电化学发光免疫分析方法..
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血检四项化学发光法调查
目前血检四项(HBsAg、HCV、HIV、TP)的检测方法主要有酶联免疫(ELISA)、核酸扩增(PCR)、胶体金标记、以及化学发光(CLIA)。现就CLIA在血检项目中的应用情况做一调查分析。
一.化学发光免疫分析法简介。
化学发光免疫分析法(Chemiluminescence imnunoassay,CLIA)是建立在放射免疫分析技术(radioimmunoassay,RIA)理论的基础上,以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法。
CLIA是利用化学反应中释放大量自由能,产生激发态中间体,当其回到稳定的基态时发射出光子(hν),用发光信号测量仪对所发出的光量子进行定量测量。鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。
表1 化学发光法类型
类型 原理及试剂 发光类型
化学发光免疫分析(CLIA) 用化学发光物质直接标记抗原或抗体组成 吖啶酯(acrydinum esters)
化学发光酶免疫分析(CLEIA) 不用化学发光物直接标记免疫制剂。在酶免疫分析完成后加入化学发光底物,产生化学发光 1.辣根过氧化物酶(HRP)/H2O2/Luminol系统;2.碱性磷酸酶(AP)/1,2二氧乙烷稳定衍生物(AMPPD)系统
电化学发光免疫分析(ECLIA) 应用电致化学发光标记物与电化学手段相结合产生化学发光的免疫分析 三联吡啶钌(Rucbpy)32+
三丙胺氨系统
微粒子酶联免疫
(MEIA)* 微粒子作为载体,标记酶催化底物产生荧光 碱性磷酸酶作用于4_ 甲基磷酸伞型酮生成4-甲基伞型酮(MU),MU产生出荧光,其荧光生成速率与被测物浓度相关。
化学发光免疫分析的类型介绍
更新:2012-05-16 12:26:51 | 来源: 标签:
化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型: (一)化学发光酶免疫测定 化学发光酶免疫测定(CLEIA)是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大,具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶,发光底物为dioxetane磷酸酯,固相载体为磁性微粒医学教|育网搜集整理。 (二)化学发光免疫测定 化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。 用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件:
1.能参与化学发光反应。 2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。 3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。 4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。 鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。
(三)微粒子化学发光免疫分析 该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0μm,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:(1)竞争反应:用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。(2)双抗体夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。 (四)电化学发光免疫测定
电化学发光免疫测定(ECLI)是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应,包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯,可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLL的测定模式与ELISA相似。其基本原理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂,将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌,随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行,不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。
评价电化学发光免疫分析法 (ECLIA)在梅毒检测中的应用效果
【摘要】目的 探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)在梅毒检测中的应用效果。方法 梅毒患者血清标本51例和非梅毒患者血清样本91例,运用电化学发光免疫分析法和毒螺旋体抗体(ELISA)进行检测,对比敏感度、特异性和准确性。结果 电化学发光免疫与毒螺旋体抗体的敏感度为100%、98.04%,而特异性98.90%、100%,对比两方法差异无统计学意义(P>0.05)。ECLIA方法在敏感性方面高于ELISA方法。结论 ECLIA用于梅毒检测中,有着很高的敏感度,有着较高的特异性,且准确性也很高,在进行梅毒检测的时候,操作上比较的简便,能够进行快速的检测,结果较为客观,有着较好的重复性等。
【关键词】电化学发光免疫分析法;梅毒检测;诊断
梅毒是一种慢性全身性性传播疾病,该疾病的引发主要由苍白密螺旋体苍白亚种感染造成的,梅毒的传染性非常强,能够对全身各器官进行侵犯,对多器官造成损害,对人们的身心健康造成严重的影响。近年来我国梅毒的发病率呈现攀升的趋势[1]。但部分梅毒感染者由于有着较长的潜伏期而没有明显的症状,难以及早地发现,若是没有得到有效的治疗,容易引发严重的并发症。在对梅毒进行诊断的时候,梅毒血清检测是重要的指标。选择敏感性高、特异性高、准确性高的检测方法,能够使筛查和诊断更加的快速、准确,从而符合检测机构的要求,这显得十分的重要。本文对梅毒检测中使用的电化学发光免疫分析法进行了研究,现报告如下。
1 资料和方法
1.1一般资料 将2019年5月-2020年8月收治的经过病史询问、临床症状分析、血清学试验诊断,确诊51例梅毒患者血清标本,91例非梅毒患者血清标本,样本年龄介于22至78岁之间,平均(40.11±3.57)岁。
1.2 方法
使用E601电化学发光免疫分析仪,还有与之相配的梅毒检测试剂,通过化学发光免疫来对苍白密螺旋抗体机械能检测苍。厦门新创科技有限公司生产的试剂,用来进行ELISA检测。检测的时候需要所用样本空腹,采集其静脉血3mL,3000r/min离心10min,采集当天就需要完成化学发光免疫、ELISA及快速血浆反应素环状卡片试验的梅毒螺旋体抗体检测。对于经两种检测不一致的结果,第二天同时利用这两种方法进行检测。化学发光免疫的检测全过程均是全自动完成,该仪器判断标准:阳性是COI≥1.0,阴性是COI<1.0,ELISA运用酶标仪判断标准,阳性为S/CO≥1.0,小于该值判为阴性。
电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析
苏东梅
【摘 要】目的:探讨电化学发光免疫分析及在临床检验中的应用效果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检验人员分别利用ECLIA、ELISA等方法完成100例乙肝患者血样中乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)检验。记录两种方法检测抗-HBc阳性率,给予统计学分析后得出结论。结果ECLIA法检测100例乙肝患者血样中抗-HBc阳性率高达98.00%,显著高于ELISA法检测阳性率81.00%,对比结果具有统计学意义(P<0.05)。结论电化学发光免疫分析方法可显著提高临床检验结果准确性,为临床医生提供真实可靠的诊断依据,使患者及时确诊病情并获得正确治疗,保障其临床疗效及预后。%Objective To explore
the electrochemiluminescence immunoassay and the application effect in
clinical examination. Methods A clinical laboratory staff with professional
knowledge and rich experience was specified, using ECLIA, ELISA
respectively(anti-HBc)test completed 100 cases of hepatitis B blood
samples of patients with hepatitis B virus core antibody. The positive rate
of anti–HBc of the two methods was detected and record, gives statistical
analysis conclusion. Results The positive rate of anti-HBc ECLIA was up to