实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法) PPT

细菌的鞭毛染色
实验要求
• 端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
L环 P环 基体 S环 M环
鞭毛钩 鞭毛丝
观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察 鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm 光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
• 镜检观察。
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
• 新鲜的菌种：将菌种连续传代接种后培养至对数 中期。
• 载玻片的准备：将载玻片用洗衣粉煮沸约20分钟， 充分洗净，置于95%的乙醇中备用。
• 制片：将菌液沿载玻片一端流下，自然干燥后染 色。
• 染色：加硝酸银染色A液覆盖3~5分钟，用蒸馏水 冲洗，再用B液覆盖至出现明显褐色（约1min)， 立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。

（二）运动性的观察
悬滴法
（1取洁净的盖玻片，取一滴蒸馏水。
（2）加菌液：用接种环取1-2环菌液置于水滴里。
（3）盖玻片反转，放在玻环上。（4）镜检：先用 低倍镜找到悬滴边缘，并将液滴移至视野中心， 然后用高倍镜观察。观察时光线要调得暗一些。 用悬滴法分别观察、普通变形杆菌和金黄色葡萄球 菌的运动性。细菌的运动有一定的方向，并可直 线、波浪式或翻滚运动。
五、实验报告
绘图表示鞭毛细菌的形态特征，并用箭头表示其 运动方向。
六、思考题
1、鞭毛染色法准确鉴定细菌是否具有鞭毛，要注意哪些 细节？
、

三、实验器材
1、菌种： 普通变形杆菌 （Proteus vulgaris）、 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 2、染色液：硝酸银染色液， 3、其他：显微镜，载玻片，盖玻片，），擦镜纸，吸水纸， 记号笔，镊子，接种环等。
四、实验方法
（一）鞭毛染色（硝酸银染色法）
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中（洗 衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取 出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在 火焰上烧去酒精。



采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位 置和数目，但此法既费时又麻烦。如果仅须了解 某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或压滴法直接在 光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以 此来判断细菌是否有鞭毛。此法较快速、简便。

悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在 其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ槽的载 玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。 压滴法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上 盖玻片，置显微镜下观察。

精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
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暗视野显微镜或相差显微镜观察
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
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实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）

细菌鞭毛染色及活细菌运动性观察摘要本实验采用硝酸银染色法对苏云金芽孢杆菌与铜绿假单胞菌进行鞭毛染色，在油镜下观察其菌体形态和鞭毛的形态、数量、着生位置。

并采用压滴法，用美蓝染色后观察细菌的运动性。

关键词鞭毛、硝酸银染色法、压滴法、运动性前言鞭毛是某些细菌表面细长弯曲的丝状物，是细菌的运动器官和特殊构造。

细菌鞭毛的长短、数量和生长位置是鉴别菌种的一个重要的形态学指标，也是细菌重要的抗原物质与致病因素。

根据鞭毛的特征，可将有动力细菌分为单端极鞭毛菌、单端丛鞭毛菌、周鞭毛菌、侧鞭毛菌。

细菌的鞭毛非常纤细，直径一般在20nm左右，采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。

鞭毛染色法的基本原理是在染色前先经媒染剂处理，媒染剂吸附在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色，便可达到普通光学显微镜的辨析范围以内。

常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。

鞭毛染色一直被提倡作为革兰阴性非发菌的鉴别手段之一，先后出现了Leifsen法、镀银法、Ryu氏法等多种鞭毛染色的方法。

鞭毛细长透明，其宽度在普通光学显微镜波长检验范围之外，所以不易观察。

如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用压滴法直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛，同时可以观察细菌的运动性特征。

1 材料与方法1.1材料1.1.1菌种苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）铜绿假单细胞菌（P.Aeruginosa）1.1.2染色液和试剂香柏油，二甲苯，硝酸银鞭毛染液，0.01%美蓝水溶液等。

1.1.3仪器及其他普通光学显微镜，酒精灯，载玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管，镊子，滴管，盖玻片，吸水纸等。

1.2方法及步骤1.2.1硝酸银染色法1.2.1.1清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，置洗含衣粉过的水中煮沸20min。

取出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在火焰上烧去酒精。