高考生物实验
必修一
一、观察核酸在细胞中的分布
材料：人的口腔上皮细胞试剂：甲基绿、吡罗红混合染色剂
原理：甲基绿能使DNA呈现绿色，吡罗红能使RNA呈现红色，因此利用这两种染色剂将细胞染色，可以真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA 主要分布在细胞质中。
步骤：
1、取材
①滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液（保持细胞渗透压）；
②刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2、水解
①解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸（改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色质中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合）的小烧杯中，进行材料的水解；
②保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3、冲洗涂片
①冲：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10秒钟；
②吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4、染色
①染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
②吸：吸去多余染色剂；
③盖：盖上盖玻片。
5、观察
①低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
②高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。
实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色
注意事项：盐酸的作用——改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
二、检测生物组织中的还原糖、脂肪和蛋白质。
1、还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖）的检测
试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/ml的NaOH 乙液：0.05g/ml的CuSO4）
颜色变化：浅蓝色─→砖红色沉淀
步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）
注意事项：①甲乙液必须等量混合均匀后再加入样液中，现配现用②必须用水浴加热
2、脂肪的鉴定
试剂：苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液颜色变化：橘黄色或红色
步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央
↓
染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）
↓
制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）
↓
镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）
注意事项：①切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰，有的地方模糊。
②50%酒精的作用是：洗去浮色
③需使用显微镜观察
3蛋白质的鉴定颜色变化：变成紫色
试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/ml的NaOH B液：0.01g/ml的CuSO4 ）
步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)
注意事项：①先加A液1ml，再加B液4滴②蛋清要先稀释
4淀粉的检测和观察
试剂：碘液颜色变化：变蓝
三、使用显微镜观察多种多样的细胞。
高倍镜的使用步骤
（1）在低倍镜下找到物像，将物像移至视野中央。（2）转动转换器，换上高倍镜。
（3）调节光圈和反光镜，使视野亮度适宜。（4）调节细准焦螺旋，使物像清晰。
显微镜的放大倍数=目镜的放大倍数×物镜的放大倍数
面积的放大倍数=显微镜放大倍数的平方。
显微镜下的物像与实际上下，左右相反。
四、用高倍显微镜观察线粒体和叶绿体。
1实验原理
（1）叶肉细胞中的叶绿体，呈绿色、扁平的椭球形或球形，散布于细胞质中，可以在高倍显微镜下观察它的形态。
（2）线粒体普遍存在于动物细胞和植物细胞中，健那绿染液（活细胞染液）能专一性使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而线粒体周围的细胞质中为无色的状态。通过染色，可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。
2材料藓类、菠菜或黑藻的叶，人的口腔上皮细胞。
3方法步骤：
1、观察叶绿体
低倍镜下找到叶片细胞→高倍镜下观察。
2、观察线粒体
取材→染色→制片→低倍镜下找到口腔上皮细胞→高倍镜下观察。
五、观察植物细胞质壁分离和复原
1原理：植物细胞的吸水和失水
细胞内的液体环境主要指的是液泡里面的细胞液。
原生质层：细胞膜和液泡膜以及两层膜之间的细胞质（相当于选择透过性膜）外界溶液浓度> 细胞液浓度时，细胞质壁分离
外界溶液浓度< 细胞液浓度时，细胞质壁分离复原
外界溶液浓度= 细胞液浓度时，水分进出细胞处于动态平衡
中央液泡大小原生质层位置细胞大小质壁分离（蔗糖溶液）变小脱离细胞壁基本不变
质壁分离复原（清水）逐渐恢复原来大小恢复原位基本不变
2、质壁分离产生的条件：①具有大液泡②具有细胞壁③细胞内外溶液浓度差④活细胞
3、质壁分离产生的原因：内因——原生质层伸缩性大于细胞壁伸缩性
外因——外界溶液浓度> 细胞液浓度（不断失水）
4、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞（具紫色大液泡），质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。
5、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水, 另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)
注意事项：低倍镜下观察
填图并写出4、6、7处液体的颜色
六、探究影响酶活性的因素
1实验原理：
淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。麦芽糖和葡萄糖遇碘后，不形成紫蓝色的复合物，但能与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
