氰化高铁血红蛋白法

6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。

１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。

１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。

10微升量吸管。

１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。

贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。

１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。

１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。

计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。

D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。

HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。

１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。

1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。

参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。

氰化高铁血红蛋白测定法氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生物化学实验方法，用于测定血液中的血红蛋白含量。

本文将介绍这种测定方法的原理、步骤和应用。

一、原理氰化高铁血红蛋白测定法是基于血红蛋白与氰化高铁反应的原理。

血红蛋白是一种含有铁离子的蛋白质，与氰化高铁反应后形成氰合血红蛋白，其吸收波长为540 nm。

通过测定氰合血红蛋白的吸光度，可以间接测定血液中的血红蛋白含量。

二、步骤1. 血样处理：取适量的血液样品，离心分离出血浆，将血浆与氰化高铁试剂混合均匀。

2. 反应：将混合液放入分光光度计或分光比色计中，设定波长为540 nm，记录初始吸光度。

3. 添加还原剂：在反应过程中，加入适量的还原剂，如还原葡萄糖等，使氰合血红蛋白还原成血红蛋白。

4. 再次测定：记录还原后的吸光度。

5. 计算血红蛋白浓度：根据吸光度的变化，利用标准曲线或计算公式，计算出血液中的血红蛋白浓度。

三、应用氰化高铁血红蛋白测定法广泛应用于临床医学和生物研究中。

以下是该方法的几个常见应用：1. 临床诊断：血红蛋白是血液中的重要成分，其测定对于诊断贫血、血液病等疾病具有重要意义。

氰化高铁血红蛋白测定法可以快速、准确地测定血红蛋白含量，帮助医生进行诊断。

2. 药物研发：在药物研发过程中，需要评估药物对血红蛋白的影响。

氰化高铁血红蛋白测定法可以用于评估药物对血红蛋白的结合能力或解离能力，进而判断药物与血红蛋白的相互作用。

3. 营养评估：血红蛋白含量与身体的营养状况密切相关。

通过氰化高铁血红蛋白测定法，可以评估人体的血红蛋白含量，从而判断是否存在营养不良或缺铁性贫血等问题。

4. 动物实验：在动物实验中，血红蛋白的测定对于评估动物的健康状况和实验结果的可靠性至关重要。

氰化高铁血红蛋白测定法可以用于动物血液样品的血红蛋白浓度测定。

氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的测定血红蛋白含量的方法。

其原理简单，步骤明确，应用范围广泛。

在临床医学、药物研发、营养评估和动物实验等领域都有重要的应用价值。

生物材料溶血性标准化评价方法比较:溶血率法和氰化高铁血红蛋白法张伶俐　朱蔚精　谭言飞　屈树新　张兴栋△(四川大学分析测试中心生物学评价实验室,生物材料工程研究中心,成都　610064) 摘要　采用游离血红蛋白直接测定法即溶血率测定法(根据ISO TR7405)和氰化高铁血红蛋白法(根据ISO 1099324)测定了羟基磷灰石(陶瓷)和胶原(高分子材料)的溶血性能,结果提示这两种方法的结论是一致的,且氰化高铁血红蛋白法较血红蛋白直接测定法有灵敏、稳定、可比性好等优点,值得推广应用。

但它存在着一些标准中尚未明确规定的问题。

作者在大量试验和不违背标准原则的基础上提出了一些改进意见,使它更具有可操作性,以便于标准化评价生物材料的溶血性能。

关键词　生物学评价　血液相容性　溶血试验Com par ison between Hem olysis Percen tage M ea surem en t and Hem iglob i ncyan ide M ea surem en t for Standard iz i ng the Eva lua tion ofHem olytic Properties of B ioma ter i a lsZhang L i ngl i　Zhu W e ij i ng　Tan Yanfe i　Qu Shux i n　Zhang X i ngdong∃(B iolog ica l E va lua tion L aborota ry,A na ly sis and T esting Cen ter,E ng ineering R eseach Cen ter in B io m a teria ls,S ichuan U n iversity,Cheng d u　610064,Ch ina) Abstract　In th is study,tw o m ethods——the supernatant hemoglobin spectropho tom etry,i.e.hemo lysis percentage m easurem ent(acco rding to ISO TR7405)and the hem iglobincyanide m easurem ent(acco rding to ISO 1099324)——w ere used to assay the hemo lytic p roperties of hydroxyapatite(bi oceram ics)and co llagen(po lym er).T he results show ed that the conclusi ons draw n from using the tw o m ethods w ere basically consistent,and the lat2 ter w as mo re sensitive,stable and comparable.How ever,som e of the p rocedures in the hem iglobincyanide m ethod w ere no t defined in details.So based on our experi m ents w e have offered som e suggesti ons and i m p rovem ents, w h ich do no t deviate from ISO and A STM standards,fo r h iher p racticability of usig it in standardizing the evalua2 ti on of the hemo lytic p roperties of bi om aterials.H em iglobincyanide m easurem ent is w o rthy of w ider app licati on.Key words　B i o logical evaluati on H emocompatibility H emo lysis test1　引　言与血液直接或间接接触的生物材料必须评价它的血液相容性。

氰化高铁血红蛋白测定法氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的血红蛋白测定方法，通过测定血红蛋白在氰化高铁存在下的吸光度变化，可以定量测定血液中的血红蛋白含量。

本文将详细介绍氰化高铁血红蛋白测定法的原理、步骤、优缺点以及应用等方面内容。

一、原理：氰化高铁血红蛋白测定法是基于血红蛋白与氰化高铁形成氰化高铁血红蛋白（MetHbFe(CN)5）的特点进行测定的。

当血液中存在氰化高铁时，血红蛋白与氰化高铁发生反应，生成氰化高铁血红蛋白，其吸收峰位在630 nm处。

血红蛋白的浓度可以通过测定吸光度来推算。

二、步骤：1. 准备工作：配制所需试剂，包括含氰化高铁的溶液、去离子水等。

2. 标定溶液的制备：用血红蛋白标准溶液制备出不同浓度的标定溶液。

3. 测定样品的制备：取一定量的待测样品，加入适量的氰化高铁溶液进行反应。

4. 吸光度测定：使用分光光度计等仪器，测定标定溶液和待测样品的吸光度。

5. 数据处理：根据吸光度与血红蛋白浓度的关系，计算出待测样品中血红蛋白的浓度。

三、优缺点：1. 优点：（1）灵敏度高：氰化高铁血红蛋白测定法对血红蛋白的检测灵敏度较高，可以提供准确的浓度结果。

（2）操作简便：该方法的操作步骤相对简单，对实验条件的要求较低，适用于临床实验室快速测定血液样品中的血红蛋白含量。

（3）广泛应用：氰化高铁血红蛋白测定法被广泛应用于临床实验室、医疗机构以及科研领域，能够快速准确地测定血液中的血红蛋白含量。

2. 缺点：（1）有毒性：氰化高铁具有一定的毒性，需特别注意在实验过程中的安全操作，避免接触和摄入。

（2）受干扰较大：在应用过程中，有些物质如某些药物、代谢产物等可能会影响测定结果，造成测定误差。

四、应用：氰化高铁血红蛋白测定法广泛应用于临床和研究领域，主要用于以下方面：1. 临床检测：在医疗机构中，血红蛋白含量的测定对于诊断和治疗某些疾病至关重要。

通过氰化高铁血红蛋白测定法，可以快速准确地测定血液中的血红蛋白含量，以辅助疾病的诊断和治疗过程。

Word -可编辑实验二 血红蛋白的测定（氰化法）【原理】血红蛋白在铁氰化钾和氰化钾的作用下，生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白（红色），其色彩深浅与血红蛋白的含量成正比。

氰化高铁血红蛋白在540nm 波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。

其化学反应式如下：血红蛋白 铁氰化钾 高铁血红蛋白 氰化钾 氰化高铁血红蛋白【仪器】1．10μl 血色素吸管（或定量毛细管）。

2．5ml 或10ml 带盖试管。

3．721或72型分光光度计。

【试剂】称取碳酸氢钠140mg 、铁氰化钾200mg 、氰化钾50mg ，用蒸馏水溶解并稀释到1000ml 。

储藏于棕色试剂瓶内，在4℃冰箱保存，至少可稳定数月到一年。

【操作步骤】1．汲取2.5ml 试剂于5ml 带盖试管中，加10μl 入血液，混匀后放置15分钟。

2．选用0.5cm 光径比色杯，于540nm 波长下，以试剂调节仪器零点，测定各样品管之光密度，将所测得之光密度乘以73.6即为血红蛋白之含量（g/100ml ）。

计算公式如下：C t =待测之血红蛋白含量（g%）D 540HiC N =在540nm 波长下测得之氰化高铁血红蛋白之光密度251=测定时血液的稀释倍数（血10μl 参加试剂2.5ml 中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数。

Ct = = D 540HiC N ×73.6 4410000×6D 540HiC N千里之行，始于足下0.5=比色杯光径64458=血红蛋白的分子量10000=将mg/L换算成g/100ml的数字【评价】【附】1．本法为国际血液学标准化委员会（ICSH）所推荐，具有操作简便、不需要标准、结果确切可靠等优点。

2．应用本法举行血红蛋白的测定，所用分光光度计的波长必须事先经过校正。

3．实验条件改变，如更换了光电池或灯炮、电压不稳、试剂换了批号等等均会引起光密度的改变。

【职称考试葵花宝典】：一名检验师的考试笔记（临检篇）罗江彭虞城县人民医院检验科1．肝素多为肝素钾盐和钠盐，通过加强抗凝血酶III灭活丝氨酸蛋白酶的作用，阻止凝血酶的形成，进而阻止血小板的聚集。

肝素是红细胞渗透脆性实验的理想抗凝剂，也是动脉血气分析常用的抗凝剂。

2．枸橼酸盐能与血液中钙离子结合形成螯合物，抗凝作用不如其他抗凝剂。

是输血保养液的成分。

3．瑞氏染液中的缓冲液是磷酸盐，目的是缓冲溶液PH值。

瑞氏染液的最适PH值是6.4-6.8。

4．造血干细胞到网织红细胞需要72小时。

网织红到成熟红细胞需要48小时。

离体血液中的网织红细胞仍然会继续成熟，所以网织红计数应及时测定。

衰老的红细胞主要在肝脾处破坏。

5．健康成年人周围血液中，除网织红细胞外，均为正常形态的成熟细胞。

6．泪滴形红细胞，骨髓纤维化时增多，常作为诊断指标之一。

7．镰形红细胞:红细胞所含的异常血红蛋白S（HbS），在缺氧环境中溶解度降低，形成长形或尖形的结晶体，使红细胞膜变形，形成镰形。

8．裂片型红细胞是红细胞通过管腔狭小的病变微血管或微血栓的纤维蛋白丝切割所致。

微血管病性溶血性贫血，DIC时增多。

9．嗜多色性红细胞呈淡灰蓝色和灰红色。

是因为胞质内残存的少量嗜碱性RNA与嗜酸性血红蛋白同时存在，因而呈现嗜多色性。

10．豪焦小体又称为染色质小体。

暗紫红色圆形小体，为核碎裂和溶解后所剩余的部分最常见于巨幼细胞性贫血。

11．中性粒细胞的胞质内颗粒分为嗜天青颗粒和特殊颗粒，嗜天青颗粒较少，约占20%属于溶酶体。

特殊颗粒数量较多，约占80%。

嗜酸性粒细胞中的嗜酸性颗粒属于溶酶体。

嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒属于肝素和组胺，肝素具有抗凝作用，组胺参与过敏反应。

12．严重感染及大面积烧伤等情况下，中性粒细胞的胞质中出现比平常中性颗粒大，大小不均，随机分布的紫黑色和深紫褐色颗粒称为中毒颗粒。

13.正常的中性分叶核粒细胞以2-3叶多见，杆状较少，两者比值约为13:1。

6.1 血红蛋白测定（氰化高铁法）消光系数法和标准曲线法任选其一测定血红蛋白。

１.6.1.1 光系数法１.6.1.1.1 原理血红蛋白(haemoglobin，Hb)被铁氰化钾氧化后生成高铁血红蛋白，再生氰离子结合形成氰化高铁血红蛋白（红色），氰化高铁血红蛋白（红色）极为稳定，在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。

１.6.1.1.2 仪器721型或其它型号的分光光度比色计。

10微升量吸管。

１.6.1.1.3 试剂称取碳酸氢纳（）140毫克\铁氰化钾200毫克、氰化钾50毫克，用水溶解并稀释到1000毫升。

贮存於棕色试剂瓶内，在暗处或冰箱（+4℃）保存，至少可稳定数月到一年。

１.6.1.1.4 实验步骤１.6.1.1.4.1 试剂2.5毫升於5毫升带盖试管中，加入10微升血液，混匀后，放置15分钟。

１.6.1.1.4.2 选用0.5厘米光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调零点，将所得样品管之光密度乘以73.6，即为血红蛋白之浓度（克%）。

计算公式如下：Ct=待测的血红蛋白（克%）浓度。

D 540 = 氰化高铁血红蛋白在540nm波长下测出的光密度。

HICN251=测定时血液的稀释倍数（血10微升加入试剂2.5毫升中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数0.5=比色杯的光径10000=将（毫克/升）换算成（克%）的数字１.6.1.1.5 注意事项１.6.1.1.5.1 试剂不要放在聚乙烯瓶内，以免因氰离子与其反应而使试剂作用降低。

１.6.1.1.5.2 仪器因mM消光系数法完全依靠仪器的吸光度来计算,故此法要求所用的仪器性能要符合要求(如仪器的波长准确与否,以及灵敏度及线性等),否则将直接影响测定的结果。

1.6.1.1.5.3仪器在使用前最好以WHO规定的氰化高铁血红蛋白参考液校正后再使用。

参考液最好选用ICSH9国际血液学标准化委员会）确定的由RIV（莅国立公共卫生研究院）制定的氰化高铁血红蛋白参考液或上海医学化验所制血的氰化高铁血红蛋白标准液。

氰化高铁血红蛋白测定法试剂氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生化实验方法，用于分析和测定血液中的血红蛋白含量。

本文将全面介绍该测定法的原理、操作步骤及实验结果的解读，以及实验中需要注意的事项。

氰化高铁血红蛋白测定法的原理是利用氰化高铁与血红蛋白形成氰合血红蛋白，通过测定其最大吸收波长处的吸光度来确定血红蛋白的浓度。

这个测定法在实验室应用广泛，特别适用于快速分析大量样本。

操作步骤如下：1. 准备试剂：将氰化高铁溶液定容至10ml，并使用洗瓶洗净可塑性吸光管。

2. 取1ml待测血清，加入两滴牛磺酸溶液，充分混合。

3. 加入2ml的氰化高铁溶液，尽量避免溶液溢出或产生气泡。

4. 轻轻倾斜吸光管，充分混合后，放置在室温下孵育5分钟。

5. 将孵育后的吸光管置于1cm光程比色皿中，切不可触摸吸光池。

6. 使用5% NaOH溶液分别置于两个比色皿中，作为空白对照。

7. 使用比色计在最大吸收波长（540nm）测定各组的吸光度值。

8. 计算血红蛋白浓度。

根据标定曲线和吸光度值的关系，描绘标定曲线并用所测吸光度值参照标定曲线，查得相应血红蛋白浓度。

实验结果的解读需要注意以下几个方面：1. 血红蛋白浓度的计算：在标定曲线上查找所测吸光度值对应的血红蛋白浓度，可得到最终结果。

2. 结果的参考范围：血红蛋白浓度的正常范围在男性为130～175g/L，女性为115～155g/L。

3. 实验误差的排除：实验过程中，应严格控制各实验条件的一致性，避免外界因素对实验结果的影响。

同时，在同一天内重复检测样本可以提高实验结果的可靠性。

需要注意的事项：1. 操作安全：氰化高铁溶液有毒，操作时应佩戴手套和护目镜，并避免接触皮肤和吸入气体。

2. 实验条件：实验室应具备较好的通风条件，同时实验过程中，避免光线、震动和干扰。

3. 校准和质控：每天开始实验前进行仪器校准，并使用已知浓度的标准品进行质控，以确保实验结果的准确性和可靠性。

综上所述，氰化高铁血红蛋白测定法是一种简便、快速、准确的血红蛋白测定方法。