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重组灵芝免疫调节蛋白抑制HL60细胞增殖及诱导凋亡的研究

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Ｒ ９ ． ３２ １
张 淑芹
刘志 屹Ａ 孙 Nhomakorabea非
（ 吉林 大 学再 生医学科 学研 究所 ， 长春 １０２） ３０１
１０ － ４ ２１ ）６ ５００ ００４ Ｘ（０００ － ２－３ ８ ０
中国图书分类号
文献标识码
文章编号
［ 摘
要 ］ 目的 ： 探讨重组灵 芝免疫调 节蛋 白（Ｉ ８对 Ｉ． ｒ ） －６ Ｉ ０细胞抑 制作 用及诱导 凋亡的研究 。方 法 ： １ 采用 ＭＩ ＇ Ｔ法检测
Ｉ ｈｂｉ ｎ ｎ ａ ｏ ｔ ｓｓ－ ｄ ｃｎ ｆｅ ｔ ｆｒ ｃ ｍ ｂ ｎ ｎｔ Ｇａ ｏ ｅｍａ ｃｄｕ ｎ ｉ ｔ ｇ ａ ｄ ｐ ｐ ｏ ｉ・ｎ ｕ ｉ ｇ ｅ ｃｓ ｏ ｅ ｏ ｉ ａ ｎ ｄ ｒ ｉ ｉ Ｌｕ ｉ ｍ ｉ － ｍ
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中国免疫 学杂 志 ２ １ ０ ０年第 ２ 卷 ６
ｄｉ１ ．９９ｊｉｎ １０－８Ｘ．０００ ．０ ｏ：０ ３６／． ｓ．００４４ ２１ ．６ ０９ ｓ
・
中 医 中药 与 免 疫 ・
重 组 灵芝 免疫 调 节 蛋 白抑 制 ＨＬ ０细胞 增 殖及 诱 导 凋亡 的研 究① ６
郭 琦 孙 寒② 梁 重 阳
ｉ ｒ ｓｄａｄｃ ｐｓ ３ａｔｉ ｌ ａ ｄｉ Ｈ ６ ｅｓａｅ ｔａ ｄｂ Ｉ ８ Ｃ ｎｌｓ ｎ ｒＺ８ｃｕ ｈｂ ｅｐｏｆｒｉ ｄｉｄｃ ｎ ｅ ｅ ａ ａｅ ｃ ｖ ｅ ｖｔ Ｌ ０ｃＨ ｆｒ ｒ ｔ ｒ ． ｏ ｃ ｉ ：Ｌ － ｏｌ ｉ ｉｉｔ ｒ ｉ ａｏ ａ ｕｅ ｅａ ｎ ｓ － ｉｔ ｅ ｅ ｎ ｙ ｔ ｅ ｅ ｙ Ｚ－ ｕｏ ｄ ｎ ｔｈ ｌｅ ｔｎｎ ｎ
ｂ ａｐ ｅ ３ ｃ ｌｒ ｔ ｃ ａ ｓｙ Ｒ ｓ ｌ ： ｅｅ ｐ ｒ ｎｓｉｄｃ ｔｄｔ ａ Ｚ ８ ｃ ｕｄ ｉｄ ｃ ｅＨＩ ０ ｅ Ｕ ｐ ｐ ｏ ｉ． ｈ ａｃｕ ｉｎ ｌｖ ｌ ａ ｙ ｃ ｓ ａ 一 ｏｏｉ ｒ ａ ． ｅ ｕ ｔ Ｔ ｘ ｅ ｍｅ ｔ ｎ ｉａｅ ｔ Ｌ 一 ｏ ｕ ｅｔ ｆ ｅ ｓａ ｏ ｔｓｓ Ｔ ｅｃ ｌｉｍ ｅ ｓ ｓ ｍｅ ｉ ｓ ｓｈ ｉ ｈ ｒ ｌ ｎ ｈ ｉ ｏ ｅ Ｗ
ｄ 一对 Ｈ ６ 上８ Ｌ０细胞 的体外杀伤作用 ； 通过 Ａ ｎｘ Ｖ Ｐ 双染检测 细胞凋亡率 ； ｎ ｅｉ ／ Ｉ ｎ 应用钙离 子荧光探 针 Ｆｕ－／ Ｍ染色 ， ｌ ３Ａ ｏ 检测 ｒＺ８ Ｌ － 作用 Ｉ ６ － ０细胞后细胞 内钙离子浓度变化 ； Ｉ Ｌ 分光 光度 法测定 细胞 ｃ ｐｓ－ 活性 。结 果 ： Ｚ８可明显抑制 Ｈ ６ ｓ ａ ａｅ３ ｒ － Ｌ Ｌ０细胞增殖 ， 随着 ｒ － Ｌ ８浓度增 加 ， Ｚ 细胞凋亡率也增 加 ； 激光共聚焦检测细胞 内钙离子水平 明显升高 ， 且细胞 内 ｃ ｐ ｅ３ 并 ｓｓ ａ ａ － 活性增 高。结论 ： Ｚ ｒ一 Ｌ ８ 可诱导 Ｈ ５ Ｉ０细胞发生凋亡 ， 细胞 内钙超载及 ｃ ｐ ｅ３活性增 高可能是 ｒＺ８ ｓｓ ａ ａ－ Ｌ－ 诱导 Ｉ ６ － ０细胞凋亡 的途径之一。 Ｉ Ｌ ［ 关键词 ］ 灵芝 ； 免疫调节蛋 白； 凋亡
ａ ｏ ｔｓｓｏ ｐ ｐ ｏｉ ｆ蚴 ｃ ｌ ｆ ｃｅ ｔ ． ｅｍｅ ｈ ｎ ｓ ｍａ ｅ ｒｌｔｄ ｔ ｉｃ ａ ｅ ａｃｕ ｉｎ ｌｖ ｌ ｎ ｌｖ ｔ ｎ ｏ ａ ｐ ｅ３ ａ ｔ ｉ ． ｅｌ ｅ ｉ ｉ ｌ Ｔ ｃ ａ ｉｍ ｙ ｂ ｅａｅ ｏ ｎ ｒ ｓｄ ｃ ｉｍ ｏ ｅ ｅ ｄ ｅｅ ａ ｏ ｆ ｓ ａ － ｃ ｖｔ ｓ ｎ ｙｈ ｅ ｌ ａ ｉ ｃ ｓ ｉ ｙ
ｌｔｒ ｒｔｉ（Ｌ － ）ｏ ａｏｙｐｏｅｎ ｒＺ ８ ｎ ｃ ｌ ． ｔｏ ｓ ＨＬ ０ ｃｌ ｅｅｃｌ ｒｄ ａ ｄｔｅｉｈｂｔｄｒｔ ｆ｝ ０ ｃｌ ｓｍｅｓｒｄｂ ａｓｏ ｅ ｓＭｅｈ ｄ ： ６ ｅｓｗ ｒ ｕｔ ｅ ｎ ｎ ｉｉ ｅｏ Ⅱ６ ｅｌ ｗａ ａｕｅ ｙｍｅｎ ｆ ｌ ｌ ｕ ｈ ｅ ａ ｓ ＭＴｒ

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siRNA沉默人类急性髓细胞白血病HL-60细胞HDAC1基因表达的实验研究

siRNA沉默人类急性髓细胞白血病HL-60细胞HDAC1基因表达的实验研究


Ｈ３ Ｋ２ ７乙酰 化 水 平 ， 下调 Ｈ３ Ｋ９甲基 化 水 平 ， 对 Ｈ４乙 酰 化 无 明显 影 响 。
结 论 沉 默 ＨＤ ＡＣ １基 因表 达 后 可 能
通 过 上 调 与 基 因转 录激 活 有 关 的组 蛋 白 Ｈ３ ， Ｈ３ Ｋ１ ４ ， Ｈ３ Ｋ ９ ， Ｈ３ Ｋ２ ７乙 酰 化 水 平 ， 下 调 与 基 因 转 录 抑 制 有 关 Ｈ３ Ｋ９
马旭 东，卢善 良
摘要 ： 目的 探讨 ｓ ｉ ＲＮ Ａ 沉 默 人 类 急性 髓 细 胞 白血 病 ＨＬ 一 ６ ０细胞 ＨＤ ＡＣ １ 基 因表 达 后 对 细胞 增 殖 、 凋亡 以 方法 Ｌ ｉ ｐ ｏ ｆ ｅ ｃ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｅ ２ ０ ０ ０为 载 体 将 ＨＤＡＣ １特 异 性 ｓ ｉ Ｒ ＮＡ 转 染 人
导 致 细胞凋 亡 抑 制 和分 化 障 碍 ６ ］ 。本 文 通 过 ＲＮＡ 干 扰沉 默 ＨＤＡＣ １基 因 ， 探 讨 其 对 人 类 急 性髓 细胞
ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ 一 ３ 、 ｐ ｒ ｏ ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ 一 ９ 、 ｃ — Ｍｙ ｃ单 克 隆 抗 体 及 及 羊
国 Ｂ Ｄ公 司） ｝ 鼠 抗 人 ＨＤＡＣ １ 、 Ｊ ３ 一 ａ ｃ ｔ ｉ ｎ 、 Ｂ ｃ ｌ 一 ２ 、 ｐ ｒ ｏ —
胰 腺癌 、 胃癌 、 大 肠癌、 乳腺癌 、 前 列 腺 癌 等 恶 性 肿 瘤 相关 ［ １ － ５ ］ 。ＨＤ ＡＣ １可 以 介 导 核 小 体 结 构 改 变 和 调 节基 因表 达及 位点特 异 ＤＮＡ 结合 的转 录抑 制子 的转 录抑制 作 用 ， 参 与 细 胞 周 期 进 程 和分 化 ， 还 能 通 过线 粒体 转 位 促 进 癌 基 因合 成 ， 抑制 基因转 录，
天然黄酮类化合物抗肿瘤作用机制的研究

天然黄酮类化合物抗肿瘤作用机制的研究

天然黄酮类化合物抗肿瘤作用机制的研究王哲元;张璐;张有成【摘要】By reviewing the researches on anti-tumor mechanism of natural flavonoids,it was pointed out that its mechanism contained inhibiting cellular proliferation,inducing apoptosis,inhibiting the activity of protein tyro-sine kinase(PTK),fighting against invasion and the metastasis,and fighting against revascularization and others.%对天然黄酮类化合物抗肿瘤作用机制的研究进行综述,指出其抗肿瘤机制包括抑制细胞增殖、诱导凋亡、抑制蛋白酪氨酸激酶活性、抗侵袭转移和抗血管再生等.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2018(031)005【总页数】5页(P138-142)【关键词】天然黄酮类化合物;抗肿瘤;机制;综述【作者】王哲元;张璐;张有成【作者单位】兰州大学第二医院,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,甘肃兰州730030;兰州大学第二医院,甘肃兰州730030【正文语种】中文【中图分类】R285.6黄酮类化合物是自然界分布较广的具有2-苯基色原酮(flavone)结构的一系列化合物，是药用植物中的主要活性成分之一，具有丰富的药理作用。

黄酮类化合物可分为以下几类：黄酮醇、黄烷、黄烷酮、花色素、黄酮类、异黄酮和新黄酮类聚合物。

它们普遍存在于水果、谷物、豆类、蔬菜、坚果、中草药、香料、花朵以及部分饮料如茶、可可、啤酒和红酒中。

早期研究［1］发现，人均每天黄酮苷类混合物的饮食摄取量平均在0.5～1 g。

在亚太、地中海地区以及素食人群中，黄酮苷的日常饮食摄取量普遍较高，同时该地区及人群中结肠癌、前列腺癌和乳腺癌的发病率也较低。

曲古抑菌素A促进HL-60白血病肿瘤细胞的凋亡作用研究

曲古抑菌素A促进HL-60白血病肿瘤细胞的凋亡作用研究

１ 材 料 与 方 法
２１ Ｓ ． Ａ诱导 ＨＬ Ｏ细胞分化凋亡 ： Ｌ Ｏ Ｔ 一６ Ｈ 一６ 肿瘤细胞在含 １ Ｏ
效及机制 ， 以了解 Ｔ Ａ用 于治疗 急性 早幼 粒 白血 病恶性 肿瘤 的临床 Ｆ Ｓ的 Ｒ Ｉ ６ ０ Ｓ Ｂ ＭＰ 一１ ４ 培养基 中增殖迅 速 ， 天传代 。长势 良好 的细胞 隔 整体清秀 ， ， 圆形 悬浮集落状生长， 以看 到细胞成片生长 ， 可 没有 发生细
ｍｉ ， ｋ ｔｏ ， ｚｆ． ｓｏ ｅ ｅｃｔｌｓ ｈｂｔｒ ｉｈ ｓａ Ｅ ｓｒｍ ＴＪ Ｓｙ Ｈｉ ｎ ｄａｅｙａｅｉ ｉｉ ｃｏｔ— Ｍ ｔ ｎ ｏ Ｔｒ
ｔ ｄ ｃ ｓｇｏ ａ ａ ｄｇ ｎ － ｓ ｅ ｉ ｃ ｉ Ａ ｉ ｕ ｅ ｌｂ ｌ ｎ ｅ ｅ ｐ ｃ ｉ ＤＮＡ ｄ ｍｅ ｈ ｌｔ ｎ ｉ ｈ — ｎ ｎ ｆ ｅ ｔ ｙａｉ ｕ ｏ ｎ
３ ℃、 和湿度 的培养箱培养 ， ７ 饱 每天补充适量 的新 鲜培养基 。待 细胞长
到 ８￣９％满后 ， ｏ ｏ 即细胞连成片 ， 可进行传 代 传代时 ， 加样枪 轻轻 用 吹打培养基使 细胞分散均 匀， 然后将含 细胞 的培养基 按 １４ 均加 到 ：平 含新鲜培养基 的培养皿 中， Ｃ ｚ３＂ 饱和湿度培养 。 ５ Ｏ 、７ Ｃ、
病因至今仍不完全清楚 。过去人们一直认为基 因突变对包括 白血病在 度 Ｔ Ａ培养基 ， ５ Ｃ ｚ３℃、 Ｓ 于 Ｏ 、７ 饱和湿度的培养箱培养过夜 ， 显微观
内肿瘤 的发生具有非常重要 的作用 ， 相继发现 了许多癌 基 因和抑制 察加入 Ｔ Ａ后白细胞活力和形态。以上实验各重复三次 。 并 Ｓ 基因。随着研究的不断深人 ， 来越多 的证据 向“ 因决定 论” 越 基 提出 了 １３ 蛋 白 Ｈ Ｋ 甲基 化和乙酰化 的细胞 免疫检测 ： Ｔ Ａ处 理 ．组 。 ２ Ｓ 挑战 。最近研究发现表观遗传修饰 异常 （ Ｄ Ａ 甲基 化、 如 Ｎ 组蛋 白乙酰 组和未处理组的细胞培养液吸至 １ｍ 的离心管中，０ ０ 分钟 ， ５ｌ １０ 转／ 离心 化和甲基化） 与肿瘤的发生密切相 关 ， Ｄ Ａ 甲基化及 组蛋 白乙酰化 ５ 如 Ｎ 分钟。先 弃去上清 ， 将余下少 量培养基 与 ＨＬ Ｏ细胞 吹匀吸至 ０ 一６ ． 的异常表达调控着肿瘤 的发生口 ］ 。已发 现癌基 因多为不 充分 Ｄ Ａ ５ ｌ Ｎ ｍ 的离心管 中， Ｐ Ｓ 用 Ｂ 洗两遍 ， ４ 多聚 甲醛 （ ｇ ） 用 ｓ ｍａ 固定 ３ ｉ Ｏ分钟 ， 甲基化 ， 使癌基因重新表达及表达 过高 ； 癌基 因则多为过 度 Ｄ Ａ 甲 用 Ｐ Ｓ洗两遍 ， 抑 Ｎ Ｂ 然后用 ０ ４ Ｔｒｏ ｓ ｍａ 透膜 ２ ． ｉ ｎ（ｉ ） ｔ ｇ ０分钟 ， Ｐ Ｓ洗 两 用 Ｂ
江浙蝮蛇毒诱导类风湿性关节炎患者滑膜细胞凋亡的实验研究.

江浙蝮蛇毒诱导类风湿性关节炎患者滑膜细胞凋亡的实验研究.

江浙蝮蛇毒诱导类风湿性关节炎患者滑膜细胞凋亡的实验研究[ 09-09-20 16:21:00 ] 编辑：studa20作者：胡珏杨旭燕吕庆华许东航【关键词】江浙蝮蛇毒类风湿性关节炎滑膜细胞凋亡类风湿性关节炎（RA）是一种以滑膜增生、淋巴巨噬细胞浸润滑膜层并伴有少量的凋亡为特征的自身免疫性疾病。

既往研究表明抗凋亡蛋白Bcl-2在RA患者中较普通骨关节炎患者显著上调，从而抑制滑液成纤维细胞的凋亡，并导致RA患者滑膜的超常增生［１，２］。

江浙蝮蛇毒（Agkistrodom halys Pallas venom，ASV）的主要活性成分蛇毒蛋白有诱导凋亡和抗肿瘤作用，临床上已被用于治疗类风湿性关节炎等慢性疾病所致的炎症和疼痛［３，４］。

然而，ASV对RA患者的治疗作用机制尚未明确。

作者自2007年2至7月检测ASV 对RA患者滑液成纤维细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。

1 临床资料1.1 一般资料选择浙江大学附属第二医院骨科行膝关节置换术的RA患者6例，其中男3例，女3例；年龄34～62岁，平均（50±10）岁；病程6～30年，平均（14±10）年。

所有患者皆符合1987年美国风湿病学会（ACR）修订的RA诊断标准。

1.2 主要试剂 DMEM培养基、Ⅱ型胶原酶、FBS，美国Gibco公司；ASV由浙江龙图蛇业集团有限公司提供，-20℃ 保存；Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit，美国BD公司；鼠抗人bcl-2-FITC-mAb、羊-抗鼠-FITC-IgG-mAb，美国Caltag公司；碘化吡啶，美国Sigma公司。

1.3 滑膜细胞的分离和培养无菌条件下，从关节置换术获得的滑膜组织切成3～5 mm的碎片，用胶原酶Ⅱ和等体积的DMEM培养基，在37 ℃、5%CO2孵箱中消化4 h。

常规离心，弃上清液后加0.25 %胰酶1 ml，混匀后消化30 min。

1000 r/min离心后弃上清液，加入含10% FBS、100 U/ml青霉素和100 μg/ml链霉素的DMEM培养基，放至37 ℃、5 %CO2孵箱中孵育，常规传代培养。