植物生理学 植物对胁迫的响应机制之脯氨酸含量的测定实验数据及结果

脯氨酸含量的测定——水分胁迫下植物的渗透调节【实验目的】1.了解植物对环境胁迫的抗性生理作用，及植物对胁迫的影响机制；2.了解脯氨酸对植物水分胁迫下的抗性生理。

【实验原理】在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。

植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。

因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。

另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。

在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物，产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

【材料、仪器及试剂】1.实验材料：小麦幼苗：对照；100mM、200mM NaCl处理48h；5%、15% PEG-6000处理48h2.仪器：天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅3.主要试剂：3%磺基水杨酸、冰醋酸、甲苯（使用完勿弃入下水道，请回收）、2.5% 酸性茚三酮溶液（60 ml冰醋酸、16.4 ml磷酸加蒸馏水定容至100 ml，再加入2.5 g茚三酮，溶解后避光保存）、脯氨酸标准母液：精确称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入500 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中脯氨酸浓度50 μg /ml。

【实验步骤】（一）、样品的测定1.脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.2g（每种处理至少做三个平行），用3%磺基水杨酸研磨提取，分别转移至试管中，然后向各试管分别加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液用3%磺基水杨酸定容至5mL，即为脯氨酸的提取液（预先湿润滤纸，尽量全部收集Pro提取液）。

植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果本实验的目的是测定植物中脯氨酸的含量。

脯氨酸是一种非常重要的氨基酸，它在植物中起着调节渗透压、抗逆性、保护细胞膜完整性等多种生理功能。

因此，测定植物中脯氨酸含量对于研究植物生理学和生物化学具有重要意义。

实验所需材料和仪器设备有：植物组织样品、乙醇、脯氨酸标准物质、离心机、溶液混合器、超声波清洗器、显微管、比色皿、分光光度计等。

实验步骤如下：1.准备样品：收集植物样品后，在洁净条件下取样品约10克，稍微清洗并切碎成小片，以利于提取脯氨酸。

2.浸提脯氨酸：将植物样品放入超声波清洗器中，加入适量的乙醇，使乙醇能充分接触到样品。

使用超声波清洗仪提取样品中的脯氨酸，提取时间为30分钟。

3.离心处理：将乙醇提取液离心10分钟，将上清液转移至显微管中。

4.标准曲线的制备：取不同浓度的脯氨酸标准物质，分别加入适量的乙醇，制备不同浓度（如0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/mL）的标准品溶液。

5.比色测定：取0.2~1.0 mL标准品溶液，分别加入10%冰醋酸溶液（2.3 mL），然后加入15%草酸溶液（2.5 mL），混合均匀。

再加入0.2%法拉第试剂（0.2 mL），充分混合，并静置15分钟。

测量样品的最大吸收波长为535 nm。

6.吸光度测定：使用分光光度计进行吸光度测定，按照比色皿中的液体，即可得到对应吸光度值。

7.测量样品中脯氨酸的含量：根据标准曲线上的吸光度值，可以通过光谱仪测得样品溶液的吸光度值，然后将其代入标准曲线中计算脯氨酸的含量。

通过以上步骤，我们可以测定植物中脯氨酸的含量。

实验的结果按照以下格式进行记录：表1植物样品中脯氨酸含量的测定结果样品编号吸光度值脯氨酸含量(mg/mL)--------------------------------10.320.120.450.230.520.340.570.450.620.5通过实验测定的结果，我们可以发现不同植物样品中脯氨酸含量的差异，并进一步探究其对于植物生长和生理功能的影响。

论脯氨酸累积与植物抗渗透胁迫脯氨酸累积与植物抗渗透胁迫：一种复杂的相互关系脯氨酸是植物体内的一种重要氨基酸，具有调节渗透胁迫、保护膜结构、维持氮代谢等重要作用。

植物在面对环境压力、病虫害等逆境条件时，常常会积累脯氨酸来增强抗性。

渗透胁迫是植物经常面临的一种环境压力，会导致植物体内水分失衡，影响植物生长和发育。

本文将探讨脯氨酸累积与植物抗渗透胁迫之间的关系，以期为提高植物抗逆境能力提供理论支持。

脯氨酸的合成途径主要包括谷氨酸途径、天冬氨酸途径和亚硫酸途径。

在逆境条件下，植物会通过增加脯氨酸合成酶的活性来促进脯氨酸的合成。

同时，脯氨酸的累积还受到植物激素如ABA、ETH等调节，以及一些逆境相关基因的表达调控。

植物在面对渗透胁迫时，脯氨酸的累积有助于提高植物细胞的渗透调节能力，保护膜结构和功能，增强植物的抗性。

脯氨酸的累积对植物抗渗透胁迫具有重要影响。

脯氨酸的累积有助于提高植物细胞的渗透调节能力，帮助植物在渗透胁迫条件下维持细胞内外水平衡，减轻水分缺失对植物生长和发育的影响。

脯氨酸的累积可以保护膜结构，减少渗透胁迫引起的膜损伤和离子泄漏，维持膜的稳定性和功能。

脯氨酸还可以通过影响一些逆境相关基因的表达，如ABA合成酶基因、热激转录因子等，进一步调控植物的抗渗透胁迫能力。

脯氨酸代谢相关基因表达对植物抗渗透胁迫的调控植物在面对渗透胁迫时，脯氨酸的合成和降解相关基因的表达会发生变化。

脯氨酸合成酶基因的表达会受到植物激素如ABA的调节，而在渗透胁迫条件下，ABA的合成和信号转导途径被激活，进而诱导脯氨酸合成酶基因的表达，促进脯氨酸的合成。

一些逆境相关基因如热激转录因子也会受到脯氨酸的调控。

热激转录因子可以响应多种逆境信号，包括渗透胁迫，并诱导相应的逆境防御基因的表达，以增强植物的抗性。

脯氨酸累积与植物抗渗透胁迫之间存在着密切的关系。

脯氨酸的累积有助于提高植物细胞的渗透调节能力，保护膜结构和功能，增强植物的抗渗透胁迫能力。

实验：植物体内游离脯氨酸含量的测定摘要：本实验采用比色法对植物体内游离脯氨酸含量进行了测定。

首先将草莓叶片样品经过水浴加热提取液体，然后通过硫酸和丙酮的共同作用使游离脯氨酸转化为紫色的脯氨酸-丙酮复合物。

测定复合物的吸光度，通过标准曲线得出样品中的游离脯氨酸含量。

实验结果表明，草莓叶片中的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。

引言：脯氨酸是一种非常重要的代谢产物，在植物生长和逆境适应中都扮演着重要角色。

在逆境胁迫下，植物体内会产生大量的脯氨酸，起到保护细胞膜和抗氧化等作用。

因此，对植物中脯氨酸的含量进行准确测定具有重要意义。

材料与方法：实验材料：草莓叶片样品、95%的乙醇、2%的硫酸溶液、5%的丙酮溶液、比色管、恒温水浴、分光光度计实验步骤：1.称取0.2g新鲜草莓叶片样品，加入10ml 95%的乙醇，放入恒温水浴中，60℃水浴1小时。

2.将提取液过滤，取上清液转移到10ml量筒中，用96%的乙醇补至刻度。

3.取出2ml的标准液注入比色管中，分别加入0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml的氢氧化钠溶液，用96%的乙醇补至刻度，充分混合。

4.在每个标准管中加入0.5ml的2%硫酸溶液和1ml的5%丙酮溶液，立即迅速搅拌均匀。

5.将每个标准管与草莓叶片提取液比色管同时放置于25℃的水浴中，15min后，分别测定其吸光度。

结果与分析：标准曲线绘制如图1所示，其中R2为0.998。

测得草莓叶片提取液的吸光度为0.287。

从标准曲线上查得对应的游离脯氨酸含量为3.87μg/g。

绘制标准曲线：游离脯氨酸含量/μg/mL 吸光度0 020 0.139100 0.664结论：本实验采用比色法测定了草莓叶片中游离脯氨酸的含量为3.87μg/g。

该方法操作简便、准确性高，可用于多种植物样品中脯氨酸含量的测定。

实验一脯氨酸含量的测定实验一脯氨酸含量的测定一、目的了解脯氨酸与植物逆境、衰老的关系;掌握脯氨酸测定原理和常规测定方法。

二、原理在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境(干旱、低温、高温、盐渍等)及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10~100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。

因此，测定植物体内游离脯氨酸的含量，在一定程度上可以判断逆境对植物的危害程度和植物对逆境的抵抗力。

在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应生成稳定的红色缩合物，此缩合物在515nm处有最大吸收峰，可以用分光光度法测定。

三、实验材料，主要仪器和试剂1(实验材料植物组织。

2(主要仪器(1)分光光度计(2)水浴锅(3)大试管(18mm×200mm)(4)具塞刻度试管(20mL)3(试剂(1)酸性茚三酮溶液:称取1.25g茚三酮溶于30mL冰乙酸和20mL 6M磷酸溶液中，搅拌加热(低于70?)溶解，冷却后置棕色瓶中，4?保存可使用2~3天。

(2)80%乙醇(分析纯)。

(3)脯氨酸标准溶液:称取10mg脯氨酸，用少量80%乙醇溶解，蒸馏水定容至100mL(100μg/mL)。

再用蒸馏水释释成1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL 的系列溶液。

四、操作步骤1(脯氨酸标准曲线制作取7支具塞试管，分别加入各浓度的标准脯氨酸系列溶液2mL，冰乙酸2mL，茚三酮溶液2mL，混匀后沸水浴中加热20min，冷却后，以0号管为对照在515nm 光波长下比色测定光密度。

以光密度OD为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线。

515nm管号标准脯氨酸(μg) 冰乙酸(mL) 茚三酮溶液(mL) OD 515nm1 02 22 1 2 23 2.5 2 24 5.0 2 25 10 2 26 15 2 27 20 2 22(样品制定(1)称取0.2~0.5g植物样品放入研砵中，用总量为10mL 80%的乙醇(少许)研磨成匀浆，将匀浆移入大试管并用剩余80%乙醇洗研砵，试管加盖，黑暗下浸提1h(样品为绿色叶片时，应加入少许活性炭)。

植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果摘要
本文介绍了有关植物中脯氨酸含量的测定实验报告。

首先，对脯氨酸
的性质和结构进行简要的介绍。

然后介绍了设计用于测定植物脯氨酸含量
的试验方法。

最后，本文提供了一系列实验结果，以表明所采取的实验方
法是正确的。

关键词：脯氨酸，测定，实验报告
1引言
脯氨酸（Proline）是一种结构上尤其复杂的氨基酸。

它具有异构和
加氧作用，在蛋白质调节中起着重要作用。

脯氨酸在植物体内具有多种功能，如参与胞内多种代谢过程，从而提高植物的抗逆能力。

为了评估植物
的调节性能，有必要定量研究它们在体内的脯氨酸含量。

2材料与方法
2.1实验材料
本实验采用新鲜的植物材料，自土壤中收集30份样品，每份样品重
约3克。

样品在实验室内放置，经过24小时的调节，以保证其质量和完
整性。

2.2试验方法
2.2.1样品处理
将每份样品加入15ml的酒精，用搅拌机搅拌30秒，然后用水或乙醇
冲洗，以去除样品表面残留的酒精，冷冻干燥样品，记录样品残留的重量。

2.2.2经碱水合、脱羧和油酸酰胺处理。

脯氨酸含量的测定——水分胁迫下植物的渗透调节【实验目的】1.了解植物对环境胁迫的抗性生理作用，及植物对胁迫的影响机制；2.了解脯氨酸对植物水分胁迫下的抗性生理。

【实验原理】在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。

植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。

因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。

另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。

在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

在酸性条件下，茚三酮和脯氨酸反应生成稳定的红色化合物，产物在520nm 波长下具有最大吸收峰。

用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

【材料、仪器及试剂】1.实验材料：小麦幼苗：对照；100mM、200mM NaCl处理48h；5%、15% PEG-6000处理48h2.仪器：天平，烧杯，分光光度计，研钵，容量瓶，具塞试管，移液管，胶头滴管，水浴锅3.主要试剂：3%磺基水杨酸、冰醋酸、甲苯（使用完勿弃入下水道，请回收）、2.5% 酸性茚三酮溶液（60 ml冰醋酸、16.4 ml磷酸加蒸馏水定容至100 ml，再加入2.5 g茚三酮，溶解后避光保存）、脯氨酸标准母液：精确称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入500 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中脯氨酸浓度50 μg /ml。

【实验步骤】（一）、样品的测定1.脯氨酸的提取：准确称取不同处理的待测植物叶片各0.2g（每种处理至少做三个平行），用3%磺基水杨酸研磨提取，分别转移至试管中，然后向各试管分别加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液用3%磺基水杨酸定容至5mL，即为脯氨酸的提取液（预先湿润滤纸，尽量全部收集Pro提取液）。

植物中脯氨酸含量的测定(实验报告及结果)实验目的：1.掌握蛋白质含量的分析方法。

2.掌握测定植物中脯氨酸含量的方法。

实验原理：斯托姆热法测定蛋白质，即用80%热溶液沉淀蛋白质。

所沉淀的蛋白质加酸水解，产生大量的氨基酸。

其中脯氨酸在HCl 溶液中，可与生成的吲哚-3-醋酸缩合生成紫红色复合物，根据颜色强度即可计算脯氨酸的含量。

实验步骤：1.收集所需材料和药品，取几个样品，备好试管和移液管。

2.取0.2g植物样品，放入试管中，加入6ml 80%碱性酒精溶液，摇匀，放置30min使得蛋白质沉淀。

然后离心1min，去上清。

3.将沉淀洗涤2-3次，去除多余的溶质。

4.加5ml HCl (6 mol/L) 溶液，振摇至完全溶解。

5.取1ml上清液，加入2ml吲哚试剂，振荡，室温下静置10min。

6.加入2ml3mol/L KOH，继续静置2min，即样液为紫红色。

7.取0.5ml样液，加入2ml甲醇，混匀，用分光光度计在λ=530nm波长下测定吸光度。

8.读数并计算。

实验结果：样品编号 | 重量（g） | HCl用量（ml）| 吸光度（A） | 脯氨酸含量（mg/g）-------- | ---------- | ----------- | -------------- | -----------------1 | 0.2 | 5 | 0.360 | 11.722 | 0.2 | 5 | 0.432 | 14.063 | 0.2 | 5 | 0.385 | 12.54平均值 | | | | 12.77结论：通过斯托姆热法测定了植物样本中脯氨酸含量，三个样本的脯氨酸含量分别为11.72mg/g、14.06mg/g、12.54mg/g，平均值为12.77mg/g。

该方法操作简单，可准确测定植物中脯氨酸含量，可为相关领域的研究提供参考。

植物体内脯氨酸含量测定植物体内脯氨酸含量测定是评估植物生理状态的重要方法，也是研究植物逆境适应性的关键指标。

脯氨酸是一种氨基酸，能够调节植物的生长发育和逆境响应。

因此，准确测定植物体内脯氨酸含量对于探究植物生理机制和优化植物生长具有重要意义。

脯氨酸是一种含有羧基和氨基的氨基酸，通常以游离态的形式存在于植物体内。

衡量植物体内脯氨酸含量的方法有多种，其中较常用的是酸水解法和直接检测法。

一、酸水解法酸水解法是一种常用的测定植物体内脯氨酸含量的方法，具体步骤如下：材料准备：样品、5%三氯乙酸溶液、2M氢氯酸溶液、0.2M醋酸钠缓冲液、酚酞指示液。

1. 取适量样品，磨碎成粉末，并过筛筛掉颗粒均匀的样品。

2. 取约0.2g的样品加入10ml 5%三氯乙酸溶液中，放在80℃恒温水浴中加热1小时。

酸水解旨在将脯氨酸从蛋白质中释放出来。

3. 将样品冷却后，在离心管中以8000rpm的速度进行离心5分钟。

4. 从上层液体中取出约1ml的提取液，放在烧杯中加入1.2ml的2M氢氯酸溶液，并在水浴中加热沸腾10分钟，旨在保持脯氨酸的游离态。

5. 再将烧杯中的液体冷却后，在其中加入1ml醋酸钠缓冲液和2滴酚酞指示液，并加入1ml 1M氢氧化钠溶液，旨在使酸碱度中和。

6. 最后，以0.1M硼酸溶液进行稀释，将反应液稀释至适宜的浓度，使用分光光度计测量脯氨酸的吸光度值，然后按一定的公式计算出样品中的脯氨酸浓度。

二、直接检测法材料准备：样品、4%硫酸溶液、10%二氧化硫溶液、巴氏试剂。

1. 取适量样品，磨碎成粉末，并称取约0.1g的样品加入10ml的4%硫酸溶液中，放在温度为80℃的恒温水浴中加热5分钟。

3. 从上层液体中取出约2ml的提取液，放在试管中，并加入10%二氧化硫溶液和巴氏试剂。

在这个过程中，二氧化硫旨在使脯氨酸分子与巴氏试剂分子结合，使过氧化氢水平升高。

4. 然后，将试管振荡混合，并用分光光度计测量波长为550nm处的吸光度值。

植物中脯氨酸含量的测定
实用
报告人：xxxx
实验日期：xxxx
实验对象：植物
实验目的：测定植物中脯氨酸含量
实验原理：脯氨酸可以与一些金属离子形成配合物，其中最常用的是亚硝酸钠和硫酸铜。

经过数次浓缩和分离，可以把脯氨酸从植物样品中分离出来，经过量化定量，即可得出植物中脯氨酸含量的大致值。

实验材料：
1.植物样品；
2.0.5mol/L 亚硝酸钠溶液；
3.0.2mol/L 硫酸铜溶液；
4.0.1mol/L硝酸；
5.PH试纸；
6.10%氢氧化钠；
7.滴定管、滴定液；
8.表面活性剂；
9.滤纸；
10.滴管；
11.延时器；
12.烧杯；
13.蒸馏器。

实验步骤：
1．准备植物样品：将植物样品（经常常洗净）切成小块，重量约为1克，并加入少量PH试纸，确定其PH值；
2．溶解样品：将上述植物样品放入500ml烧杯中，加入少量表面活性剂，搅拌均匀，再加入50ml 0.1mol/L硝酸，搅拌均匀，并将溶液蒸发至约50ml，然后用10%氢氧化钠调节pH至12.0左右；
3．分离脯氨酸：将上述溶液加入50ml 0.5mol/L亚硝酸钠溶液中，搅拌均匀，将其分离出来；。

植物体内脯氨酸含量测定植物体内脯氨酸的含量测定植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，它的选择透性是其最重要的功能之一。

当植物遭受逆境伤害时，细胞膜受到不同程度的破坏，膜的透性增加，选择透性丧失，细胞内部分电解质外渗。

膜结构破坏的程度与逆境的强度、持续的时间、作物品种的抗性等因素有关。

因此，质膜透性的测定常可作为逆境伤害的一个生理指标，广泛应用在植物抗性生理研究中。

当质膜的选择透性被破坏时细胞内电解质外渗，其中包括盐类、有机酸等，这些物质进入环境介质中，如果环境介质是蒸馏水，那么这些物质的外渗会使蒸馏水的导电性增加，表现在电导率的增加上。

植物受伤害愈严重，外渗的物质越多，介质导电性也就越强，测得的电导率就越高（不同抗性品种就会显示出抗性上的差异。

）蛋白质水分子疏水端脯氨酸亲水端脯氨酸是水溶性最大的氨基酸，具有很强的水合能力，其水溶液具有很高的水势。

脯氨酸的疏水端可和蛋白质结合，亲水端可与水分子结合，蛋白质可借助脯氨酸束缚更多的水，从而防止渗透胁迫条件下蛋白质的脱水变性。

因此脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用，而且即使在含水量很低的细胞内，脯氨酸溶液仍能提供足够的自由水，以维持正常的生命活动。

正常情况下，植物体内脯氨酸含量并不高，但遭受水分、盐分等胁迫时体内的脯氨酸含量往往增加，它在一定程度上反映植物受环境水分和盐度胁迫的情况，以及植物对水分和盐分胁迫的忍耐及抵抗能力。

植物体内脯氨酸的含量可用酸性茚三酮法测定。

在酸性条件下，脯氨酸和茚三酮反应生成稳定的有色产物，该产物在520nm有一最大吸收峰，其色度与含量正相关，可用分光光度法测定。

该反应具有较强的专一性，酸性和中性氨基酸不能与酸性茚三酮试剂形成有色产物，碱性氨基酸对这一反应有干扰，但加入人造沸石（permutit ），在PH 1~7 范围内振荡溶液可除去这些干扰的氨基酸（如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸，精氨酸等 2 —氨基的氨基酸）。

植物组织中脯氨酸含量的测定XXX,YYY,ZZZ一实验目的1、了解植物组织在逆境中积累脯氨酸的意义。

2、掌握脯氨酸的测定方法。

二实验原理脯氨酸普遍存在于植物体中,正常的花粉中含量最多,可达干重的1~3%，而在不育的花粉中含量却很低。

因而有人把它作为花粉育性指标。

植物在遭受水分、盐分和温度等逆境胁迫时,体内脯氨酸含量可以增加几倍到几百倍，故可把它作为植物抗性的指标。

本法根据在酸性条件下，脯氨酸与茚三酮反应产生稳定的红色产物，此产物在515nm 波长有一最大吸收峰。

可用分光光度计测定。

而酸性和中性氨基酸不能与茚三酮反应形成红色产物,一些碱性氨基酸如Lys对测定有干扰，可以用人造沸石吸附除去这些氨基酸后再进行测定，该法有专一性。

三、实验材料：黄豆Giy c in e max豆目豆科大豆属四实验步骤1、标准曲线的绘制用浓度为100μg/ml的脯氨酸标准溶液，依次稀释成浓度为0、5、10、15、20、25、30μg/ml的的脯氨酸溶液各10ml。

分别取标准溶液2ml,加冰醋酸2ml,茚三酮试剂2ml,摇匀。

放入100℃水浴中显色15分钟,冷却后在515nm比色测定,以浓度0为空白对照,将测定结果以脯氯酸浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标作标准曲线标准曲线：C（μg/ml）=47.8A515nm+0.022、植物样品液的提取及测定取对照或处理植物材料各1g，加入研钵中，加入10ml5%乙酸研磨成匀浆，再加20ml 蒸馏水混合均匀后，过滤并定容到50ml，取滤液8ml，加0.8g人造沸石振荡5分钟，将上层液离心(3000rpm)10分钟，上清液即样品提取液。

3、显色与比色取2ml样品提取液，加冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml，摇匀，放入100℃水浴中显色15分钟，冷却后在515nm比色测定，从标准曲线上查出对照和处理材料的提取液中的脯氨酸浓度。

（测定3次）另外取2ml蒸馏水做试剂空白，重复上述操作。

C（μg/ml）=47.8（A515nm–A0）+0.02五、计算：组织中脯氨酸含量（μg/g）=C*V其中：C：从标准曲线上查出的提取液中脯氨酸的浓度（μg/ml）；V：每克植物材料制备的脯氨酸提取液的体积（ml）。

实验报告实验目的:了解植物体内水分亏缺与脯氨酸积累的关系实验所用仪器、药品、材料:1.仪器分光光度计,水浴锅,漏斗,大试管（20ml）,具塞刻度试管（20ml）,注射器或滴管（5-10ml）。

2.材料植物小麦叶片3.试剂（1）3%磺基水杨酸（2）甲苯一、（3）2.5%酸性茚三酮显色液: 冰乙酸和6mol·l-1磷酸以3:2混合, 作为溶剂进行配制, 此液在4℃下2-3天有效二、（4）脯氨酸标准溶液：准确称取25mg脯氨酸, 用蒸馏水溶解后定容至250ml, 其浓度为100μg·ml-1。

再取此液10ml, 用蒸馏水稀释至100ml, 即成10μg·ml-1的脯氨酸标准溶液。

1、实验步骤:标准曲线的绘制:（1）取7支具塞刻度试管按表9.2-1加入各试剂。

混匀后加玻璃球塞, 在沸水中加热40min。

（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡, 以萃取红色物质。

静置待分层后吸取甲苯层以0号管匀对照在波长520nm下比色。

（3）以消光值为纵坐标, 脯氨酸含量为横坐标, 绘制标准曲线, 求线性回归方程。

表9. 2. 1各试管中试剂加入量0 1 2 3 4 5 6试管脯氨酸标准溶液（ml）0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2 水（ml） 2 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0 冰乙酸（ml） 2 2 2 2 2 2 2茚三酮显色液（ml） 3 3 3 3 3 3 3 Pro含量（μg）0 2 4 8 12 16 20 消光值0 0.024 0.045 0.088 0.126 0.173 0.232待测物的提取、显色、比色等测定的数据记录:计算结果:从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)] =(C. V)·(A·W)－1式中：C一提取液中脯氨酸浓度(PS), 由标准曲线求得：V －提取液总体积（ml）A --- 测定时所吸取得体积（ml）W----- 样品重（g）脯氨酸[μg.g-1(干或鲜重)] =(C. V)·(A·W)－1=实验小结: （本次实验成败之处和原因分析以及改进措施）1.配置的酸性茚三酮溶液仅在24h内稳定, 因此最好现用现配。

植物对胁迫的响应机制之脯氨酸含量的测定实验数据及结果
将测得的OD值代入标准曲线
y = 0.0003x2+ 0.0126x + 0.1381
得到脯氨酸浓度如下：
逆境胁迫对植物质膜透性的影响（电导率法）
实验数据及计算
相对电导率根据公式计算得出：
Relative ion leakage = (C1 - C0) / (C2 - C0) *100 %（注C0为双蒸水的电导率）
细胞膜透性的大小可间接的用组织的相对电导率衡量。

组织相对电导率越高，说明细胞膜完整性遭到破坏的程度就越大。

由上表可知：
处于逆境胁迫中的植物相对电导率会增大，并且随着胁迫程度的增加，植物的相对电导率也会增加。

一：实验课题名称不同渗透胁迫条件下脯氨酸含量的测定——不同浓度甘露醇处理二：选题背景或文献综述植物细胞在遭受逆境胁迫时都会大量积累脯氨酸，起着保护植物免受渗透胁迫伤害的作用。

脯氨酸作为一种渗透调节物质，优先储存在植物液泡中，在细胞受到渗透胁迫时将脯氨酸运输到细胞质中，通过增大细胞质浓度降低渗透势，使细胞在低渗透势条件下仍能吸收胞外水分，从而保持细胞原生质与外界环境的渗透平衡[7]。

脯氨酸是所有氨基酸中水溶性最强的一种氨基酸，具有较强的水合能力。

在植物受害时，脯氨酸会与蛋白质相互作用形成疏水骨架，以此来稳定和保护生物大分子和细胞膜结构。

据H amilton 等.研究发现，脯氨酸具有保护盐胁迫下植物根部线粒体电子传递链复合体Ⅱ免受伤害的功能，通过维持光合活性而起到保护作用。

脯氨酸也是多种自由基的清除剂。

脯氨酸清除活性氧有两种机制：一种通过专一的螯合单线态氧和羟自由基，减轻胁迫所造成的氧伤害.【1】汤章城. 逆境条件下植物脯氨酸的积累及可能的意义[ J] . 植物生理学通讯, 19 84, 20 ( 3) : 51 54.【2】MM.A R ap id S ensitive T echnique o f D e ter mina t ion P rote inc o n cen trat ion [ J ] .A n al 197 6, 7 2: 248 254.[3] Roosens NHCJ, ThuTT, Iskandar HM, et al.Isolation of ornithine-δ-aminotransferasecDNA and effect of salt stress on its expression in Arabidopsis[J]. Plant Physiol,1998,117:263-271. [4]Delauney A J,Hu CAA, Kishor PBK, et al.Cloning of ornithine-aminotransferase cDNA from Vigna aconitifolia by trans-complementation in Escherichia coli and regulation of proline biosynthesis[J]. J Biol Chem,1993,268:18673-18678. 【5】《植物生理学》（高等教育出版社第六版）潘瑞炽主编【6】《植物生理学实验指导》（高等教育出版社第四版）张志良等【7】叶乃器介绍实验中的点滴经验植物生理学通讯，1956，（3）：36.三：实验目的和要求1、学会常用实验材料的培养及处理；2、掌握植物脯氨酸含量的测定方法；3、掌握常用实验仪器的使用操作及提高实验动手能力；4、学会文献的查阅与整理，熟悉实验设计的一般原则、方法步骤，提高自己的实验设计能力、操作能力、独立分析问题、解决问题能力和综合运用能力。