花青素的分离提纯测定实验具体方案

桑葚中花青素的提取与检测桑椹所含花青素色价高、抗氧化能力强，是一种理想的营养强化剂和着色剂[1]。

桑椹最大加工品为桑椹汁。

为了去除生长过程和收获环节原料沾带的杂质及微生物，桑椹汁加工前需对原料进行有效清洗。

花青素易极溶于水，更易溶于乙醇等亲水有机溶剂，因此，桑椹清洗水呈浓重的紫黑色，表明桑椹果实中的一部分花青素已溶于清洗水。

在以往的研究中发现，盐酸、柠檬酸等溶液对花青素具有一定的保护作用[2]。

由于桑椹汁加工中原料需经历灭酶、浓缩、杀菌等诸多强热处理以及冗长的加工过程，产品中的花青素损失、劣化严重。

如能在热处理以前的清洗过程提取分离出部分花青素，既避免了有效成分的破坏，又可获得高品质的副产品，使桑椹资源合理、充分地利用。

为此，依据桑椹汁加工流程，设想在不影响主产品产量和品质的前提下，通过选择对桑椹花青素溶出效率高的浸提介质和对原料整体性破坏较小清洗方法，在桑椹汁加工前分离出部分高品质花青素。

1 实验材料、流程及检测方法1.1 实验材料桑椹为北京大兴区产，品种为黑珍珠。

采集完熟果实并剔除烂果及杂质，低温贮藏。

1.2 实验试剂和主要仪器无水乙醇、盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸钠购于北京化学试剂公司；AB-8 大孔树脂购于南开大学化工厂；ZFQ85A 旋转蒸发器，上海医械专机厂；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司；JA1003N 电子天平，上海精密科学仪器有限公司；GZX-9023MBE 数显鼓风干燥箱，上海博讯实业有限公司医疗设备厂；PHS-25 型酸度计，上海精密科学仪器有限公司紫外—可见分光光度计，北京普析仪器有限公司。

高效液相色谱，安捷伦科技有限公司1.3 实验流程依据主要产品为桑椹浓缩汁的加工流程，在清洗水中提取桑椹花青素的试验工艺流程确定为：桑椹果实——强化清洗——洗水精滤——上柱吸附——解吸——浓缩脱溶——干燥——花青素粗提物为了保持桑椹鲜果的完整性，避免因破损造成的糖和酸的溶出损失，增加花青素浸提量，提高浸提液中花青素含量，降低果胶等胶体物质进入，清洗过程将采用对原料损伤较轻的模拟移动床逆流淋浸原理，以阶段浸泡、逆流阶段浸泡、逆流淋洗为浸提单元组合浸提流程。

花青素含量的测定花青素是一种常见的植物色素，广泛存在于植物中，特别是在花朵和水果中。

花青素不仅赋予植物丰富多彩的颜色，还具有多种生理活性和保健功能。

因此，准确测定花青素含量对于研究植物生长发育以及开发植物资源具有重要意义。

测定花青素含量的常用方法有分光光度法、高效液相色谱法、电化学法等。

其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，被广泛应用于花青素含量的测定。

分光光度法是基于花青素本身在紫外-可见光区域具有特定的吸收光谱特性。

通常情况下，花青素在紫外区域（200-400nm）和可见光区域（400-700nm）都有吸收峰，峰值波长和吸光度的大小与花青素的结构和浓度有关。

因此，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以间接推算出花青素的含量。

具体的测定步骤如下：1. 样品的制备：将待测样品（如花朵、水果等）剪碎或研磨成细粉，加入适量的提取液（如乙醇、甲醇等），充分摇匀，静置一段时间，使花青素充分溶解在提取液中。

2. 提取：将提取液和样品混合物进行离心或过滤，得到澄清的提取液。

3. 分光光度法测定：取适量的提取液，利用紫外-可见光分光光度计，在特定波长下（通常为紫外区域的吸光峰）测定样品的吸光度。

根据吸光度和标准曲线的关系，可以计算出样品中花青素的含量。

需要注意的是，为了保证测定结果的准确性和可靠性，实验中应该设置空白对照组和标准曲线。

空白对照组是不含花青素的提取液，用于消除其他物质的干扰。

而标准曲线则是利用已知浓度的花青素标准品，根据吸光度和浓度的线性关系建立的，用于计算样品中花青素的含量。

为了提高测定的精确度，还可以对样品进行预处理，如去除杂质、调整pH值等。

同时，在测定过程中要注意操作规范，控制好实验条件，避免误差的产生。

测定花青素含量是研究植物色素和植物生理活性的重要手段。

分光光度法是一种常用而有效的测定方法，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以准确推算出花青素的含量。

通过合理的实验设计和操作，可以获得准确可靠的测定结果，为植物资源的开发和利用提供科学依据。

一、实验目的1. 探究紫甘蓝中花青素的提取方法。

2. 了解花青素的性质及其应用。

3. 学习实验室提取、分离、鉴定等基本操作。

二、实验原理紫甘蓝中含有丰富的花青素，花青素是一种天然色素，具有较强的抗氧化性、抗变异、抗肿瘤、抗过敏等生理功能。

本实验采用溶剂提取法，利用有机溶剂（如乙醇、甲醇等）提取紫甘蓝中的花青素，然后通过纸层析法分离纯化花青素，最后利用紫外-可见分光光度法测定花青素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：紫甘蓝、乙醇、甲醇、蒸馏水、NaCl、NaOH、盐酸、pH试纸、滤纸、层析板、紫外-可见分光光度计、电子天平、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、移液管等。

2. 实验试剂：无水乙醇、甲醇、NaCl、NaOH、盐酸、醋酸、硫酸铵、氯化钠等。

四、实验步骤1. 提取（1）将紫甘蓝洗净，晾干，切成小块。

（2）将紫甘蓝放入研钵中，加入适量无水乙醇，研磨充分。

（3）将研磨好的混合物倒入烧杯中，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。

（4）将烧杯放入水浴锅中，加热至沸腾，保持沸腾状态10分钟。

（5）取出烧杯，冷却至室温，用滤纸过滤，收集滤液。

2. 分离纯化（1）将滤液倒入漏斗中，用蒸馏水洗涤滤渣，收集洗涤液。

（2）将滤液与洗涤液合并，加入适量醋酸，调节pH至2.5。

（3）静置30分钟，使花青素沉淀。

（4）取上层清液，用滤纸过滤，收集滤液。

（5）将滤液倒入烧杯中，加入适量硫酸铵，搅拌，使蛋白质沉淀。

（6）静置30分钟，取上层清液，用滤纸过滤，收集滤液。

3. 测定花青素含量（1）取适量滤液，用紫外-可见分光光度计测定其在520nm处的吸光度。

（2）根据标准曲线计算花青素含量。

五、实验结果与分析1. 提取结果：紫甘蓝提取液呈紫色，说明花青素已被成功提取。

2. 分离纯化结果：滤液经过分离纯化后，颜色较浅，说明花青素得到了一定的纯化。

3. 花青素含量测定结果：根据标准曲线计算，紫甘蓝提取液中花青素含量为0.5mg/g。

六、实验结论1. 紫甘蓝中花青素可以通过溶剂提取法提取。

食品中花青素的含量测定与分析食品中的花青素，作为一类天然色素，不仅能为食品增添色彩，提升观赏性，还具有多种对人体健康有益的功效。

而如何准确测定食品中花青素的含量，对于产品质量控制和营养价值评估具有重要意义。

一、花青素的简介花青素是一类存在于植物中的天然色素，在生命界中分布广泛，具有深浅不一的紫红色。

它们是由芳香稠环结构苯丙基酮环和醌环的结构单元通过茄乙酸途径合成的。

花青素具有很强的抗氧化作用，对预防心血管疾病、癌症以及抗衰老等方面具有积极作用。

二、花青素含量测定方法介绍测定食品中的花青素含量可以利用多种分析方法，常用的包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外光谱法、比色法等。

这些方法各有优缺点，需要根据实际需要和样品特性选择适合的方法。

1. 高效液相色谱法（HPLC）HPLC是目前应用较广的分析方法之一，其原理是利用色谱柱对样品进行分离和纯化，并通过检测器检测某一波长下的吸光度或荧光强度。

这种方法具有分离效果好、灵敏度高、准确性高等特点，但需要较专业的设备和技术来操作。

2. 紫外光谱法紫外光谱法是利用不同波长下的吸收光谱来测定花青素含量的方法。

通过对设置不同波长下的吸光度进行测定，可以得到样品中花青素的含量。

这种方法简单易行，但对于含量较低的样品灵敏度较低，且无法区分不同种类的花青素。

3. 比色法比色法是利用花青素与一定试剂发生反应后形成有色产物，通过测定其吸光度来测定花青素的含量。

这种方法操作简便，成本较低，适用范围广，但受样品干扰较大，精确度相对较低。

三、花青素含量测定实验步骤为了更好地测定食品样品中花青素的含量，下面简要介绍一下实验步骤。

1. 样品制备：将待测样品进行制备和处理，如搅拌、研磨、加热等操作，以获得均匀的样品溶液或提取物。

2. 适当稀释：根据样品的浓度和分析方法的需求，适当稀释样品，并留取适量的样品溶液。

3. 实验操作：根据选择的分析方法，进行相应的实验操作，如HPLC的进样、流动相选择和梯度 elution，紫外光谱法和比色法的试剂添加和颜色反应等。

蓝莓果皮中花青素的提取及分离纯化研究摘要：研究蓝莓果皮中花青素的提取、纯化方法，通过控制浸渍法体积分数、pH值等关键实验参数，以花青素提取率为考察指标观察浸膏得率的变化，确定1：30的浴比中加入1%柠檬酸与70%乙醇组成溶液，以温度30℃、pH为3超声浸渍20min为蓝莓果皮中花青素最佳提取方法。

通过65%乙醇的大孔树脂洗脱液洗脱，色价达到61.37，产率为81.32%，大大的提高的花青素的纯度。

关键词：蓝莓果皮花青素提取纯化蓝莓（Vaccinium spp.）是杜鹃花科越桔属植物，果实呈蓝色近圆形。

其中果肉和果皮都含有丰富的花色素。

花色素又名花青素，属于酚类化合物中的类黄酮类。

其结构的基本母核是2-苯基苯并吡喃。

通常与一个或多个葡萄糖、鼠李糖、半乳糖等通过糖苷键形成花色苷，目前已知的花色苷有250多种。

已知花青素的功效有：一是抗氧化和清除自由基的功能，减轻疲劳，抗衰老，同时有美容美颜的作用。

二作为天然的食物添加剂，可作为食品的防腐剂，三是作为天然染料，不同pH值下可不同呈色。

一、仪器与材料1.原料：蓝莓果皮粉末（从安徽安庆市购入，买入四批产地分别位于山东省、辽宁省、内蒙古省、吉林省）。

2.试剂：乙醇、甲醇、甲酸、氢氧化钠、盐酸、乙腈、矢车菊3-O-葡萄糖苷标准品、柠檬酸、纤维素酶。

3.仪器：台式烘箱、SHZ-IIII型循环水式真空泵（上海贤德实验仪器有限公司）、EYELA N-1100旋转蒸发仪、OSB-2100水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）、电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、水浴锅（南京科尔仪器设备有限公司）、SB-3200D超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)，Agilent 1100 高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计（Thermo）、层析柱、AB-8大孔树脂、各个型号圆底烧瓶等玻璃仪器。

二、蓝莓果皮中花色素的提取1.提取方法：花色素分子含有酸性与碱性基团，溶于水和乙醇等醇类化合物。

让花青素提取纯化更合理、更高效、更可靠花青素(anthocyan)，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，其颜色随pH 值的变化而变化，pH =7时呈红色，pH在7 ～8之间时呈紫色，pH > 11 时呈蓝色。

花青素因其在清除自由基抗氧化、延缓衰老、保护视力、抗过敏、预防心血管疾病等方面的保健功能而被大众所熟悉与关注，被越来越多的应用于保健食品、化妆品等行业。

花青素提取是植物提取行业中一个非常重要的品种领域，提取纯化方法也较多，但受保健食品与化妆品行业对原料溶剂残留的严格限制要求，目前行业使用较为普遍的是水提+大孔吸附树脂吸附的工艺，即将植物原料在常压或高压下用水浸提，经必要的过滤预处理后，提取清液采用非极性大孔吸附树脂吸附富集，再用乙醇解析。

花青素提取植物原料来源主要包括浆果类（越橘、蓝莓、黑加仑、黑枸杞、桑葚、黑果花楸等）、蔬菜类（紫薯、紫甘蓝、黑萝卜等）、杂粮类（黑米、黑豆）、花卉类（玫瑰茄）。

不同植物原料来源的花青素类物质因其分子结构、提取料液组分等的不同，为了达到更好的分离纯化效果，需要选择不同类型的吸附树脂进行富集纯化，蓝晓科技在多年的花青素树脂分离纯化研究与工业实践过程中，开发出了适用不同原料进行花青素提取的树脂产品与应用工艺，可满足不同原料提取的花青素纯化。

例如：浆果、花卉类植物来源花青素，可使用蓝晓Seplite® XDA-6大孔吸附树脂，该树脂具有吸附量大，花青素选择性高，吸附、洗脱效率高等特点；蔬菜类植物来源花青素，可使用蓝晓Seplite® LX-68M、Seplite® LX-32大孔吸附树脂，该类树脂吸附容量大，成品含量与溶解度大幅提高，便于后端应用开发。

蓝晓科技作为国内最具实力的树脂研发生产企业与分离纯化整体解决方案提供商，植物提取行业深耕近20年，积累了宝贵的技术经验，并拥有了品系完善的树脂库，同时，蓝晓科技结合自身系统装备集成优势能力，整合国内优势植提工艺技术资源，可为用户定制化设计建设花青素提取纯化完整工艺生产线，最大程度的保证客户工艺与系统装备的科学合理性、先进性、经济性。

花青素的测定流通环境中花青素的测定主要利用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的方法。

超高效液相色谱质谱法在花青素测定中被广泛使用，可用于定量和定性地测定水系统中的多种花青素。

UPLC-MS/MS方法因其快速，准确，精确和可靠性而受到欢迎。

它是建立一个准确的定量方法的有效和迅速的手段，在芳香族衍生物的抗氧化活性测定中也得到了应用。

它的优点是可以通过改变条件来进行定性和定量。

UPLC性能优良，分离效率高，检测敏感度高，效率稳定，耐受极高浓度溶液，操作简便，维护方便，拥有快速分辨，节省时间及节约成本的优点，使其成为流通中农药质量安全监测方法的首选。

UPLC-MS/MS 和其他色谱-质谱联用技术提供了快速，准确和灵敏的花青素测定，适用于工程环境中水质的复杂性。

此外，还可以通过改变实验条件和操作方法进行花青素的定性分析，用了紫外/可见光谱法和其他检测方法，如HPLC，LC/MS，LC/MS/MS，GC/MS，等，进行花青素的快速检测，对花青素的含量进行快速，精确，可靠的检测。

外源污染站，即在现有环境中来自其他源的污染物都可以检测出花青素。

一般情况下，需要根据污染物的种类，结合采样方法，把污染物检测出来，并根据样品特性和分析要求选择恰当的分析理论方法进行花青素的分析。

在水体的环境中，如污水处理厂、城市排水系统、给水系统、农田排水等，花青素原料和其他有害物质在水体环境中存在着，可以用UPLC-MS/MS或其他高级色谱技术对其浓度和物性进行检测。

总之，UPLC-MS/MS分析是目前流通环境中花青素的良好检测方法，具有准确，灵敏和可重复性的优势，是一种快速，准确，廉价，耗时少，材料消耗低的分析方法，能够有效应用于抗氧化剂有关的研究。

花青素检测内容和方法花青素是一类具有强烈吸收红外光的化合物，广泛存在于植物中。

它们赋予了许多植物花朵、水果和蔬菜明亮的颜色。

花青素不仅可以提供视觉上的吸引力，还具有抗氧化和抗炎症等生物活性。

因此，检测花青素的含量和质量对食品、药物和其他相关领域的研究非常重要。

花青素含量的检测方法有许多种，下面将介绍一些常用的方法：1. 分光光度法：分光光度法是一种常见且简便的检测花青素含量的方法。

它基于花青素对特定波长的光有很强的吸收能力。

通过将样品溶解在适合的溶剂中，使用紫外-可见光谱仪测量吸光度，然后根据不同波长下的吸光度值来计算花青素的含量。

这种方法可以测量花青素的总含量。

2. 高效液相色谱法：高效液相色谱法（HPLC）是一种准确测定花青素含量的常用方法。

它基于为花青素分离和检测提供了高分辨能力的高效液相色谱仪。

首先，样品中的花青素会被分离出来，然后通过波长选择性检测器进行定量分析。

这种方法可以同时测量多种不同类型的花青素，并且具有高灵敏度和高选择性。

3. 液相色谱质谱联用法：液相色谱质谱联用法（LC-MS）是一种更为精确的花青素检测方法。

它将高效液相色谱与质谱技术结合起来，可以通过质谱仪的高分辨率和灵敏度来确定花青素的结构和含量。

这种方法对于复杂的样品和低浓度的花青素分析非常有用。

4. 薄层色谱法：薄层色谱法是一种简单快速的花青素分析方法。

它基于花青素在薄层色谱板上迁移的性质，并通过与特定试剂反应形成具有色素的斑点来检测花青素。

该方法不需要复杂的仪器设备，适用于初步评估样品的花青素含量。

5. 酶联免疫吸附测定法：酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于抗体-抗原反应的花青素检测方法。

通过使用特异性的抗体来检测花青素，可以实现高灵敏度和高选择性的分析。

这种方法对于复杂样品和低浓度花青素的检测非常有效。

总之，准确测定花青素含量对于食品、药物和化妆品等行业至关重要。

上述介绍的不同方法可以根据实际需要选择合适的进行花青素的检测。

天津科技大学生物化学实验报告专业：班级：姓名学号组别第组实验项目同组人完成时间年月日【实验名称】《大孔吸附树脂法分离纯化果蔬花青素》【实验目的】学习并掌握大孔吸附树脂分离纯化水溶性色素的原理和操作方法。

【实验原理】大孔吸附树脂是一种以苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯、丙睛等为原料加入一定量致孔剂聚合而成的大分子物质，通常分为非极性、弱极性和中极性，在溶剂中可溶胀，室温下对稀酸、稀碱稳定。

大孔吸附树脂是和原理相结合的分离材料，其吸附性是由于范德华引力或的结果。

花青素(Anthocyanidin)，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的天然色素，属类化合物。

也是植物器官的主要呈色物质，在植物细胞液泡不同的条件下，使花瓣呈现五彩缤纷的颜色。

实验证明，花青素具有等功能。

花青素由于结构的特点，容易被大孔树脂吸附；而多糖、蛋白质、核酸等生物大分子不被吸附；小分子量的糖、氨基酸等虽然有一定吸附，但容易从树脂上解吸。

根据以上原理，可以利用大孔树脂对花青素进行提取。

本实验用紫甘蓝提取液，通过大孔树脂吸附后，用洗涤除极性小分子杂质，用洗脱可以得到纯化的提取液，经减压浓缩干燥后可以得到花青素成品。

成绩：教师签字：批阅日期：【材料与设备】1、仪器设备小型离子交换柱、料理棒、纱布、烧杯、试管等2、材料试剂：紫甘蓝、大孔吸附树脂（AB-8）、无水乙醇、柠檬酸、蒸馏水【实验方法】1、工艺流程2、操作要点1）花青素提取将紫甘蓝100g捣碎，加提取剂（）300mL，50℃浸泡提取30min，间断搅拌，纱布过滤，取滤液即色素提取液。

2）AB-8大孔吸附树脂吸附将预处理好的大孔吸附树脂湿法装柱，柱床体积约mL，整个实验过程保持。

用洗至无乙醇。

将色素提取液上柱吸附，吸附流速为（BV/h），观察流出液颜色，至流出液有肉眼可见颜色时，停止吸附，弃去流出液。

3）水洗用水洗剂（）150mL洗去未被吸附的杂质，流速为BV/h，弃去水洗液。

4）洗脱用洗脱剂（）解吸吸附的色素，流速为BV/h，待红色流出时开始收集，依次收集到试管中，确保每支试管的液体体积相同（约2mL），至颜色很淡时停止收集。

一、实验目的1.了解原花色素及其分离提纯的常用方法。

2.学会用乙醇抽提法提取分离花色素和比色法测定其含量。

二、实验目的原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。

也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。

原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。

依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。

从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。

其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。

三．实验仪器1.试剂：花色素标准样品；甲醇；0.1%HCL-95%乙醇（V:V=70:30）；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；HCL-正丁醇（浓HCL5.0ml加入正丁醇95.0ml，混合即可）；2%硫酸铁氨（硫酸铁氨2.0g溶于2.0mol/L HCL 100.0ml即可）2.器材：冷冻干燥机；旋转蒸发仪；分光光度计；水浴锅；电炉；电子分析天平3.材料：新鲜勒杜鹃花四、实验操作(一)勒杜鹃原花色素的提取1.材料处理：称取新鲜勒杜鹃10.0g，剪碎，置于锥形瓶中，加入3倍体积的石油醚，室温浸泡，脱去脂质物质和叶绿素，过滤，将勒杜鹃样品晾干，备用。

a)花色素的提取：提取剂0.1%HCL-95%乙醇（V：V=70:30）料液比（m：V=1:150），提取时间30分钟，控制提取温度60℃，提取次数2次，即提取液分2次加入。

2.花色素的纯化：由于样品中还是会含有其他杂质，如：蛋白质，维生素（水溶性维生素易溶于水而不易溶于非极性有机溶剂；脂溶性维生素易溶于非极性有机溶剂，而不易溶于水。