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高中生物常用试剂

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高中生物实验方法与常用试剂
1．实验方法
实验方法是整个实验设计的精髓，是做好实验设计的关键所在。现
将与中学实验有关的一些最常见的经典的实验方法汇总如下：
(1)化学物质的检测方法：
①淀粉——碘液
②还原糖——斐林试剂、班氏试剂
③CO2——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂
④乳酸——pH试纸
⑤O2——余烬复燃
⑥无O2——火焰熄灭
⑦蛋白质——双缩脲试剂
⑧染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液
⑨DNA——二苯胺试剂
⑩脂肪——苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
(2)实验结果的显示方法：
①光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量
②呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量
③原子途径——放射性同位素示踪法
④细胞液浓度大小——质壁分离
⑤细胞是否死亡——质壁分离
⑥甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等
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⑦生长激素作用——生长速度(体重变化，身高变化)
⑧胰岛素作用——动物活动状态
⑨菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度
⑩大肠杆菌——伊红—美蓝琼脂培养基
(3)实验条件的控制方法：
①增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物
②减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水
③除去容器中CO2——NaOH溶液
④除去叶片中原有淀粉——置于黑暗环境
⑤除去叶片中叶绿素——酒精隔水加热
⑥除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光
⑦如何得到单色光——棱镜色散或彩色薄膜滤光
⑧血液抗凝——加入柠檬酸钠
⑨线粒体提取——细胞匀浆离心
⑩骨的脱钙——盐酸溶液
⑩灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料,灭菌方法
不同：培养基用高压蒸气灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂
洗净，擦干后用75％酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。
(4)实验中控制温度的方法：
①还原糖鉴定：水浴煮沸加热
②酶促反应：水浴保温
③用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热
④DNA的鉴定：水浴煮沸加热
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⑤细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养
2．斐林试剂、班氏试剂与尿糖试纸
这三种物质均可用来检验含醛基的有机物的存在，在医学上用来
检验糖尿病，其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化，但成分略
有不同：
斐林试剂：即硫酸铜、氢氧化钠和酒石酸钾钠组成的蓝色混合溶液。
分为斐林试剂A和斐林试剂B，A为CuSO4溶液，B为氢氧化钠和酒石
酸钾钠的混合溶液，使用时将A、B等体积混合即成斐林试剂。
班氏试剂：即硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸钠组成的混合液，又叫本尼
迪克特(Benedict)试剂，它与醛反应的结果是与斐林试剂一致的，只
是比斐林试剂更稳定，所以在临床化验中更常使用。
尿糖试纸：又叫硫酸铜试纸，呈白色,带蓝色斑点，用于糖尿病患
者的尿糖测试。每片含硫酸铜20毫克,枸橼酸300毫克,碳酸钠80毫
克，氢氧化钠235毫克。尿糖试纸法快速、方便，试纸的正确使用方
法为：将试纸条放在尿液中浸湿，一秒钟后取出，在一分钟内观察试
纸的颜色，并与标准色板对照，根据不同的颜色来确定尿糖阳性的程
度。
3．斐林试剂和双缩脲试剂的比较
相同点：①都由NaOH溶液和CuSO4溶液构成；
②斐林试剂甲液和双缩脲试剂A都为0．1g/mLNaOH溶液。
不同点：①CuSO4溶液浓度不一样：斐林试剂乙液为0．05g/mLCuSO4
溶液，双缩脲试剂B为0．01g/mLCuSO4溶液。
②配制比例不一样。
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③使用方法不一样：斐林试剂是甲、乙液一起混合后再使
用，双缩脲试剂则是先向待鉴定材料加入A试剂摇匀后，再加入试剂
B。
④鉴定的对象不一样：斐林试剂鉴定的是还原糖，双缩脲
试剂鉴定的是蛋白质。
⑤反应本质及颜色反应不一样。
4．苏丹Ⅲ染液与苏丹Ⅳ染液的比较
都是用来鉴定脂肪。苏丹Ⅳ染液更易溶于脂肪，所以染色更深，
同时要求染色时间更短。
生物学中常用的试剂：
1、斐林试剂： 成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.05g/ml CuSO4（乙
液）。用法：将斐林试剂甲液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林
试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则
呈砖红色。
2、班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖
红色沉淀。用于尿糖的测定。
3、双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH（甲液）和0.01g/ml CuSO4（乙
液）。用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4
滴乙液，摇匀。如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。
4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。用于检测
脂肪。可将脂肪染成橘黄色（被苏丹Ⅳ染成红色）。
5、二苯胺：用于鉴定DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会被染成蓝色。
6、甲基绿：用于鉴定DNA。DNA遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。
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（甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。）
7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染色，再用50%的
酒精溶液洗去浮色。
8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋
白质凝固变性。低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不
强；而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，
妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。75％的酒精溶液常用于手术前、打针、
换药、针灸前皮肤脱碘消毒以及机械消毒等。
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA。
10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色体着色，
可将染色体染成紫色，通常染色3~5分钟。（也可以用醋酸洋红染色）
12、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢
酶和Fe3+的催化效率。（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）
13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用
于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
14、碘液：用于鉴定淀粉的存在。遇淀粉变蓝。
15、丙酮：用于提取叶绿体中的色素。
16、层析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，
也可用93号汽油）可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。
17、二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可
使研磨充分。
18、碳酸钙：研磨绿色叶片时加入，可中和有机酸，防止在研磨时叶
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绿体中的色素受破坏。
19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相当于30%的蔗糖溶液，比植物细胞液的
浓度大，可用于质壁分离实验。
20、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液：与鸡血混合，防凝血。
21、氯化钠溶液：①可用于溶解DNA。当氯化钠浓度为
2mol/L、 0.015mol/L时DNA的溶解度最高，在氯化钠浓度为
0.14 mol/L时，DNA溶解度最高。②浓度为0.9%时可作为生理盐水

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高中生物实验试剂配制方法

高中生物实验试剂配制方法

高中生物实验试剂配制方法1、斐林试剂试剂甲：将34.5克结晶硫酸铜溶于500亳升水中，加0.5亳升硫酸，混合均匀。

试剂乙：将125克氢氧化钠和137克酒石酸钾钠溶于500毫升蒸馏水中。

（贮于带橡皮塞的瓶中）※临用时试剂甲与试剂乙等量混合※斐林试剂是由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液配制而成的。

它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀因此，斐林试剂常用于检测可溶性的还原性糖的存在与否。

2、双缩脲试剂取10 g氢氧化钠放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。

取1 g硫酸铜放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。

瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。

※双缩脲试剂使用时，先向蛋白质溶液中加入NaOH溶液（2mL），振荡摇匀，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，与蛋白质发生紫色反应，因此，双缩脲试剂常用于检测蛋白质的存在与否注意∶林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但二者有如下三点不同：（1）溶液浓度不同斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲，其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙，其浓度为0.05g/ml；双缩脲试剂中NaOH溶液（双缩脲试剂A）的浓度为0.1g/ml，CuSO4溶液（双缩脲试剂B）的浓度为0.01g/ml。

（2）使用原理不同斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2O沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。

用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。

鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。

高中生物实验必知的试剂

高中生物实验必知的试剂

被健那绿染液染成蓝绿色的线粒体 可在健那绿染液中维持活性数小时
图2
6.溴麝香草酚蓝水溶液：检测 CO2。CO2 可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄，根据溴 麝香草酚蓝水溶液变成黄色的时间长短，可以检测 CO2 的产生情况。 7.酸性重铬酸钾溶液：鉴定酒精。橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇（俗称酒精） 发生化学反应，变成灰绿色。 8.碘液：检测淀粉，淀粉遇碘变蓝。 9.龙胆紫溶液（或醋酸洋红液）：碱性染料。使染色体着色，用于观察细胞的有丝分裂、减 数分裂等。 注意：醋酸洋红液是以醋酸作为溶剂配制的染液，但它是碱性染料（碱性染料是指利用阳离 子着色的染料）。
如果实验过程中需要维持细胞活性，就一定要考虑细胞所处环境的渗透压。如果实验材料为 动物细胞，则需要使其处在细胞的等渗溶液中。如用健那绿染液使人口腔上皮细胞中线粒体 着色的原理是正常活性状态下的线粒体中细胞色素氧化酶能够维持健那绿染液的氧化状态， 从而使线粒体呈蓝绿色，所以用生理盐水配制健那绿染液，以保证细胞有活性。 （2）试剂替代性质相似 如叶绿素提取液为有机溶剂，所以不能用水制剂来替代。观察根尖分生组织细胞有丝分裂的 实验原理是染色体易被碱性染料染色，所以该实验中可选用颜色较深的碱性染料染色。 （3）试剂浓度 重点试剂的浓度需要准确识记，如斐林试剂乙液为 0.05 g/mL 的 CuSO4 溶液，而双缩脲试剂 B 液为 0.01 g/mL 的 CuSO4 溶液；观察植物细胞质壁分离实验选用的蔗糖溶液质量浓度为 0.3 g/mL 等。 四、提取和分离 教材中与“提取”或“分离”有关的实验有“体验制备细胞膜的方法”与“绿叶中色素的提 取和分离”，相关试题易错的原因主要是“相似”内容的干扰，分析如表所示：
五、冲洗和漂洗 1.酒精在高中生物实验中的作用
高中生物试剂染色剂总结

高中生物试剂染色剂总结

选修：N-1-萘基乙二胺盐HCL酸化与亚硝酸盐发生重氮反应产生玫瑰红色伊红美蓝使大肠杆菌菌落呈黑紫色有金属光泽刚果红与纤维素等多糖物质形成红色复合物焙花青用焙花青-铬矾法染色染色体时需用卡诺是固定液（无水乙醇+冰醋酸=3：1）二苯胺沸水加热DNA溶液变蓝石油醚胡萝卜素萃取与层析酚红指示剂检测培养基PH变化（尿素选择培养基）石炭酸或煤酚皂化学消毒剂NaCL分离油层无水硫酸钠除水氢氧化钙破坏细胞结构，分解果胶，防止橘皮压榨时滑脱，提高出油率0.25%NaHCO3和5%NaSO4
使橘皮易于水分离。

酒精在高中生物实验中的作用及用量

酒精在高中生物实验中的作用及用量

酒精在生物实验中的作用酒精是一种易燃、易挥发的无色透明液体，它的水溶液具有特殊的、令人愉快的香味，并略带刺激性。

它是乙醇的俗称，分子式C2H5OH，能与水、甲醇、乙醚和氯仿等以任何比例混溶。

是生物实验经常使用的重要试剂，在不同实验中酒精的作用不尽相同，归纳起来酒精在生物实验中的作用有以下四个方面。

1.有机溶剂酒精是能与水和大多数有机溶剂混溶的亲水性和脂溶性有机溶剂，是实验室常用的溶剂。

其特点是在常温常压下呈液态，具有较大的挥发性，在溶解过程中，溶质与溶剂的性质均无改变。

亲水性的成分除蛋白质、粘液质、果胶、淀粉和部分多糖等外，大多能在乙醇中溶解。

难溶于水的亲脂性成分，在乙醇中的溶解度也较大。

因此，利用酒精的这种特性在生物实验中常有下面几种用途。

1.1 脱色剂酒精是一种常用的脱色试剂。

在一些以颜色变化为观察对象的实验中，必须将材料中会引起干扰作用的色素除去，即要进行脱色处理以免干扰对实验结果的观察。

如在“探究叶绿体在光照下合成淀粉实验”中，将处理过的天竺葵叶片放入盛有酒精的小烧杯里，隔水加热，使叶片褪色（破坏和溶解叶片中所含的色素）。

这样就可在滴加碘液后,避免对观察叶片颜色变化的干扰。

1.2 漂洗剂酒精是良好的有机漂洗剂。

材料经染色或相应处理后会有一些染料或物质附着在其表面，必须将材料表面的浮色等清洗掉才能避免对后续实验步骤以及实验结果观察的干扰。

对于不溶于水的物质需用酒精漂洗。

如在“脂肪的鉴定实验”中，用苏丹Ⅲ染液对脂肪组织进行染色后，可用体积分数为50%的酒精来冲洗浮色，以免干扰对细胞内脂肪颗粒的观察。

因为50%酒精对脂肪组织没有破坏作用并且容易挥发，且苏丹Ⅲ染料在酒精溶解度较高，所以用50%的酒精作为洗去浮色的漂洗剂。

1.3 提取剂和层析剂酒精的溶解性能比较好，对细胞的穿透能力较强。

能够溶解各种色素和蛋白质等物质，且酒精无毒，方便操作，可用酒精作为提取和分离物质的试剂。

在“绿叶中色素的提取和分离实验”中，可以用酒精作为提取色素的试剂。