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第42卷第1期2021年1月Vol42No1Jan'2021质谱学报JournalofChinese MassSpectrometrySociety高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿奶粉中核苷酸陈晶燕，陈万勤，王峰，陈碧莲，周霞，刘柱，梁晶晶（浙江省食品药品检验研究院，浙江杭州310052）摘要：建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定婴幼儿奶粉中胞嘧啶核苷酸（CMP）、腺嘌吟核苷酸（AMP）、鸟嘌吟核苷酸（GMP）、尿嘧啶核苷核（UMP）、次黄嘌吟核苷酸（IMP）等5种核苷酸含量。
使用碱性磷酸酶去磷酸化作用，把样品中的核苷酸水解成相应核苷，经选择性硼酸固相萃取净化，ACQUITY UPLC HSS T3（2.1mmX100mmXi.8"m）色谱柱分离，以5mmol/L甲酸铵溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱。
采用电喷雾正离子源，内标法定量，以多反应监测（MRM）模式进行质谱分析°结果表明，奶粉中5种核苷在各自线性范围内的线性关系良好，相关系数均大于0.998,回收率为74.2%〜110.7%，相对标准偏差在0.8%〜5.3%之间（n=6）,CMP、AMP、GMP、UMP、IMP的定量限分别为0.7、0.1、0.7、3.3、0.6mg/100g°该方法灵敏度高、重现性好、定量准确，可用于测定婴幼儿奶粉中核苷酸含量°关键词：高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）；奶粉;核苷酸；核苷；多反应监测（MRM）中图分类号:O657.63文献标志码:A文章编号：10042997（2021）01009308doi：10.7538/zpxb.2019.0156开放科学（资源服务）标识码（OSID）:Determination of Nucleotides in Infant Milk Powder by HighPerformance Liquid Chromatography-Tandem Mass SpectrometryCHENJing-yan,CHEN Wan-qin,WANG Feng,CHEN Bi-lian,ZHOU Xia,LIU Zhu,LIANGJing-jing(.Zhejiang Institute for Food and Drug Control,Hangzhou310052,China)Abstract:Nucleotides are biologically important small molecules composed of a nitroge-nousbase,afive-carbon sugar(ribose or deoxyribose)and at least one phosphate group.Theyplayimportantroleinimprovinggastrointestinaltractrepairafterdamage, maintainingtheimmunesystem andregulatinglipoprotein metabolism.Nowadaysthe roleofdietarynucleotideshasbeenpaidincreaseda t entionininfantnutrition.Dietary nucleotidesarecrucialtomaintainingnormalgrowthanddevelopmentininfants.There-forethecontentsofnucleotidesininfantmilkpowderbecomeimportant.A methodfor收稿日期：2019-11-15;修回日期：2020-03-10基金项目：浙江省市场监管局项目（018007）浙江省食品药品监督管理局科技计划项目（019002）资助作者简介：陈晶燕（1993—）,女（汉族），浙江杭州人，助理研究员，从事分析化学研究。
食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定1 范围本标准规定了液相色谱法测定游离核苷酸总量的方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中游离核苷酸总量的测定。
（包括：胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸、次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、腺嘌呤核苷酸]2 原理试样经过水提取，用沉淀剂沉淀蛋白质后，通过高效液相色谱分离，用紫外检测器外标法测定试样中核苷酸的含量。
3 试剂与材料注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水，液相色谱流动相用水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 淀粉酶：酶活力≥1.5 U/mg。
3.1.2 冰醋酸。
3.1.3 四丁基硫酸氢铵。
3.1.4 甲醇。
3.1.5 磷酸氢二钾（K2HPO4）。
3.1.6 磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.7 磷酸。
3.2 试剂配制3.2.1 醋酸溶液（100 mL/L）：吸取10 mL冰醋酸，加水定容到100 mL。
3.2.2 磷酸氢二钾溶液（0.1 mol/L）：称取2.28 g磷酸氢二钾，用超纯水溶解并定容到100 mL。
3.2.3 磷酸盐缓冲液（1.40 mmol/L 四丁基硫酸氢铵，0.01 mol/L磷酸二氢钾）：称取1.360 g磷酸二氢钾，加0.4753 g 四丁基硫酸氢铵，加900mL水溶解，用磷酸氢二钾溶液调pH至3.2，用水定容到1000 mL。
（一周内使用。
）3.3 核苷酸标准品胞嘧啶核苷酸（简称CMP）（C9H14N3O8P）：纯度≥99%。
腺嘌呤核苷酸（简称AMP）（C10H14N5O7P）：纯度≥99%。
尿嘧啶核苷酸（简称UMP）（C9H13N2O9P）：纯度≥99%。
鸟嘌呤核苷酸（简称GMP）（C10H14N5O8P）：纯度≥99%。
次黄嘌呤核苷酸（简称IMP）（C10H13N4O8P）：纯度≥99%。
3.4 标准溶液配制1GB ××××—20042 核苷酸标准混合液（必须当天配置）：分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP、GMP和IMP各10mg（准确至0.1mg），于同一个100mL容量瓶中，用超纯水溶解定容至100mL。
HPLC法测定豆浆中的嘌呤含量毛玉涛;张洪;王明力【摘要】利用HPLC法对豆浆中的嘌呤物质进行检测分析,建立腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤4种嘌呤物质的多组分检测条件并进行方法评价.研究表明:利用Zorbax C18反相色谱柱(4.6 mm×250 mm,5.0 μm),流动相以KH2 PO4缓冲液(0.02 mol/L,pH 3.0),在流速1.0 mL/min,柱温25℃,进样量10 pL,检测波长(λ1)为254 nm的条件下,豆浆中的4种嘌呤达到最好分离,其精密度和回收率小于2％.%A feasible method using HPLC which was evaluated for analyzing Adenine,Guanine,Xanthine,Hypoxanthine from soybean milk was established in this paper.The chromatographic conditions were optimized as follows:Zorbax C18 column (4.6 mm ×250 mm,i.d.5.0 μm),254 nm by UV detector with 0.02 mol/L of KH2PO4 buffer solution (pH =3.0) as mobile phase,the flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was 25 ℃,and the sample size was 10 μL.The result showed that several purines can be separated effectively in these conditions with the precision and recovery under 2％.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2015(041)002【总页数】5页(P207-211)【关键词】豆浆;嘌呤;HPLC【作者】毛玉涛;张洪;王明力【作者单位】贵阳市粮油质量检测中心,贵州贵阳,550002;贵州省分析测试研究院,贵州贵阳,550002;贵州大学酿酒与食品工程学院,贵州贵阳,550025【正文语种】中文由RNA、DNA在生命科学研究中的重要地位，可预见到核苷、核碱、核酸及嘌呤物质的分析研究，是生命科学的一个重要领域，解决嘌呤物质的分析问题，在物质检测发展中一直处于核心地位［1］。
预制菜人参炖老鸡1 范围本文件规定了预制菜人参炖老鸡的术语和定义、原辅料、技术要求、生产加工过程、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存、食用方法、销售与追溯召回。
本文件适用于以鸡肉、人参、红枣等为主要原料，经加水炖煮等加工后装袋制成的人参炖老鸡。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 191 包装储运图示标志GB 2707 食品安全国家标准鲜（冻）畜、禽产品GB 2760 食品安全国家标准食品添加剂使用标准GB 2761 食品安全国家标准食品中真菌毒素限量GB 2762 食品安全国家标准食品中污染物限量GB 4789.26 食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验GB 5009.5 食品安全国家标准食品中蛋白质的测定GB 5009.6 食品安全国家标准食品中脂肪的测定GB 5009.91 食品安全国家标准食品中钾、钠的测定GB 5009.124 食品安全国家标准食品中氨基酸的测定GB 5749 生活饮用水卫生标准GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法GB 7718 食品安全国家标准预包装食品标签通则GB 10133 食品安全国家标准水产调味品GB/T 10786—2022 罐头食品的检验方法GB 14881 食品安全国家标准食品生产通用卫生规范GB/T 19506 地理标志产品吉林长白山人参GB 28050 食品安全国家标准预包装食品营养标签通则GB31621 食品安全国家标准食品经营过程卫生规范GB 31644 食品安全国家标准复合调味料JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则定量包装商品计量监督管理办法国家市场监督管理总局令（第70号）食品标识管理规定国家质量监督检验检疫总局令（2009）第123号3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
高效液相色谱在中药检测的应用研究摘要：高效液相色谱法（HPLC）是色谱法的一个分支，在医药、化学、工业、农业、商检等领域应用广泛。
文章从HPLC的检测原理和技术特点出发，介绍了HPLC在中药检测中的应用现状，并结合实例进行分析。
关键词：中药；HPLC；技术特点；成分检测；质量分析中药是我国的传统医药，以往检测中药的真假和质量，主要采用观察、触摸、闻尝、水试、火试等方法[1]。
近年来随着中医研究深入，中药在临床上的应用更加广泛，传统的检测方法不满足准确性要求，必须采用先进的检测技术。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）在成分测定、质量分析等方面，均具有较高的应用价值，是一种可行的检测技术方案。
1．HPLC的检测原理和技术特点1.1 检测原理HPLC的检测原理，是以液体为流动相，采用高压输液系统，将不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂/缓冲液等流动相，泵入装有固定相的色谱柱，各种成分在柱内被分离后，进入检测器进行检测，就能得到各种成分的含量，以便开展深入分析。
HPLC最早出现于1903年，经过百年的发展和演变，分析精度和自动化水平不断提升。
1.2 技术特点HPLC的技术特点，可以总结为“四高、一广、环保”。
①“四高”指的是高压（对载液加高压，减小流经色谱柱时受到的阻力）、高速（载液流速和分析速度快，一个样本的分析时间通常在15-30min）、高效（固定相和流动相能达到最佳分离效果）、高灵敏度（检测精度可达到0.01mg）。
②“一广”指的是应用范围广，70%以上的有机化合物，均可采用HPLC分析，尤其是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物，分析时更有优势[2]。
③“环保”指的是色谱柱可以反复使用，一根柱子能分离不同化合物；而且检测过程中样品量少、容易回收。
2．HPLC在中药检测中的应用现状2.1 中药材成分测定《中国药典》中收录的中药材和饮片有500多种，300多种采用现代技术测定含量，约70%采用的是HPLC法，典型代表如人参、白芍、大黄、天麻、丹参、甘草、五味子、牛蒡子等，检测既快速又准确。
高效液相色谱法测定地龙配方颗粒中次黄嘌呤的含量【摘要】目的测定地龙配方颗粒中次黄嘌呤的含量。
方法采用反相高效液相色谱法。
色谱柱：Inertsil ODS-EP柱，流动相：水-甲醇-四氢呋喃（100∶0.5∶0.5），流速：1. 0 ml・min-1，检测波长：254 nm。
结果次黄嘌呤在0.040 6～0.406 0 μg间与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.999 9；平均加样回收率为97.6%，RSD为0.63%（n=9）。
结论该法操作简便、准确，可用作为该制剂的含量测定方法。
【关键词】地龙配方颗粒次黄嘌呤反相高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo determine the content of Hypoxanthine in Pheretima Compounding Granules.MethodsAn RP-HPLC was established.The chromatographic column was Inertsil ODS-EP.The mobile phase was H2O-CH3OH-C4H8O(100∶0.5∶0.5).The flow rate was 1.0 ml・min-1 ，and the detection wavelength was 254 nm. ResultsHgpoxanthine showed good linear relationship in the range of 0.040 6～0.406 0μg. The average recovery for Hypoxanthine was 97.6% and RSD was 0.63%(n=9).ConclusionThis method is simple， accurate and can be used for content determination of Pheretima Compounding Graunles.Key words：Pheretima Compounding Granules; Hypoxanthine; RP-HPLC地龙为巨蚓科动物参环毛蚓或正蚓科动物背暗唇蚓等的全虫体。
TPMT概述TPMT是存在于哺乳动物和禽类细胞中的⼀种⾮⾦属依赖性酶，能利⽤S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)作为甲基的供体和底物结合，特异地催化杂环类和芳⾹类化合物苯环6-位硫原⼦的甲基化。
该酶在嘌呤类药物的抗⽩⾎病作⽤中起关键作⽤，其DNA编码序列上的核苷酸突变是造成此类药物不同强度的细胞毒作⽤的基础。
TPMT⼴泛分布于⼈体的各⼤组织和器官，如肝脏、肾脏、胃肠道、肺、脑、⾎液，以及胎盘等。
成年⼈肝细胞的TPMT浓度和⾎液组织中的TPMT浓度⼏乎呈直线相关。
TPMT的浓度及活性在⼈体各组织内、甚⾄肿瘤组织中均存在密切相关性，测定红细胞中的TPMT浓度即可⼤致估计其他组织的酶活性。
TPMT是嘌呤类药物代谢过程中决定巯基鸟嘌呤核⽢酸(TGNs)浓度的关键酶。
6-巯基嘌呤(mercaptopurine，6-MP)，⼀种嘌呤类抗癌药物，在体内可以转化成TGNs，后者在DNA合成中整合到肿瘤细胞DNA和RNA分⼦中，影响DNA的复制及RNA的表达⽽发挥抗肿瘤作⽤，但过多的TGNs将导致严重的毒副作⽤。
临床上给予标准剂量的嘌呤类药物治疗时，部分患者发⽣严重的造⾎毒性反应，这种对药物的不耐受现象提⽰可能存在TPMT活性缺陷。
对此类患者的研究表明，其中绝⼤多数患者存在遗传性TPMT活性降低或缺失，因⽽导致对药物毒性的敏感性增加，造成⾻髓抑制和肝细胞损害等。
如果⽤药之前对患者的TPMT酶活性进⾏测定，可以预测并避免或减少毒性反应的发⽣，⽽通过TPMT基因分型检测是预测TPMT酶活性的有效措施。
相关药物介绍嘌呤类抗癌药物如6-巯基嘌呤(6-MP)、6-巯鸟嘌呤(6-TG)及免疫抑制药物硫唑嘌呤(AZA)均为⽆活性的药物前体，在体内需经过⼀系列的代谢过程⽣成巯基鸟嘌呤磷酸盐(TGNs)⽅能发挥其细胞毒性作⽤。
临床上常作为急性⽩⾎病化疗、器官移植及⾃⾝免疫性疾病治疗的免疫抑制剂，如6-MP⽤于⼉童急性⽩⾎病的维持治疗，AZA⽤于治疗类风湿性关节炎和克罗恩(Crohn)病等。
