鸭疫里氏杆菌分子生物学研究进展

（． 林 农 业 大 学 动 物科 技 学 院 ， 林 长 春 １０ １ ；． 林 省 敦 化 市 牧 业 管 理 局 ， 林 敦 化 １３ ０ ） １吉 吉 ３ １ ８２ 吉 吉 ３７ ０
摘 要 ： 疫里 氏杆 菌 （ ｉｍｅｅｌ ｎ ｔ ｅｔ ｒ Ｒ 感染 是 当前 严 重 危 害 养鸭 业 的 主要 传 染 病之 鸭 Ｒ ｅ ｒｌ ａ ａｉ ｓ ， Ａ） ａ ｐ ｉ
胶 内酶解 和 肽 质 量 指 纹 图 谱 分 析 ， ｗ１为 热 休 克 蛋 白 Ｈｓ２ ｐ ０家族成 员 ， 、 ３为转 座酶 ， Ｗ２ Ｗ 推测 它们 可 能与 里 氏杆 菌 的毒 力密 切相关 。
２ 耐药 相 关 因子 的研 究
细菌 耐药性 的产 生机 制分 为 自发性 基 因突 变 和 耐药基 因掺 人 ， 细菌 耐药基 因不 仅 由其 染色 体携 带 ， 还 常 由染 色体外 的质 粒 、 座子 （ｒｎ ｐ ｓｎ Ｔｎ 或 转 ｔａ ｓｏ ｏ ， ）
２ ３ 基 因 盒一 合 子 系 统 ． 整
蔡 秀磊口］ 用 Ｐ Ｒ技 术 对 鸭 疫里 氏杆 菌 浙 江 应 Ｃ 上研 究该 菌耐药 性产生 与传 播机 制 。整 合子 可变 区
扩增 得 到两 种 大 小 不 同基 因 盒 ， 长度 分 别 为 １ ０ ８ ４
ｂ （ｎ— 和 ２３ ２ｂ （ｎ— ） ＩＩ 中含 有 一 个 耐 ｐ ＩＩ Ａ） ５ ｐ ＩＩ 。 ｎ— Ｂ Ａ
白质与毒 力有关 ， 并且 证明 Ｖａ Ｄ１ 列仅 存 在于 含 ｐ 序 质 粒 的 Ｒ 菌 株 中 。Ｗｅ ｇ Ｓ Ｃ 等Ｌ 从 大 小 为 Ａ ｎ ４ ］
５ ６ｋ 的质粒 ｐ Ｆ ２中发 现一个 插 入 序列 元 件 Ｉ — ． ｂ Ｃ Ｃ Ｓ
Ｒ ｌ为 编码 毒 力 相关 类 蛋 白基 因， 且 为 首 次 在革 ａ， 并
１ 毒 力 相 关 基 因的研 究
Ｒ 感染是 一个 复杂 、 态 的 多 因子 作 用 过程 ， Ａ 动 涉及 众多 毒力基 因产物 即毒力 因子 的协 同作 用 。 目 前 国 内外对 毒力相关 基 因研 究 尚处于 起步 阶段 。
１ １ 质 粒 ．
异性表 达基 因 ， 筛选 到 ２个编码 蛋 白酶 的基 因 ， 即二
．
１ ６ 热休克 蛋 白 Ｈｓ ２ ． ｐ ０和 转座 酶
５ ５ｂ ５ ｐ的 ａｃ－Ｉ 因 ， ａ６ Ｉ基 编码 酰基 转 移 酶 ， 引起 细 菌 对 氨基糖 苷类药 物 耐药 ； 长度 为 ６ ３ｂ ３ ｐ的 ｃｔ ３基 ａＢ 因， 编码氯 霉素 乙酰转移 酶 ， 导对 氯 霉 素产 生耐 药 介
耐药 性标 记 ， 别 获得 遗 传 特 性 稳定 的 耐药 性 标 记 分
菌 株 ＲＡＣ Ｃ ｌ Ｅ ｙ） １型 ） Ｒ （ ｈ ｒ。 （ ， 和 ＡＥ（ ｒ Ｃ ｌ （ Ｅ ｙ， ｈ ） ２
型） 。鸭疫 里 氏杆 菌 血 清 １型 和 ２型双 耐 药 融 合 菌 株 的成 功构建 ， 为鸭 疫 里 氏杆 菌 新 型 疫 苗 的 开发 奠
种 中 性 金 属 蛋 白基 因 ， Ｓ ＳＰ 经 Ｄ － ＡＧＥ 和 Ｗｅｔｒ ｓｅｎ
起家 鸭、 、 鹅 火鸡 等多 种家禽 广 泛性 纤维 素 性 渗 出为 特征 的急性或 慢 性传染 病 。亦 有报 道 从 野禽 和 家养 猪 中分离 到本菌［ 。本病 目前呈 全球 性发 生 ， 】 ］ 发病 率
兰 阴性 菌 中发现 的插入序列 。
１ ２ 环化腺 苷一 ． 磷酸溶 血素一 唾液 酸蛋 白酶 Ｃ ａｔ ｒｓａＫ Ｃ等［ 建 立 了 Ｒ 基 因 文 库 ， 过 金 ５ Ａ 通
收稿 日期 ：０ ００ —６ ２ １ — ３２
酶 与致病 性 有 关 ， 为重 要 毒 力 因 子 。Ｒ 部 分 菌 株 Ａ
刘 燕 等［］ 用 双 向 电 泳 及 质 谱 技 术 对 血 清 ２ １应 。 型鸭 疫 里 氏 杆 菌 强 毒 株 及 其 体 外 传 代 ２ ０代 ０
（ Ａ２ Ｏ 的弱毒 菌株 外膜蛋 白进行 比较 蛋 白质 组学 Ｒ Ｏ） 研究 ， 获得重 复性 好 的差异 表达 蛋发现 等分子 生物 学方 面进 行研 究 。为 了更好 的预 防和控 制该 病 ， 文概 述 了近 年 来鸭 疫 里 氏杆 菌 论
分 子 生物 学研 究进展 ， 为进 一步研 究提供 参 考 。 关键 词 ： 疫里 氏杆 菌； 鸭 分子 生物 学 ； 鸭
中 图 分 类号 ： ８ ２ ６ ２ ￥ ５ ． １ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７ ５ ３ （ ０ ０ １ － ０ ４０ １ ０ — ０ ８ ２ １ ） １０ ７ — ５
性； 长度 为 ７ ２ｂ ９ ｐ的 ａｄ 基 因 ， ａ Ａ１ 编码 核苷转 移酶 ， 介导对 氨 基 糖 苷 类 药 物 耐 药 。 以上 结 果 表 明 ， ＲＡ 存在 与其他 细菌 同 源性 极 高 的 Ｉ型 整合 子结 构 ， 推 测认 为 与分离 菌株多 重耐 药性有 关 。 ２ ４ 生物膜 的研究 ． 很 多微 生 物 的 耐 药 性 与 生 物 膜 的 产 生 息 息 相 关［ １ 。ＨｕＱ Ｈ 等［ １ 现 ， Ａ 中 的生 物膜 对 抗 生 发 Ｒ 素和 去污剂 有很 好 的 抵抗 作 用 ， 时认 为 生 物膜 的 同
ｂｏ 分 析 ， 达 产 物 为 ３ ｕ的 唾 液 酸 蛋 白 酶 。 ｌｔ 表 ７ｋ
Ｃ ＭＰ可能 为 Ｒ 毒 力决 定 因子 ， ｃｍ 基 因为所 Ａ Ａ 其 ａ 和病死率均 较 高 ， 养 鸭业 造成 严 重经 济 损 失 。Ｒ 有 Ｒ 毒 株 所 共 有 。Ｃ 对 Ａ Ａ ＡＭＰ活 性 可 被 螯 合 剂 等 抑 血清型众多 ， 且各血清 型之 间无交 叉保 护力 。 目前公 制， 具有免疫 原 性 ， 可协 同产生 溶血作用 。 并 认有 ２ 个 型 （ ～ ２ １ １ １型） 并 不 断 有新 的血 清 型 被发 ， １ ３ 二 肽肽酶 Ⅳ （ ｐ 及锌 依赖肽酶 （ｄ ） ． ｄ ｐＩ Ｖ） ｚ ｐ 现 。 目前 国内外学者均致力 于本 病致病 机 理 、 ］ 耐药 郑娟 ］ 选 择 性 捕 获 转 录 序 列 （ Ｃ ＴＳ 技 术 用 ＳＯ ） 机理 、 免疫 原性等病原分子生物学方 面研 究 。 筛选 １ 型鸭 疫里 氏杆 菌 （ Ａ— Ｒ ＹＭ） 感 染 过 程 中特 在
一
。
目前 ， 内外 主要集 中 于 ＲＡ 毒力相 关基 因、 药相 关因子 、 国 耐 ＤＮＡ 指 纹 图谱 技 术、 ６Ｓｒ ＮＡ 特性 分 析 １ Ｄ
技术、 随机 扩增 多态性 Ｄ ＮＡ 技 术 、 体 的制备 、
Ｒｅ Ａ１和 Ｒ ｐ ２ ｐ ｅ Ａ 。其 中 Ｖａ Ｄ ｐ １和 Ｖａ Ｄ２编码 的蛋 ｐ
陈虹Ｌ 应 用血 清 Ｉ型 Ｒ Ｈ一 株段 ４ ４ ４ ｂ 筛 ３ ｐ的插 入
Ｄ ＮＡ 片段 。同源性 分 析表 明 ， 该基 因是 一 种新 的 Ｉ
肽肽酶 Ｉ ｄ ｐ Ｉ 和锌 依 赖 肽 酶 （ｄ ） Ｖ（ ｐ Ｖ） ｚｐ 。推 测 二 肽
肽 酶 Ⅳ可能为 ＲＡ 引起 主要 病理 变化 ——腹 腔浆膜
面广泛性纤 维 素性渗 出的关 键性 毒力 因子之 一 。
１４ Ｉ型 磷 酸 二 酯 酶 （ Ｄ ） 因 ． Ｐ Ｅ１ 基
Ｃ ａ ｇＣ Ｆ等Ｌ 首 次报 道大 部分 Ｒ 菌 株 含有 ｈ ｎ ３ Ａ 质 粒 ， 将其 中一个 ３ ９ｋ 并 ． ｂ的质 粒 命 名 为 ｐ Ｆ ， Ｃ Ｃ１ 包 含 ４个 长 的开放阅读框 （ Ｆ 即 Ｖ ｐ 、 ｐ ２ ０Ｒ ） ａ Ｄ１ Ｖａ Ｄ 、
胶 的蛋 白水解 酶 ， 鸭疫 里 氏杆 菌 培 养 滤 液影 响鸭 是
胚 成纤维 细胞 形态 的活 性 物 质 ， 能是 细菌 毒 力 因 可
子 之一 。
药基 因盒 ａ ｄ 基 因 ， ａ Ａ５ 编码核 苷转 移酶 ， 导致 细菌对
氨基 糖 甙 类 药 物 产 生 耐 药 性 。Ｉ Ｉ 含 有 长 度 为 ｎ－ Ｂ
动 物 医 学 进 展 ，０ ０ ３ （ １ ：４７ ２ １ ，１ １ ） ７ —８
Ｐｒ ｇｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
鸭疫里 氏杆 菌分 子 生物 学研 究进 展
刘 佳 丽 张 喜 宏 姜 英 武。谷 春 华。 高云航 ¨ ， ， ， ，
作 者 简 介 ： 佳 丽 （９ ４ ）女 ， 东青 岛人 ， 士研 究 生 ， 刘 １８一 ， 山 硕 主要 从 事 动 物微 生 物 学 与 免 疫 学研 究 。 ＊通 讯 作 者
刘 佳 丽 等 ： 疫 里 氏 杆 菌 分 子 生 物 学研 究 进 展 鸭
７ ５
具 有液化 明胶 特 性 。唐 妤 ［ 对 ＲＡ 部 分 特 性 研 究 ， ８ Ｒ 明胶水 解 粗 酶 对 试 验 鸭 肝 脏 、 脑 、 Ａ 大 心脏 、 脏 脾
２ １ 氨 基糖 苷类修 饰酶一 ． ３核苷 转移酶 Ｉ
蔡 良水［ １ 采用 原 生质 体 融 合 技 术 构 建 双 耐 药 。 Ｒ Ａ融 合 菌 株 ， 别 选 用 氯 霉 素 （ ｈ ） 红 霉 素 分 Ｃ ｉ和
（ ｒ） Ｒ Ｊ Ｅ ｙ 对 Ａ－Ｘ菌株 （ 型） Ｒ ２菌株 （ １ 和 Ａ一 ２型） 行 进
鸭疫 里氏杆菌病又称鸭传染 性浆膜 炎 ， 一种 由 是 鸭疫 里氏杆 菌 （ ｉ ｒｌ ｎ ｔ ｅｔ ｅ ， Ａ） 染引 Ｒｅ ｅ ａａ ａｉ ｓ ｆ ｒ Ｒ 感 ｍｅ ｌ ｐ ｉ
黄 色葡萄球 菌进 行 环 化腺 甘一 磷酸 Ｃ ＭＰ反 应 筛选 Ａ 阳性 克隆 ， 获得协 同溶血 素 基 因 ｃｍ， 证 明其 为一 ａ 并
定 了理论基础 。
刘颖 等Ｌ １ 次 在 ＲＡ 中检 测 出 了氨 基 糖 苷 类 首
修 饰酶—— ３核 苷转 移酶 Ｉ（ ｎ （ 一 基 因 ， ａ ｔ ３） Ｉ） 产生
可 以造 成一 定 病 理 性 损 伤 。李 继 祥 等 Ｌ 从 ＲＡ ＡＦ ｇ 分 离株进 行 基 因盒一 合 子 系 统 检 测 。从 分 子 水 平 整 株培养 滤液 中分离获 得 能水解 明胶 及 改变 细胞 形态 的活性 蛋 白质 ， 分子 质 量 约 为 ５ ｕ 证 实 为 降 解 明 ５ｋ ，
产生是 造成 ＲＡ持续 感染 的重要 因素 。
２ ５ 双耐 药 ＲＡ融 合菌株 的构 建 ．
整合 子 （ ｔｇｏ ， ｔ 携 带 ， 过 融 合 、 导 和 转 化 ｉ ｅｒｎ ｉ ） ｎ ｎ 通 转
在不 同种属 的遗传 物质 之 间转移 或集 聚 重排 造成 多 重 耐药菌发 生率 大 幅上 升 。从 临 床 实 践 可 以看 出 ， 由于大量 抗 生 素 及 抗 菌 药 用 于 治 疗 鸭 疫 里 氏杆 菌 病 ， 成 鸭 Ｒ 耐 药 现 象 日益 增 多 ， 药 率 高 且 广 造 Ａ 耐 泛， 交叉 耐药性 多Ｌ １ 。
型磷 酸二酯 酶 （ Ｄ １ 基 因 ， 其进 行重 组及 原 核表 Ｐ Ｅ） 对 达 ， 导表达 出大 小约 为 ８ ｕ的 Ｐ Ｅ 诱 ０ｋ Ｄ １重 组蛋 白。 免疫 印迹 检测结 果表 明该 重组 表达 蛋 白具有 较好 的 免疫 原性 。 １ ５ 明胶 水解 酶 ． 多种 细菌分 泌 的具有水 解 明胶 活性 的胞 外蛋 白