植物生理学实验报告叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定

叶绿体色素提取分离与理化性质及含量测定▪（一）实验目的及意义▪（二）实验原理▪（三）实验步骤▪（四）实验报告实验目的和意义▪绿色植物的光合作用是在叶绿体中的叶绿体色素中进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。

▪因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用叶绿体在细胞中运动视频叶绿体在细胞中的分布与结构类囊体膜的结构及功能实验原理植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质。

它一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。

这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。

实验原理▪色素分离的方法有多种，纸层析是最简便的一种。

当溶剂（有机推动剂）不断从纸上流过时，由于混合物（叶绿素提取液）中各种成分在固定相（滤纸纤维素所吸附的水分）和流动相（有机推动剂）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。

▪叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。

实验原理▪叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。

叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。

叶绿素的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。

▪叶绿素中的镁可以被氢离子所取代而成褐色的去镁叶绿素。

去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。

实验步骤(1)▪根据朗伯一比尔定律，某有色溶液的吸光度D与其中溶液浓度C和液层厚度L成正比，即：▪D＝KCL▪D：吸光度，即吸收光的量，C：溶液浓度, K：为比吸收系数（吸光系数），L：液层厚度，通常为1cm.▪如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。

叶绿体色素的提取分离及理化性质检测实验报告摘要：叶绿体是植物细胞中最重要的细胞器之一，其中的叶绿素是进行光合作用的重要色素。

本实验是研究叶绿体的色素成分，通过酒精提取和乙醚分离的方法对叶绿体中的色素进行提取和分离，通过吸收光谱分析、薄层色谱和比色法对叶绿素的化学性质进行检测。

实验结果表明，经过酒精提取和乙醚分离后，我们成功地从叶绿体中提取出了叶绿素和类胡萝卜素。

通过比色法测定叶绿素含量，结果显示样品中叶绿素的含量为0.491mg/g，与文献中报道的值相近。

薄层色谱结果显示，叶绿素的Rf值为0.197，类胡萝卜素的Rf值为0.598。

吸收光谱显示叶绿素在420nm和660nm的波长处有吸收峰。

本实验不仅可以帮助我们深入了解叶绿体的化学成分和理化性质，还有助于我们学习不同的色谱分离和检测方法。

一、实验目的1. 学习通过酒精提取和乙醚分离的方法，用于提取叶绿体中的色素，探究叶绿体的色素成分。

2. 了解叶绿素的化学性质，通过吸收光谱分析、薄层色谱和比色法，检测叶绿素的理化性质。

二、实验原理1. 叶绿体植物细胞中最重要的细胞器之一，是进行光合作用的地方。

叶绿体中最主要的色素，分为叶绿素a和叶绿素b两种，分子式C55H72O5N4Mg。

吸收光谱表现为在绿色和黄色波段有吸收峰，吸收峰位于420nm和660nm处。

3. 类胡萝卜素4. 酒精提取法通过将叶绿体与酒精混合并长时间振荡，使得叶绿体中的色素被溶解到酒精中。

5. 乙醚分离法将酒精溶液中的色素与等量的乙醚混合，色素会被乙醚除去，实现了色素的分离。

6. 比色法根据叶绿素对吸收光谱的特点，可利用比色法测定样品中叶绿素的含量。

7. 薄层色谱根据化合物在不同移动相中的极性，通过在硅胶或薄层板上分离，分离化合物的一种技术方法。

8. 吸收光谱根据吸收法原理，测定样品对特定波长的光吸收情况，从而识别和测定不同化合物的含量和种类。

三、实验步骤1. 取适量淡绿色菠菜叶片，用预冷的0.1mol/L盐酸液洗涤3次。

叶绿体色素的提取分离、理化性质实验报告第一部分提取与分离一实验目的学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法二实验原理叶绿体是进行光合作用的细胞器。

叶绿体中的叶绿体a(C55H72O5N4Mg)、叶绿素b(C55H72O6N4Mg)、胡萝卜素(C40H56)和叶黄素(C40H56O2)与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。

这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。

提取液可用薄层色谱法加以分离与鉴别。

薄层色谱分析法是将吸附剂均匀的涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层做固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂做流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。

流动相通过毛细管作用由下而上的逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱附、再吸附、再脱附……的过程。

由于吸附剂的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。

三实验材料与试剂1 新鲜的菠菜叶片2 体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1，体积比)3 天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸四实验步骤(一)色素提取液的制备1 取新鲜叶片4至5片(2g左右)，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入研钵中。

2 研钵中加入少量碳酸钙粉末，加2至3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加10至15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。

提取液应避光保存。

(二)叶绿体色素的分离1 取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘约1cm处用毛细管划线，风干后再划第二次，重复操作3至4次。

2 在干洁的层析缸中加入适量的展开剂，高度约0.5cm，将硅胶预制板带有色素的一端放下，使其浸入展开剂中(但不要使待测样品浸入展开剂中)。

第1篇一、实验目的1. 学习从植物叶片中提取叶绿素的方法。

2. 了解叶绿素的性质和功能。

3. 掌握层析技术的基本原理和操作方法。

4. 通过实验，加深对绿色植物光合作用的理解。

二、实验原理叶绿素是绿色植物进行光合作用的重要色素，主要存在于植物的叶绿体中。

叶绿素分子由卟啉环和长链脂质组成，具有亲水和亲脂性。

在提取过程中，利用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）可以将叶绿素从植物组织中溶解出来。

层析技术是分离混合物中各组分的一种常用方法，通过不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜绿色植物叶片、无水乙醇、丙酮、层析纸、层析缸、滤纸、镊子、剪刀、研钵、研杵、移液管、滴管、天平等。

2. 实验仪器：分析天平、紫外-可见分光光度计、显微镜等。

四、实验步骤1. 准备植物样品：取新鲜绿色植物叶片，洗净、晾干，用剪刀剪成小碎片。

2. 提取叶绿素：将剪碎的叶片放入研钵中，加入适量无水乙醇，用研杵充分研磨，使叶片充分溶解。

3. 过滤：将研磨后的溶液用滤纸过滤，收集滤液。

4. 蒸发溶剂：将滤液倒入蒸发皿中，在通风橱内蒸发溶剂，直至出现固体。

5. 层析分离：将得到的固体溶解于少量丙酮中，用移液管吸取少量溶液滴在层析纸上，待溶剂挥发后，将层析纸放入层析缸中，加入适量丙酮作为流动相，观察层析过程。

6. 观察与记录：观察层析纸上色素带的分布情况，记录色素带的颜色、位置和宽度。

五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：通过研磨和过滤，成功从植物叶片中提取出叶绿素。

2. 层析分离：在层析纸上观察到三条明显的色素带，从上到下依次为胡萝卜素、叶黄素和叶绿素。

3. 叶绿素性质：叶绿素具有绿色，在紫外-可见光范围内有特定的吸收光谱，可被分光光度计检测。

4. 光合作用：叶绿素是光合作用的主要色素，参与光能的吸收和转换。

六、实验讨论1. 叶绿素的提取：在提取过程中，有机溶剂的选择和用量对叶绿素的提取效果有较大影响。

植物生理学实验报告叶绿体色素的提取分离理化性质和叶绿素含量的测定引言：叶绿体是植物细胞中的一个重要细胞器，其中主要存在着叶绿素等色素，它们在光合作用中起着重要的作用。

研究叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定，对于了解光合作用的机理以及研究植物生理生化过程具有重要意义。

本实验旨在通过实验手段提取叶绿体色素，进行色素的分离、理化性质的研究和叶绿素含量的测定。

材料与方法：材料：菠菜叶片、研钵、磨杵、丙酮、乙醇、石油醚、叶绿素提取液、测色皿、高锰酸钾溶液、浓硫酸。

方法：1.取适量菠菜叶片放入研钵中，加入适量丙酮，用磨杵捣碎成糊状。

2.将捣碎的菠菜糊状物转移到玻璃漏斗中，用石油醚冲洗3次，使叶绿体附着物进一步析出。

3.将漏斗中的上清液收集，并加入适量乙醇，振摇混合，使叶绿素慢慢析出。

4.将释放出的叶绿体颗粒通过离心机离心沉淀10分钟，收集沉淀。

5.取收集到的叶绿体沉淀，加入适量叶绿素提取液，用乳钙酸钠解离剂进行叶绿素含量的测定。

6.将其中一部分叶绿体溶液加入高锰酸钾溶液，观察颜色变化。

7.将其余叶绿体溶液与浓硫酸混合，观察颜色变化。

结果与讨论：通过上述方法，我们成功地提取并分离出菠菜叶片中的叶绿体色素。

加入石油醚可以去除一部分杂质，使叶绿体进一步纯化。

加入乙醇可以使叶绿素从叶绿体中溶出。

通过离心沉淀，我们收集到了叶绿体的沉淀物。

叶绿体的提取液与高锰酸钾溶液反应后呈现蓝色或紫色，这是由于高锰酸钾通过氧化反应将一些具有现菌酮结构的物质氧化为合成叶绿素的前体物质所引起的。

这种反应也证实了叶绿体的存在。

叶绿体溶液与浓硫酸混合后呈现蓝绿色，这是由于浓硫酸通过剥离叶绿体周围的蛋白质和其他有机物质，将叶绿素分子释放出来，产生颜色变化。

叶绿素的含量测定是通过与乳钙酸钠解离剂反应来进行的。

乳钙酸钠解离剂能够与叶绿体中的叶绿素结合，并形成稳定的叶绿素-乳钙酸钠络合物。

这种络合物通过光密度的测定，可以根据比色法来测量叶绿素的含量。

叶绿体色素的提取分离和理化性质实验报告生物学导论实验报告叶绿体色素的提取分离和理化性质一、提取与分离1、实验目的学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。

2、实验原理提取：叶绿体色素为有机酯类化合物，根据相似相容原理，常用有机溶剂提取。

如酒精、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等。

分离：薄层层析法是将吸附剂均匀的涂抹在玻璃板上形成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待测分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂中。

流动相通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板，并带动样品在板上也向上移动，样品中各组成分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱吸附、再吸附……的过程。

由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附能力强的物质相对移动慢一些，儿媳妇能力弱的物质相对移动快一些，从而使各组分有不同移动速度而彼此分开。

3、实验材料与试剂（1）新鲜的菠菜叶；（2）体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末、展开剂（3）钵体、漏斗、三角瓶、剪刀、点样本、毛细管、层析缸、硅胶预制板、滤纸。

4、实验步骤（1）色素提取液的制备取叶4~5片新鲜叶片，洗净，擦干叶表面，去中脉剪碎，放入钵体中。

加入少量碳酸钙，加2~3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，再加入10ml乙醇，上清液过滤，残渣再用10ml乙醇冲洗过滤。

（2）叶绿体色素的分离取硅胶预制板一个，用点样毛细管取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘1cm处用毛细管划线，风干，重复操作3~4次；在干燥的层析缸中加入适量展开剂，高度0.5cm，将硅胶预制板带有色素一端放入，使其下端浸入展开剂中；当色素较好分离，展开剂前沿接近硅胶预制板的上端边缘时，取出，画线。

Rf=斑点中心到原点距离/溶剂前沿到原点距离5、实验结果与分析从上至下为胡萝卜素（橙色）：Rf=6.95/7.35=0.946叶绿素a（蓝绿色）：Rf=5.35/7.35=0.728叶绿素b（黄绿色）：Rf=4.95/7.35=0.673叶黄素（黄色）：Rf=4.10/7.350.558可知，胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素极性依次增大，与硅胶吸附能力依次增强。

一、实验目的1. 理解叶绿素在植物光合作用中的作用及其提取的重要性。

2. 掌握从植物材料中提取叶绿素的基本原理和实验方法。

3. 学习使用有机溶剂提取和分离叶绿素的技术。

4. 了解叶绿素的理化性质和鉴定方法。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的关键色素，主要存在于植物的叶绿体中。

叶绿素分子由一个镁离子和四个吡咯环组成，这些环通过共轭双键形成一个大的共轭体系，使其能够吸收太阳光中的光能。

在提取叶绿素的过程中，利用叶绿素能溶解于有机溶剂（如丙酮、乙醇等）的特性，将其从植物组织中分离出来。

叶绿素的提取通常包括以下几个步骤：1. 植物材料的准备：选择新鲜的绿色植物叶片，洗净、晾干。

2. 研磨：将植物叶片与碳酸钙和有机溶剂混合，在研钵中研磨，使叶绿素从细胞中释放出来。

3. 提取：将研磨后的混合物过滤，收集滤液。

4. 分离：使用色谱技术（如纸层析、薄层色谱或柱层析）对滤液中的叶绿素进行分离。

5. 鉴定：通过观察分离后的色素带颜色和与标准样品比较，鉴定叶绿素的存在。

三、实验材料与仪器实验材料：- 新鲜绿色植物叶片（如菠菜）- 丙酮或乙醇- 碳酸钙- 研钵- 滤纸- 漏斗- 色谱纸或薄层色谱板- 显色剂（如碳酸钠溶液）- 烧杯- 量筒实验仪器：- 烘箱- 蒸馏装置- 显微镜- 分光光度计四、实验步骤1. 植物材料准备：选择新鲜的绿色植物叶片，洗净、晾干，称取适量叶片备用。

2. 研磨：在研钵中加入叶片、碳酸钙和丙酮或乙醇，用玻璃棒研磨至叶片充分破碎。

3. 提取：将研磨后的混合物通过滤纸过滤，收集滤液。

4. 分离：- 纸层析法：将滤液滴在色谱纸上，用合适的溶剂系统进行层析，待溶剂前沿到达预定位置后取出色谱纸，晾干。

- 薄层色谱法：将滤液滴在薄层色谱板上，用合适的溶剂系统进行层析，待溶剂前沿到达预定位置后取出薄层色谱板，晾干。

- 柱层析法：将滤液加入装有吸附剂的层析柱中，用合适的溶剂系统进行层析，收集不同颜色的流出液。

一、实验目的1. 理解叶绿素含量测定的原理和意义。

2. 掌握叶绿素提取和含量测定的实验方法。

3. 培养实验操作技能和数据处理能力。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的光合效率。

本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，依据朗伯-比尔定律，有色溶液的吸光度与其中溶质浓度和液层厚度成正比。

叶绿素在特定波长下具有最大吸收峰，通过测定其吸光度，可以计算出叶绿素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料- 植物材料：女贞、海桐叶片- 试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙粉2. 实验仪器- 分光光度计- 电子天平- 研钵- 试管- 小漏斗- 滤纸- 吸水纸- 移液管- 量筒四、实验步骤1. 样品处理称取新鲜女贞或海桐叶片0.1g左右，剪碎后放入研钵中。

加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入3-5ml 95%乙醇，研磨成均浆。

静置3-5min。

2. 提取取一张滤纸，用乙醇湿润后放入漏斗中。

将提取液沿玻棒倒入漏斗中，过滤到10ml试管中。

用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。

3. 洗涤用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。

直至滤纸和残渣中无绿色为止。

最后用乙醇定容至10ml，摇匀。

4. 测定将叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。

以95%乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。

5. 计算根据吸光度计算叶绿素的含量，公式如下：叶绿素的含量（mg/g）= [(O.D652/34.5)提取液体积（ml）/样品质量（g）]五、实验结果与分析1. 通过实验，成功提取了叶绿体色素，并测定了其吸光度。

2. 根据计算公式，得到了不同样品的叶绿素含量。

3. 分析不同样品的叶绿素含量，可以了解不同植物或同一植物不同部位的叶绿素含量差异。

六、实验总结1. 本实验成功测定了叶绿素含量，掌握了叶绿素提取和含量测定的方法。

2. 通过实验，加深了对叶绿素生理功能的理解。