氰化高铁血红蛋白测定法

(HGB)
氰化高铁血红蛋白测定法
原理：
血液中除硫化红蛋白(SHb)外的各种血 红蛋白(如氧化血红蛋白、碳氧血红蛋白、 高铁血红蛋白或其他衍生物)均可被高铁氰 化钾氧化称高铁血红蛋白，再与氰离子(CN-) 结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白，氰化 高铁血红蛋白在波长540nm处有一个较宽的 吸收峰，它在540nm处的吸光度同它在溶液 中的浓度成正比，常规测定可以从HiCN参 考液制作的标准曲线上读取结果。
警告值(危机值) Hb＜50 g/L 或 ＞ 250 g/L
贫血程度划分

轻度
Hb 正常下限 —91 g/L 症状轻微；
中度 Hb 90-60 g/L 体力劳动时心慌气短； 重度 Hb 60-31 g/L 休息时感觉心慌气短；
极重度 Hb ≤ 30 g/L 常合并贫血性心脏病。
注意事项

HiCN试剂应贮存在棕色的有塞的玻璃瓶中， 不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测 定结果偏低
HiCN试剂应在4℃保存，不能0℃保存，因结 冰可使试剂失效 白细胞过高或球蛋白异常增高时，可产生浓 度干扰实验 氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应除毒 处理后再弃去



质量控制
HiCN试剂应4℃保存，否则试剂失效，直 接影响检测质量 试剂应保持新鲜，至少一个月配制一次 样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时， 可干扰实验，解决方法是：白细胞过高， 离心后取上清液比色；球蛋白异常增高 (如肝硬化者)，比色液中加入少许固体氯 化钠或碳酸钾，混匀后溶液澄清后再比 色
测定值假性增高
稀释倍数不准确 红细胞未完全溶解
血浆中脂质或蛋白质量增加
废液处理
氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液
应首先以水稀释(1:1)，再加次氯酸钠
35ml/L，充分混匀，放置15小时以上，使
CN-氧化成CO2和N2挥发，再排入下水道，
废液不能直接与酸性溶液混合，避免产生
剧毒的氰氢酸气体
将市售氰化高铁血红蛋白(HiCN)参考
液稀释为四种浓度(200g/L、100g/L、 50g/L、25g/L)，然后以HiCN试剂调零，分 别测定各自在540nm处的吸光度，以血红 蛋白浓度(g/L)为横坐标、绘制标准曲线。

常规检测操作
⑴ 取小试管1支，加入HiCN试剂5ml；
⑵ 用清洁干燥微量吸管准确吸取末梢静脉 血20ul；擦去管外余血，将吸管插入小试 管中稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取 上清液，清洗吸管2-3次，混匀； ⑶ 静置5分钟后，测定待测标本在540nm下 的吸光度； ⑷ 查标准曲线求得血红蛋白含量。
无水磷酸二氢钾 [KH2PO4]
非离子表面活性剂
0.1，再加蒸馏水至1000ml混匀，试剂
为淡黄色透明溶液，PH值在7.0-7.4。血红蛋白应在5min内完全转 化为高铁血红蛋白。
▼贴标签：写明试剂名称、配制时间、有效期、贮存法。
检测步骤

制备标准曲线
计算公式

血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×64458/44000 ×251
=测定管吸光度×367.6

式中：64458为目前国际公认的血红蛋白平均分子量
44000为1965年国际血液学标准化委员会公布的 血红蛋白摩尔吸光系数。
251为稀释倍数
生物参考区间
成年男性 成年女性 新生儿 婴儿 儿童 131-172 113-151 180-190 110-120 120-140 g/L g/L g/L g/L g/L
氰化高铁血红蛋白测定法 方法学评价
是国际血液学标准化委员会推荐的参
考方法，该法操作简单、显色快、结果稳
定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。
其致命的弱点是氰化钾试剂中剧毒，使用 管理不当会造成公害。
试剂
氰化高铁血红蛋白测定法试剂
氰化钾[KCN] 高铁氰化钾[(K3Fe(CN)6)]
0.050g 0.200g

血红蛋白 （HGB）
临床意义 生理性变化
增高
•新生儿、 高原地区居住者
减低
•主要见于婴幼儿 老年人 •及妊娠中晚期等
血红蛋白 （HGB）
临床意义
增高
•真性红细胞增多、 代偿性红细胞增多症 •先天性心脏病、 慢性肺部疾病、脱水
病理性变化
减低
•各种贫血、白血病 •产后、手术后、大 量失血
结果分析