂 、细胞 免疫 的增 ｌ ｌ 协 同作 用 ，能 显著 提 高免 疫 接 种鸡 的 体液 免 疫 应 答能 力 ， 强 剂 、细 胞免 疫调节 剂及干扰 素产 生启动 剂。 转 移 因子 Ｔ Ｆ含 多种 成 分 ，分 子 量小 ，无热 原 ，无抗 产 生较 高 滴度 的抗体 ，并 延 长抗体 高 峰期 ，使 之维 持 较长 原 性 ，无 毒副 作用 和无 种属 差异 ，是 一种 新 型而 又安 全 的 时间 。由于 Ｂ淋 巴细胞 在实 现体液 免疫 机能 时需 要 Ｔ淋 巴
显增 强粤 黄鸡 外周 血液 中 Ｔ淋 巴细胞 转化 率 。邹承 淑等 研 前 言 Ｈ ＭＶ Ｓ Ｆ 对 免 疫增 强剂 也称 免疫 佐 剂 ，是一 类 通过 非特 异 性途 径 究 发 现 人 巨 细 胞 病 毒 特 异 性 转 移 因 子 （ Ｃ — Ｔ ） Ｃ Ｆ可 调 提 高机体 对抗 原或 微 生物 特异 性反 应 的物质 。在 动 物生 产 Ｈ ＭＶ感 染小 鼠的脾 细胞 有 分 化增 殖作 用 。而且 Ｔ 节淋 巴细 胞细 胞 因子 的水平 ，张 方信 等 应用 特异 转 移 因子 业 中 ，为了使 动物 机体 的 免疫 功能维 持 平衡 ，防止病 原微 生 物感染发 病 ，需要增 强抗原 的免疫 原性 ，多年研 究认 为 ， 免 疫治 疗肿 瘤病 人后 发现 各 细胞 因子活 性显 著 增强 ，白细
转Fat-1基因猪外源基因遗传稳定性分析

转Fat-1基因猪外源基因遗传稳定性分析


因在猪 基 因组 中的整合 情 况 ， 统计传 代猪 转基 因阳性 比率 ， 与 自然基 因单等位 基 因正常遗 传 比率进
行差异 显著 性分 析 。结果显 示 ， Ｆ ， 代 传代 仔猪 Ｆ ａ ｔ —Ｊ基 因阳性 比 率 为 ５ ７ ． １ ４ ％， Ｆ 代 传代 仔 猪 阳 性 比率 为 ４ ６ ． ６ ７ ％ 。Ｆ 代公 猪外 源 Ｆ ａ ｔ 一 』基 因是 １拷 贝基 因 ， 传代 配 种母 猪使 用 非转 基 因母 猪 ，
转Ｆ ａ ｔ — 基 因猪 外 源 基 因 遗 传 稳 定 性 分 析
华 文君 ， 郑新 民， 华再 东 ， 毕延 震 ， 宋 忠旭 ， 任 红 艳
（ 湖 北 省 农 业 科 学 院 畜 牧 兽 医研 究 所／ 动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室 ， 湖北 武汉 ４ ３ ０ ０ ６ ４ ）
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｉ ｎ ｏ ｒ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｄ ａ ｔ ａ ｆ ｏ ｒ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｐ ｉ ｇ ｂ ｒ ｅ ｅ ｄ ｉ ｎ ｇ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｑ ｕ ａ ｌ ｉ ｔ ｙ ｎ ｅ ｗ ｍａ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｓ ａ ｎ ｄ
Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ｄ Ｖｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｈｕ ｂ ｅ ｉ Ａｃ ａ ｄ ｅ ｍｙ ｏ ｆ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ， Ｗｕ ｈ ａ ｎ ４ ３ ０ ０ ６ ４， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ Ｅ ｘ ｏ ｇ ｅ ｎ ｏ ｕ ｓ Ｇｅ ｎ ｅ Ｈｅ ｒ ｅ ｄ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ Ｓ ｔ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ｉ ｎ Ｆａ ｔ — Ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ Ｐ ｉ ｇ ｓ
转基因猪检测标准

转基因猪检测标准

转基因猪检测标准一、背景介绍转基因技术是指通过人工手段改变生物体的基因序列，以达到改善其性状或增强其功能的目的。

在农业领域中，转基因技术已被广泛应用于作物育种和畜牧业生产中。

其中转基因猪是一种被广泛研究的生物，其具有抗病能力、生长速度快等优点，因而备受关注。

但转基因猪也带来了食品安全等方面的问题，因此需要进行转基因猪的检测。

二、转基因猪检测方法1. PCR法检测PCR法检测是一种常用的转基因猪检测方法，其基本原理是通过PCR扩增转基因猪的DNA片段，再通过凝胶电泳等方法进行分析。

该方法具有灵敏度高、特异性好、重复性好等优点，且操作简便，成本低廉。

2. ELISA法检测ELISA法检测是一种常用的转基因猪检测方法，其基本原理是通过将转基因猪的特异蛋白质与酶标记反应，再通过比色反应等方法进行分析。

该方法具有灵敏度高、特异性好、适用范围广等优点，但需要专业的设备和技术，成本较高。

3. 基因芯片技术检测基因芯片技术检测是一种新兴的转基因猪检测方法，其基本原理是通过将转基因猪的DNA杂交到芯片上，再通过扫描技术进行分析。

该方法具有高通量、多样性强等优点，但需要专业的设备和技术，成本相对较高。

三、转基因猪检测标准1. 检测目标转基因猪检测应以检测样品中是否存在转基因猪为目标，同时应对样品中可能存在的其他污染物进行检测。

2. 检测方法转基因猪检测应采用PCR法、ELISA法、基因芯片技术等方法，其中PCR法检测应为主要方法，可以结合其他方法进行验证。

3. 检测指标转基因猪检测应针对不同转基因猪品种进行检测，主要检测转基因猪的DNA片段或特异蛋白质等指标。

4. 检测灵敏度转基因猪检测应具有较高的灵敏度，能够检测到样品中低至0.1%的转基因猪成分。

5. 检测特异性转基因猪检测应具有良好的特异性，能够准确地区分样品中的转基因猪和非转基因猪成分。

6. 检测结果判定转基因猪检测结果应根据实验数据进行判定，同时应结合样品来源、生产过程等因素进行综合分析。

猪PBD-1稳定转染细胞系的建立

猪PBD-1稳定转染细胞系的建立

猪PBD-1稳定转染细胞系的建立传统抗生素的广泛使用导致耐药菌株大量产生,特别是多重耐药菌的出现给感染性疾病的治疗带来了许多新的问题,因此寻找和开发无耐药性的新型抗菌药物对于畜牧业具有非常重要的现实意义。

近年来在生物体内发现的防御素类物质就具有这种特殊的抗菌活性,Ganz等将其命名为防御素(Defensins)。

猪的β防御素l(porcine β defensin 1,PBD-1)广泛分布于肝、呼吸道、胸腺、脾脏、脐带等多种细胞内,在猪防御系统中有重要作用,既可用作畜禽饲料添加剂,也可用于食品保鲜剂,还可开发成新的广谱抗菌药物,因此猪防御素的成功获取能带来极大的、经济效益。

但是,猪体内天然防御素表达量低、分子小,分离困难,化学合成防御素成本又太高,所以利用基因工程技术重组表达外源基因已成为获取目标蛋白的有效途径之一[3-7]。

本研究将猪PBD-1真核表达载体稳定转染marc-145细胞,通过单克隆筛选,建立了稳定的转基因细胞系,为进一步研究猪PBD-1的生物学特性及其在兽用生物制品上的应用奠定了基础。

1材料与方法1.1主要试剂转染试剂Lipofectamine 20XX年和筛选试剂G418均由1/ 6Invitrogen公司生产;DMEM高糖培养基、胎牛血清由Gibco公司生产;胰蛋白酶、PBS等为国产。

限制性内切酶EcoRI、BamH I、T4 DNA连接酶、TaqDNA聚合酶、DNA marker、DNA Gel Extraction Kit均购自华美生物工程公司;RNeasy Mini RNA 提取试剂盒由Qiagen(德国)公司生产;蛋白胨和酵母浸提液来自Oxoid公司;引物由上海生物工程公司合成。

1.2菌种、质粒和细胞大肠杆菌DH5α为本室保存,质粒pMD18-T 由TaKaRa公司提供。

质粒载体pIRES2-EGFP-PBD-1由本实验室构建。

marc-145细胞购自武汉中博生物股份有限公司,在本实验室传代保存。