微生物的分离与计数PPT课件

实验五 微生物的分离、接种及培养法

一 目的要求

1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。

2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。

二 实验原理

从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。

在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。

土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。 微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。

三 实验材料

1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。

2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。

3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。

四 实验内容与步骤

（一）微生物的分离技术

1. 平板划线分离法 借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。具体方法如下：

倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录

（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。

（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。

（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。然后将培养皿倒置放入恒温培养箱 37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。

溧二高高三生物一轮复习37 微生物的分离与培养

2015-11-21

1 微生物的分离与培养

一．考纲要求： 班级 姓名

1.微生物的分离和培养 （A级）

二．知识梳理

考点一 培养基

1．培养基的营养构成

(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、 、 和无机盐。

(2)不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营养物质及氧气的需求。

易错警示

①自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。

②对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。

③有些培养基不需要添加特殊营养物质，生物自己能合成，如大肠杆菌能合成某些维生素，作为特殊营养物质。

2. 培养基的分类

划分标准 培养基种类 特 点

物理性质 液体培养基 不加凝固剂

固体培养基 加凝固剂，如

用途 选择培养基 培养、分离出特定微生物

鉴别培养基 鉴别不同种类的微生物

3.制备固体培养基的流程

计算→称量→溶化→ →

倒平板操作的注意事项：

①倒平板的适宜温度是 ℃左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

②培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不要完全打开；整个操作过程要在

旁进行，避免杂菌的污染。

③平板冷凝后需 ，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

④若倒平板时，培养基溅在皿盖和皿底之间的部位，这个平板应该 。

考点二 微生物培养的无菌操作和接种方法 溧二高高三生物一轮复习37 微生物的分离与培养

鲤鱼肠道微生物的采集、分离、培养与观察计数

试验菌株分离于健康的鲤鱼。鲤鱼购自XXX市某鱼场，选择体重约0.5到0.6kg无外伤健壮活泼的鲤鱼，于50cm×20cm×50cm的水族箱中饲养7天以上，水温控制在28到29.5℃之间，确认健康无病后用于试验。

主要试剂：普通培养基配制按常规方法进行，细菌微量生化鉴定管、药敏纸片购于xxx有限公司。

试验方法：细菌的分离纯化无菌操作收集肠道内容物，吸取适量富集培养液涂布于普通琼脂平板，经29℃培养过夜，挑取典型菌落划线接种分离单菌落，经传代2到3次纯化后，转种于普通琼脂斜面培养基保存、备用。

细菌生理生化特性、药敏试验参照吕爱军等方法进行。

结果：

菌落及形态特征：

从健康鲤鱼肠道里分离获得CC-1、CC-2两株菌株，在普通培养基上29℃恒温培养24h菌落形态呈圆形湿润、隆起、不透明、边缘整齐，CC-1株菌落直径略大，CC-2株中等大小。2株分离细菌染色镜检均为革兰氏阴性短杆菌，大小为（0.5到0.7）μm×（1.5到2.0）μm，成对或堆状排列。

通过观察鱼肠道菌群是肠道的正常组成部分，是肠道微生物与宿主以及所处的水生环境形成相互依赖、相互制约的微生态系，不仅能影响到鱼类的生长、发育、生理和病理，还对营养物质的消化

吸收、免疫反应以及器官的发育等方面具有不可替代的作用。

第1章 发酵工程：

第2节 微生物的培养技术及应用 第2课时 微生物的选择培养和计数

学有目标

——新课程标准必明 记在平时——核心语句必背

1.阐述选择培养的原理。

2．举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。

3．概述测定微生物数量的方法。 1.实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

2．在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。

3．测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目，但统计结果往往比活菌的实际数目少。

4．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。

[理清主干知识]

一、选择培养基

1．微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

2．选择培养基：在微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。

二、微生物的选择培养

土壤取样―→梯度稀释―→涂布平板―→培养观察

三、微生物的数量测定

1．稀释涂布平板法

(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

(2)注意事项

①一般选择菌落数为30～300的平板进行计数。

②通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。 ③在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。

④统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

2．测定微生物数量的另一种常用方法：显微镜直接计数法。