《生物化学转录》PPT课件

3/9/2021
生物化学逆转录
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逆转录酶催化的cDNA合成
生物化学逆转录
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试管内合成cDNA:
cDNA complementary DNA
以mRNA为模板，经逆转 录合成的与mRNA碱基序列互 补的DNA链
分子生物学研究可应用逆 转录酶，作为获取基因工程目 的基因的重要方法之一，此法 称为cDNA法
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生物化学逆转录
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生物化学逆转录
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生物化学逆转录
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•1、DNA复制的基本特点 •2、原核生物的复制过程包括起始、延长和终止 •（1）起始是将DNA双链解开形成复制叉 •（2）复制的延长由引物或延长中的子链提供3′-OH，供dNTP掺入生成磷酸二酯键，延 长中的子链有前导链和后随链之分，复制产生的不连续片段称为冈崎片段 •（3）复制的终止需要去除RNA引物、填补留下的空隙并连接片段之间的缺口使成为连续 的子链
一、逆转录病毒的基因组RNA以逆 转录机制复制
➢逆转录(reverse transcription) ➢逆转录酶(reverse transcriptase)
逆转录酶
RNA
DNA
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生物学逆转录
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逆转录病毒细胞内的逆转录现象:
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逆转录酶 RNA酶 逆转录酶
RNA 模板
DNA-RNA 杂化双链 单链DNA
原核生物复制
真核生物复制
起始：DNA的解链；引物合成和引发体形 成 延长：复制的延长指在DNA-pol催化下， dNTP以dNMP的方式逐个加入引物或延长 中的子链上，其化学本质是磷酸二酯键的不 断生成 终止：双向复制的复制片段在终止点处汇合

3 真核生物的转录
真核生物的转录
真核生物的转录过程与细菌相同，但使用的“机 器”存在差别。 真核生物有三种不同的RNA聚合酶。 真核生物转录的起始需要特定的起始因子，称为 通用转录因子。
聚合酶II的核心启动子由4个元件组成
RNA聚合酶II的启动子包含四个元件： TFIIB结合元件（BRE）、TATA框（TATA box）、转录起始子（initiator，Inr）、下游 启动子元件（DPE、DCE、MTE等） 它们合称核心启动子。
细菌的转录起始
σ因子与-35框间相互作用 使聚合酶识别特定启动子， 形成闭合转录复合体。 RNA聚合酶覆盖-35上游 到-10下游约60个碱基对。 -10框内的碱基对打开产生 开放转录复合体。
细菌的转录延伸
转录延长特点
① 核心酶负责RNA链延长反应； ② RNA链从5-端向3 -端延长，新的核苷酸都是加到3-OH
原核生物
细菌 RNA 古细菌 RNA pol（核心） pol（核心）
’
A’/A’’
RNA Pol I RPA 1
真核生物
RNA Pol II RNA Pol III
RPB 1
RPC 1
B
RPA 2
RPB 2
RPC 2
I
D
RPA 5
RPB 3
RPC 5
II
L
RPA 9
RPB 12
RPC 9
K
RPA 6
转录起始位点翻译起始位点翻译终止位点转录终止位点转录调控序列结构基因序列基因包括两个部分基因表达?基因携带的遗传信息经转录翻译等过程合成特定蛋白质进而发挥特定的生物学功能的过程称为基因表达
基因表达
Gene Expression

TF II E
（6）TF II H 和TF II J加入复合物
（7）TF II H
有多种酶活性，包括ATP酶、解旋酶、和可使Pol II 的
CTD 磷酸化的激酶活性。
Pol II 的CTD 磷酸化
， TF II 在PolⅡ离开启动 子前释放，形成适于 延伸的构象
Pol II 离开启动子区，
进入延伸阶段
用。
TF II B
（4）与RNA聚合酶与TFIIF相连的复合体结合
TF II F
Pol II
TF II F 结合Pol II并带向启动子； 两个亚基：
RAP74（ATP依赖性解旋酶），可能参与DNA 双链的溶解 RAP30（与细菌因子有同源性），与RNA 聚合酶Ⅱ紧密 结合
（5）TF II E 扩大DNA覆盖区至+30
RNA聚合酶Ⅱ起始复合物的组装 启动子TATA盒+ TFⅡD
+ TFⅡA + TFⅡB +(RNA聚合酶+ TFⅡF)复合物 +TFⅡE 、TFⅡJ +TFⅡH（解旋酶、蛋白激酶）
DNA解旋、RNA聚合酶Ⅱ的 CTD磷酸化
polⅡ从转录因子中释放出来 从起始点向下游移动
转录的终止 （1）终止位点：
（以E.coli为例，五聚体）
核心酶 (core enzyme) 全酶 (holoenzyme) 利福平
三、RNA聚合酶与启动子
1、转录是不连续、分区段进行的 2、每一个转录区段可视为一个转录单位，包括 若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列
结合部位： RNA聚合酶的结合的部位，其长度为7bp，
中心部位在–10bp处，一致性序列为TATAAT序列，故称 之为 TATA box (Pribnow box)

启动子的一致序列是综合统计了多种基因的启动子序
列以后得出的结果，迄今为止，在E.coli中还没有发
现哪一个基因的启动子序列与一致序列完全一致。一
个基因的启动子序列与一致序列越相近，则该启动子
的启动效率就越高。不同基因在启动子序列上的差异，
是基因表达调控的一种重要途径。
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3.2.3 转录的起始
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因子与其相应的启动子
因子 基因 功能
-35区
间隔
-10区
70 rpoD 广泛
TTGACA
15-17bp TATAAT
32 rpoH 热休克 TCTCNCCCTTGAA 13-15bp CCCCATNTA
54 rpoN 氮代谢
CTGGNA
6bp
TTGCA
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3.2.2 启动子的识别序列
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不同的σ因子可以识别不同的启动子。如E.coli的
一般基因由σ70(Mr为70×103)识别, 枯草芽孢杆菌σ因 子的主要类型为σ43。识别热休克应激蛋白基因启动
子的为σ32，温度升高时，基因rpoH的产物σ32浓度升
高，温度回降时，σ32浓度降低。可以假设，σ70与σ32 通过竞争已有的核心酶，调控蛋白质合成的起始。诱 导σ32产生的基本信号是因温度升高引起的未折叠蛋 白的聚集。在固氮菌中识别固氮酶相关基因启动子的
为σ54，当培养基中缺乏氮时，E.coli中会有少量σ54存
在，在这种情况下，基因会转向利用其它可替代的N 源。
ω亚基由基因rpoZ编码，Mr为1.10×104，曾长期
被忽略，甚至许多人不把它作为聚合酶的组分。然而， 现在已经肯定，ω亚基是嗜热水生菌RNA pol必不可 少的组分，也是体外变性的RNA pol成功复性所必需 的，它与β亚基一起构成催化中心，稳定其与β' 亚基 的结合

第三十五页，共61页。
3、第三步是最开始的两个核苷酸之间的连接。在它们 之间会形成一个磷酸二酯键，这样，所产生的三元复合物 (Ternary complex)就包括RNA、DNA、聚合酶。
• 接下来加入的前九个核苷酸，聚合酶是一直不移动的，产生
一条短RNA链，直到九个碱基为止。九个碱基中的任何一个 加入后，聚合酶都有释放RNA的可能性，导致流产起始
★ DNA/RNA hybrid site(β)
★ D. S.DNA unwinding point(α)
★ D. S.DNA rewinding point(α)
第十八页，共61页。
原核生物RNApol (Core) 的结构与功能
Enzyme Movement
DNA coding strand (β’ ) Rewinding point (α)
(Abortive initiation)。但流产起始之后聚合酶又开始合成第一 个碱基。流产起始常常产生一系列短的寡聚核苷酸(2~9 个碱 基)。
(书写基因序列时，仅写非模板序列，可不注明极性方向)
DNA 5’---ATGAGTA----3N’on-template (sense strand) 3’---TACTCAT----t5e’mplate (antisense strand)
RNA 5’----AUGAGUA----3’
第四页，共61页。
17bp的间距较17bp的序列特异性对转录更为重要 （5）、Sextama Box or Pribnow Box mut.
→ 转录率下降100X
Sextama Box and Pribnow Box mut.
→ 转录率下降1000X
第三十二页，共61页。

切割；在rRNA和tRNA的前体加工中起核心作 用；
化学修饰：在rRNA、tRNA、mRNA中都存在， 其中mRNA的化学修饰称为RNA编辑。
细胞内的RNA组分
mRNA：4%，含蛋白质编码信息 rRNA：80%，核糖体的组分 tRNA：携带氨基酸 snRNA：参与mRNA前体的加工 snoRNA：rRNA分子加工中起核心作用 scRNA：功能多种多样 tmRNA：标记合成的错误蛋白质，使之降解 miRNA：广泛的基因转录后调控作用（近年来
原核生物
细菌 RNA 古细菌 RNA pol（核心） pol（核心）
’
A’/A’’
RNA Pol I RPA 1
真核生物
RNA Pol II RNA Pol III
RPB 1
RPC 1
B
RPA 2
RPB 2
RPC 2
I
D
RPA 5
RPB 3
RPC 5
II
L
RPA 9
RPB 12
RPC 9
K
RPA 6
不对称转录
转录泡
编码链
模板链
1
RNA聚合酶
2
细菌的转录
3 真核生物的转录
4
转录后加工
1
RNA聚合酶
RNA聚合酶具有不同形式，但有共同特性
细菌只有一种RNA聚合酶。 真核生物有三种RNA聚合酶，聚合酶I、II、III。 聚合酶II（Pol II）是真核RNA聚合酶中研究最深 入的，也是最重要的，因为它转录几乎所有的蛋 白质编码基因。 细菌和酵母的核心酶有共同的形态和组织方式。 核心酶的形状象一只蟹爪，两个钳子的基部所夹 的是“活性中心裂隙”。
与因子将RNA聚合酶核心酶募集到启动子区域

转录起始复合物:
RNApol (2) - DNA - pppGpN- OH 3
（二）延长
3’
核心酶
σ
5’
rRNA、mRNA、tRNA
5’ 3’
转录空泡(transcription bubble)：在转录延长过程中， 由局部打开的DNA双链、RNA聚合酶核心酶及新生成 的RNA三者结合在一起的复合体，为空泡状结构，又 称转录复合物。
一、原核生物转录过程 二、真核生物转录过程
一、原核生物RNA合成过程
（一）起始 （二）延长 （三）终止
（一）起始
转录起始过程
1. RNA聚合酶全酶(2)与模板结合 2. DNA双链局部解开
3. 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应， 形成转录起始复合物
5-pppG -OH + NTP 5-pppGpN - OH 3 + ppi
核心酶可以进行转录，但没有
正确的起始点，因此在原核细胞
中的转录起始是需要全酶的 ，而
延长时仅需核心酶。
大肠杆菌的多种σ因子
名称
主要功能
σ28
鞭毛基因
噬菌体合成
σ32
热休克基因
σ因子？
σ54
氮饥饿状态σຫໍສະໝຸດ 0正常状态，最常见启动子2. 真核生物的RNA聚合酶
共3种（RNA-PolⅠ、Ⅱ、Ⅲ） 分别合成rRNA、mRNA和tRNA
三、酶与模板的辨认结合
一、转录模板
结构基因 模板链
RNA
编码链
*结构基因(structural gene): DNA分 子上能转录出RNA的区段。
*模板链(template strand) ，编码链 (coding strand)： DNA双链中按碱基配

层次是[ D ]
A．DNA→染色体→脱氧核苷酸→基因 B．染色体→脱氧核苷酸→DNA→基因 C．DNA→染色体→基因→脱氧核苷酸 D．染色体→DNA→基因→脱氧核苷酸
小飞守角制作
3．下列哪一组物质是RNA的组成成分[ C ]
A．脱氧核糖核酸和磷酸 B．脱氧核糖、碱基和磷酸 C．核糖、碱基和磷酸 D．核糖、嘧啶和核酸
4．DNA分子的解旋发生在 过程中[ D ]
A．复制 B．转录 C．翻译 D．复制和转录
5．果蝇的遗传物质由 种核苷酸组成[ B ]
A．2 B．4 C．5 D．8
小飞守角制作
谢谢！ 学妹给我打电话，说她又换工作了，这次是销售。电话里，她絮絮叨叨说着一年多来工作上的不如意，她说工作一点都不开心，找不到半点成就感。 末了，她问我：学姐，为什么想 找一份 自己热 爱的工 作这么 难呢？ 我问她上一份工作干了多久，她 说不到 三个月 ，做的 还是行 政助理 的工作 ，工作 内容枯 燥乏味 不说， 还特别 容易得 罪人， 实在不 是自己 的理想 型。 我又问了她前几份工作辞职的原 因，结 果都是 大同小 异，不 是因为 工作乏 味，就 是同事 不好相 处，再 者就是 薪水太 低，发 展前景 堪忧。 粗略估计，这姑娘毕业不到一年 ，工作 却已经 换了四 五份， 还跨了 三个行 业。 但即使如此频繁的跳槽，她也仍 然没有 找不到 自己满 意的工 作。 2 我问她，心目中理想型的工作是 什么样 子的。 她说， 姐，你 知道苏 明玉吗 ？就是 《都挺 好》电 视剧里 的女老 大，我 就喜欢 她样子 的工作 ，有挑 战有成 就感， 有钱有 权，生 活自由 ，如果 给我那 样的工 作，我 会投入 我全部 的热情 。 听她说完，我尴尬的笑了笑。 其实每一个人都向往这样的成功 ，但这 姑娘却 本末倒 置了， 并不是 有了钱 有了权 有了成 就以后 才全力 以赴的 工作， 而是全 力以赴 工作， 投入了 自己的 全部以 后，才 有了地 位名望 钱财。 你要先投入，才会有收获，当你 真正投 入做一 件事后 ，会明 白两件 事：首 先你会 明白， 把一件 事认认 真真做 好，所 获得的 收益远 大于同 时做很 多事； 你会明白，有人风风火火做各种 事仍未 有回报 ，是因 为他们 从未投 入过。 从“做 了”到 “做” ，正如 “知道 ”到“ 懂得” 的距离 。 3 之前单位有一个姑娘，工作特别 拼命， 只要说 起她的 名字， 大家都 会赞不 绝口： 这姑娘 工作拼 命的程 度，连 男人们 都比不 上。 后来有一次，在公司的期刊上我 看到了 对这姑 娘的采 访，来 公司四 年多， 这期间 做过车 间的流 水工， 也在三 班倒的 岗位上 一做就 是两年 ，谁也 不知道 一个女 孩子究 竟是怎 么扛过 来的。 后来部门有了提拔晋升的名额， 这位姑 娘被列 入了第 一人选 ，并且 全票通 过。 她在采访里说： 毕业第一年，许多同学都穿上了 好看的 衣服， 走在了 宽敞明 亮的写 字楼里 ，对比 光鲜亮 丽的她 们，我 却穿着 劳保服 ，每日 穿梭在 各种不 同的机 械设备 里。 记得有人笑话我，说我一个姑娘 ，干一 份这么 不体面 又危险 的活， 丢脸死 了。 我当时有点生气，可后来当我沉 浸在这 份工作 里，当 我一点 点沉淀 打磨自 己，当 我发现 自己对 工作的 热情， 其实来 源于对 工作的 投入， 而不是 周遭的 环境时 ，我就 对别人 那点看 我的眼 光毫不 在意了 。 我越来越明确自己想要什么，热 爱着什 么，我 越来越 爱现在 从事的 这个行 业，热 爱这份 工作， 更热爱 一直坚 持努力 的自己 。 年轻时，我特别佩服那些不计较 金钱、 权位、 报酬专 心工作 ，认真 学习的 人，因 为不计 较钱多 钱少肯 认真工 作的人 ，往往 觉得只 要是能 从事这 份工作 ，本身 就是对 他的最 大报酬 。 事实上，当一个人为了工作本身 而不是 工作后 的工资 来做事 情的时 候，他 往往能 够把工 作做到 最好， 也一定 会收到 更多的 报酬。 4 读者给我留言，她说：二毛，我 好羡慕 你写了 那么多 文字， 看了那 么多书 ，你是 怎样坚 持做到 的呢？ 为什么 ，我总 是坚持 不下去 呢？ 我说，那是因为你对读书写作这 件事情 不够感 兴趣， 不够热 爱。 你会不会买一本书，其实你从来 不看， 但是你 觉得好 像拥有 了其中 的知识 ？你会 不会制 定了一 个计划 ，其实 你从来 坚持不 下来， 只是享 受制订 计划那 几天的 快乐？ 我们总是习惯了这样的开始，然 后又寥 寥草草 的结束 。对事 如此， 对待生 活也是 如此， 当一个 人对自 己的生 命开始 用“潦 草”来 搪塞时 ，生命 也会开 始对他 潦草。 如果跳舞，要像没有人看着那样 尽兴； 如果热 恋，像 从未受 伤一样 去爱； 如果唱 歌，像 无人听 着那样 投入； 如果活 着，就 把人间 当天堂 那般生 活。 这个世界上有很多事，都是当你 开始认 真对待 以后， 才会发 现其中 包含的 乐趣， 你要带 着关爱 而不是 期待地 投入生 活，当 你对待 事物越 认真， 对待工 作越投 入，你 会发现 能力与 乐趣接 踵而来 。 学妹给我打电话，说她又换工作了， 这次是 销售。 电话里 ，她絮 絮叨叨 说着一 年多来 工作上 的不如 意，她 说工作 一点都 不开心 ，找不 到半点 成就感 。 末了，她问我：学姐，为什么想 找一份 自己热 爱的工 作这么 难呢？ 我问她上一份工作干了多久，她 说不到 三个月 ，做的 还是行 政助理 的工作 ，工作 内容枯 燥乏味 不说， 还特别 容易得 罪人， 实在不 是自己 的理想 型。 我又问了她前几份工作辞职的原 因，结 果都是 大同小 异，不 是因为 工作乏 味，就 是同事 不好相 处，再 者就是 薪水太 低，发 展前景 堪忧。 粗略估计，这姑娘毕业不到一年 ，工作 却已经 换了四 五份， 还跨了 三个行 业。 但即使如此频繁的跳槽，她也仍 然没有 找不到 自己满 意的工 作。 2 我问她，心目中理想型的工作是 什么样 子的。 她说， 姐，你 知道苏 明玉吗 ？就是 《都挺 好》电 视剧里 的女老 大，我 就喜欢 她样子 的工作 ，有挑 战有成 就感， 有钱有 权，生 活自由 ，如果 给我那 样的工 作，我 会投入 我全部 的热情 。 听她说完，我尴尬的笑了笑。 其实每一个人都向往这样的成功 ，但这 姑娘却 本末倒 置了， 并不是 有了钱 有了权 有了成 就以后 才全力 以赴的 工作， 而是全 力以赴 工作， 投入了 自己的 全部以 后，才 有了地 位名望 钱财。 你要先投入，才会有收获，当你 真正投 入做一 件事后 ，会明 白两件 事：首 先你会 明白， 把一件 事认认 真真做 好，所 获得的 收益远 大于同 时做很 多事； 你会明白，有人风风火火做各种 事仍未 有回报 ，是因 为他们 从未投 入过。 从“做 了”到 “做” ，正如 “知道 ”到“ 懂得” 的距离 。 3 之前单位有一个姑娘，工作特别 拼命， 只要说 起她的 名字， 大家都 会赞不 绝口： 这姑娘 工作拼 命的程 度，连 男人们 都比不 上。 后来有一次，在公司的期刊上我 看到了 对这姑 娘的采 访，来 公司四 年多， 这期间 做过车 间的流 水工， 也在三 班倒的 岗位上 一做就 是两年 ，谁也 不知道 一个女 孩子究 竟是怎 么扛过 来的。 后来部门有了提拔晋升的名额， 这位姑 娘被列 入了第 一人选 ，并且 全票通 过。 她在采访里说： 毕业第一年，许多同学都穿上了 好看的 衣服， 走在了 宽敞明 亮的写 字楼里 ，对比 光鲜亮 丽的她 们，我 却穿着 劳保服 ，每日 穿梭在 各种不 同的机 械设备 里。 记得有人笑话我，说我一个姑娘 ，干一 份这么 不体面 又危险 的活， 丢脸死 了。 我当时有点生气，可后来当我沉 浸在这 份工作 里，当 我一点 点沉淀 打磨自 己，当 我发现 自己对 工作的 热情， 其实来 源于对 工作的 投入， 而不是 周遭的 环境时 ，我就 对别人 那点看 我的眼 光毫不 在意了 。 我越来越明确自己想要什么，热 爱着什 么，我 越来越 爱现在 从事的 这个行 业，热 爱这份 工作， 更热爱 一直坚 持努力 的自己 。 年轻时，我特别佩服那些不计较 金钱、 权位、 报酬专 心工作 ，认真 学习的 人，因 为不计 较钱多 钱少肯 认真工 作的人 ，往往 觉得只 要是能 从事这 份工作 ，本身 就是对 他的最 大报酬 。 事实上，当一个人为了工作本身 而不是 工作后 的工资 来做事 情的时 候，他 往往能 够把工 作做到 最好， 也一定 会收到 更多的 报酬。 4 读者给我留言，她说：二毛，我 好羡慕 你写了 那么多 文字， 看了那 么多书 ，你是 怎样坚 持做到 的呢？ 为什么 ，我总 是坚持 不下去 呢？ 我说，那是因为你对读书写作这 件事情 不够感 兴趣， 不够热 爱。 你会不会买一本书，其实你从来 不看， 但是你 觉得好 像拥有 了其中 的知识 ？你会 不会制 定了一 个计划 ，其实 你从来 坚持不 下来， 只是享 受制订 计划那 几天的 快乐？ 我们总是习惯了这样的开始，然 后又寥 寥草草 的结束 。对事 如此， 对待生 活也是 如此， 当一个 人对自 己的生 命开始 用“潦 草”来 搪塞时 ，生命 也会开 始对他 潦草。 如果跳舞，要像没有人看着那样 尽兴； 如果热 恋，像 从未受 伤一样 去爱； 如果唱 歌，像 无人听 着那样 投入； 如果活 着，就 把人间 当天堂 那般生 活。 这个世界上有很多事，都是当你 开始认 真对待 以后， 才会发 现其中 包含的 乐趣， 你要带 着关爱 而不是 期待地 投入生 活，当 你对待 事物越 认真， 对待 在一次踏青活动中，我认识 了彩虹 ，一个 皮肤很 白的小 美女。 她对自己的外形不太满意，一米 六的身 高，体 重接近1 30斤。 听说我 是跑步 爱好者 ，她马 上加了 我的微 信，希 望能跟 我一起 晨跑， 锻炼出 一个好 身材。 我满口 答应， 承诺每 天电话 催她起 床，到 约定地 点同跑 。 第一天见面，彩虹让我眼前一亮 ：崭新 的运动 服、高 束的马 尾辫、 箍在大 臂上的 手机袋 ，浑身 上下都 透着一 股踌躇 满志的 精气神 。 我开始跟她讲路线和跑步要领， 她却摆 摆手示 意我“ 等一下 ”，让 我先给 她拍照 。跑步 的时候 ，她顺 手拿着 相机自 拍，时 而嘟嘴 ，时而 眯眼， 有时也 让我停 下来帮 她拍几 张跳跃 动作。 我以为她才开始跑步，有新鲜感 ，拍一 次就会 静心锻 炼。殊 不知， 她竟然 每天晨 跑都要 拍照， 选不同 的角度 ，拍各 种各样 的跑步 姿势。 后来我才发现，她拍照是为了发 朋友圈 。她的 朋友圈 里，每 天都有 不同的 跑步图 片，配 上激励 的文字 ：“跑 步者， 加油” “跑向 更远的 地方， 看更美 的风景 ”等等 。 我觉得，有拍照片磨蹭的时间， 还不如 甩开膀 子多跑 几里路 。一边 跑，一 边拍照 修图， 走走停 停的， 我真不 知道这 样的锻 炼效果 能好到 哪里去 。果然 ，鸣锣 开道般 的跑步 运动只 坚持了 半个月 ，她就 以腿痛 为由， 再也不 肯跑了 。 她说自己真没出息。我心里暗笑 ：你不 是没出 息，你 只是有 点假努 力。努 力，不 需要那 么多仪 式感。 真正的 努力， 都是直 接朝着 目标前 行，并 不需要 做给任 何人看 。 2 前不久，堂嫂拿到了会计证。 堂嫂读书不多，按毕业证算来才 初中学 历。她 一直很 想跟外 地打工 的堂哥 结束两 地分居 的日子 ，但苦 于自己 文化不 高，又 没特长 ，在外 地不好 找工作 ，便想 着考个 会计证 。 她拿到证书来报喜的时候，我很 惊讶。 因为她 报考会 计证的 培训班 就在我 家附近 ，我居 然一点 消息都 不知道 ！我问 她为什 么不告 诉我们 ，至少 来市里 培训可 以住宿 在我家 ，学习 资料之 类的我 们也可 以支持 啊！ 堂嫂说，学习是她自己的事，没 必要声 张。再 说，刚 开始的 时候也 不知道 能不能 考过， 别人太 高的期 待反而 会造成 压力。 为期三 个月的 培训， 堂嫂学 了两期 才考过 。 但睿智如堂嫂，认准了目标便一 直默默 努力， 没有让 外界因 素干扰 自己。 真正的 努力， 往往都 悄无声 息。 3 太多的人，把努力当成了一种“ 人设” 。 想做一件事情，还没动工，就敲 锣打鼓 ；想达 成一个 目标， 八字还 没一撇 ，就高 谈阔论 。好像 他们的 努力， 不是为 了追求 结果， 而是为 了把努 力的形 式公布 于众， 像完成 某种仪 式。 如果喊着要努力的人，都可以扎 扎实实 下功夫 ，可能 这世上 的遗憾 也会少 很多。 很多时候，我们与牛人的差距， 就是差 那么一 点脚踏 实地的 真努力 。 真正的努力，是“富贵本无根， 尽从勤 里得” 的踏实 ；是“ 读书破 万卷， 下笔如 有神” 的勤奋 ；是“ 欲穷千 里目， 更上一 层楼” 的精进 。 有一种痛叫做，我本可以， 却没能 坚持。 雄心勃勃定下的目标，只要一星 半点的 理由就 可以化 为泡影 。 实际上，恒心也是一种修为，是 可以通 过对自 己的认 识和了 解去挖 掘培养 的。 1 你 的 恒 心 ， 与 你的意 愿有关 很多时候，不能坚持并不是因为 我们不 能吃苦 ，只是 因为我 们做某 件事情 的意愿 不强。 我的体力和耐力都不好，长跑常 常是忍 着头痛 恶心硬 撑到最 后。 因为这个原因，每次跑步前我都 有很大 的心理 压力。 加上那 些立下 的瘦身 目标常 常不能 三两天 见效， 所以每 一次都 是心血 来潮地 开始， 虎头蛇 尾地结 束。 可最近这一年，我却很积极地把 晨跑坚 持了下 来。 并不是突然间变坚强，而是因为 一个特 别不起 眼的理 由：能 够一个 人呆一 会儿。 自从荣升为两个孩子的妈妈后， 我经常 忙乱到 连上厕 所都觉 得是一 种奢侈 。 一大早，把没起床的孩子交给家 人，换 上运动 鞋，在 空旷的 街道上 吹吹凉 风，吸 吸那尚 未被污 染的空 气，戴 上耳机 ，听几 首喜欢 的歌… … 尽管只有短短的半个小时，但这 一切都 让我足 够迷恋 。 虽然我仍然会在跑出四五百米之 后心

蛋白质因子
操纵序列 (operator)
特异DNA序列
操纵序列 ——阻遏蛋白(repressor)的结合位点
当操纵序列结合有阻遏蛋白时，会阻碍 RNA聚合酶与启动序列的结合，或是RNA聚合 酶不能沿DNA向前移动 ，阻碍转录。
亚基 分子量
功能
36512
150618
155613
70263
决定哪些基因被转录 与转录全过程有关（催化）
结合DNA模板(开链) 辨认起始点
核心酶 core
enzyme
全酶 holoenzyme
活 细 胞 转 录 起 始 ， 需 全 酶
（α2ββˊσ）
转录延长：仅需核心酶
（α2ββˊ）
2 真核生物的RNA聚合酶
5’端：GU起始
3’端：AG-OH
1.U1，U2分别与Intron 的5’和3’结合
2. U4,U5,U6加入，形成完整的剪接体
剪接体(splicesome)：由snRNP与hnRNA结合，使内含 子形成套索并拉近上、下游外显子距离的复合体。
催化中心 3. 结构调整，形成催化中心
4. 第一次转酯反应------含pG-Oh的酶断裂E1和I
特点：
分子内催化，同一分子
包括催化部分和底物部
分。
底物部分 核苷酸断裂点
一级结构无规律。 二级结构为锤头结构
（hammer head）， 至少含有3个茎，1至3 个 环 ， 具 备 13 个 （ 或 11个）保守核苷酸序列。
最简单的核酶二级结构
剪切反应发生在锤头结
锤头状结构 构右上方GUX处。
rRNA的剪接采用自我剪接方式
真核生物RNA聚合酶有三种
种类
Ⅰ