各种生物学常用试剂配制

中学生物实验中常用试剂的配制及作用徐以润（江苏省灌南高级中学江苏连云港222500）1.碘液配制：取2g碘化钾，溶解在5ml蒸馏水中，再加1g碘，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。

溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。

作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。

2.斐林试剂配制：斐林试剂(Fehling's solution)是德国化学家斐林（Hermann von Fehling，1812年--1885年）在1849年发明的。

斐林试剂斐林试剂A和斐林试剂B配制而成的。

斐林试剂A 是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液，斐林试剂B是硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL 的溶液。

临用时斐林试剂A与斐林试剂B等量混合。

作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。

还原性糖与斐林试剂发生作用，水浴加热，生成砖红色沉淀。

如用于鉴定组织液中是否有还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。

3.班氏尿糖定性试剂配制：173克柠檬酸钠和100克无水碳酸钠溶解于800毫升水中。

再取17.3克结晶硫酸铜溶解在100毫升水中，慢慢将此溶液加入上述溶液中，最后用水稀释到1升，边加边搅，如产生沉淀可滤去。

作用：鉴定还原性糖，在沸水浴加热条件下与还原糖反应而生成砖红色的Cu2O沉淀，使用原理同斐林试剂，都是二价铜离子与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀，所不同的是班氏试剂可长期使用。

4.双缩脲试剂配制：双缩脲试剂（biuret reagent）是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成。

双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。

也可用于鉴定多肽。

双缩脲试剂使用时，先向2mL蛋白质溶液加入2mL双缩脲试剂A，振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴双缩脲试剂B，振荡摇匀后观察现象。

植物生物学试验有关试剂配制组织培养实验有关试剂的配制：1升储备液用量每升培养基取用量（mg）（ml） 20*储备液1（大量元素）NH4NO3 KNO3 33000 CaCl2.2H2O 38000 50 MgSO4.7H2O 8800 KH2PO4 7400 3400 200*储备液2（微量元素） KI H3BO3 166 MnSO4.4H2O 1240 ZnSO4.7H2O 4460 5 Na2MoO4.2H2O 1720 CuSO4.5H2O 50 CoCl2.6H2O 5 5 200*储备液3（铁盐）FeSO4.7H2O 5560 5 Na2.EDTA.2H2O 7460 200*储备液4（有机成分）肌醇烟酸20000 盐酸吡哆醇 100 5 盐酸硫胺素 100 甘氨酸 20 400 次氯酸纳消毒液：取30ml次氯酸纳溶液，用蒸馏水定容至100ml。

现配现用。

75%的酒精：75ml的95%的酒精加水定容至95ml。

0.2％的升汞溶液：称取HgCl2 20克，加蒸馏水至4000ml。

1N 盐酸：取8.25ml的浓盐酸，加蒸馏水定容至100ml。

1N NaOH：称8g NaOH，用蒸馏水定容至200ml。

0.1mg/ml的2,4-D溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

0.1mg/ml 的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250ml。

MS培养基储备液的配制成分遗传转化与GUS基因检测的试剂配制LB培养基的配制：将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨酵母提取物氯化钠10g 5g 10g 如果需要用1N NaOH（10～15ml）调整pH至7.0，再补足水至1L10ml 的10mmol/l的AS（乙酰丁香酮）母液（100x）配制：称19.6mg的AS，先溶于少量甲醇中，然后慢慢加蒸馏水定容至10ml，过滤除菌，分装成200ul/管（每组1管），使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。

分子生物学实验常用试剂缓冲液的配制方法1.常见试剂配制方法：(1)磷酸盐缓冲液（PBS）的配制方法：-配制PBS需要使用NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4等化学品。

-以10倍浓度配制PBS的浓缩溶液，然后稀释为需要的浓度。

-例如，1倍浓度的PBS可以通过将1升的10倍浓度PBS溶液加入9升蒸馏水来制备。

(2) 神经元无血清培养基（Neurobasal Medium）的配制方法：- 配制Neurobasal Medium需要使用神经元培养基基本成分及其他补充物质。

-根据制造商提供的配方，按照相应比例将各种化学品溶解在无菌蒸馏水中。

-配制好的培养基可以用于维持和培养神经元体外培养。

(3) 洗涤缓冲液（Washing Buffer）的配制方法：-配制洗涤缓冲液需要使用磷酸盐缓冲液（PBS）及其他添加剂。

- 将PBS溶液中加入适当浓度的Tween-20或者Tris-HCl来制备洗涤缓冲液。

-根据实验需求，可以调整洗涤缓冲液的成分和浓度。

(4) 乙醇（Ethanol）溶液的配制方法：-配制乙醇溶液常用的浓度有70%和100%。

- 70%的乙醇溶液可以通过将70ml无菌蒸馏水加入30ml无水乙醇中配制得到。

-100%的乙醇溶液可以直接使用无水乙醇。

2.常见缓冲液配制方法：(1) Tris/Tricine缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Tricine缓冲液需要使用Tris（三羟甲基氨基甲烷）和Tricine（三甘胺酸）等化学品。

- 根据实验要求，在一定PH范围内，按照不同比例混合Tris和Tricine，溶解于适量的蒸馏水中。

(2) 氯化钾缓冲液（KCl Buffer）的配制方法：- 配制KCl Buffer需要使用KCl和其他添加剂。

-将适量的KCl和其他缓冲液成分溶解在蒸馏水中。

-根据实验要求，调整KCl的浓度和缓冲液的PH值。

(3) Tris/Acetate缓冲液的配制方法：- 配制Tris/Acetate缓冲液需要使用Tris和乙酸等化学品。

试剂配制方法一、实验室常用储备液（1）0.5mol/L EDTA（乙二胺四乙酸）在700ml 超纯水中溶解186.1g Na2EDT A·2H2O，在磁力搅拌器上剧烈搅拌。

用10mol/L NaOH调至PH8.0（约用10mol/L NaOH 50ml），补加超纯水至1L。

分装后高压蒸汽灭菌。

室温贮存。

注意：EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的PH值调至接近8.0，才会溶解。

（2）1mol/L Tri s·Cl将121.1g Tris碱溶于800ml超纯水中，用浓盐酸将PH值调至设定值。

PH值HCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷却至室温后，方可最后调定PH值。

加超纯水定容至1L，分装后高压蒸汽灭菌。

如果配制的溶液呈现黄色，应予丢弃。

并使用质量更好的Tris。

Tris溶液的PH值因温度而异，温度每升高1℃，PH值大约降低0.03个单位。

（3）10mol/L 乙酸铵(NH4C2H3O2)将771g乙酸铵溶于800ml蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，用蒸馏水定容至1L，过滤除菌，室温贮存。

乙酸铵在热水中分解，含有乙酸铵的溶液不能高压蒸汽灭菌。

（4）甘油（10％，V/V）用9体积的灭菌纯水稀释1体积的分子生物学级的甘油。

用0.22μm过滤器过滤除菌。

分装成1ml每份，-20℃贮存。

（5） 10mg/ml溴化乙啶(EtBr)在20ml双蒸水中溶解0.2g溴化乙啶，磁力搅拌数小时，以确保其完全溶解。

然后用铝箔包裹容器或将溶液转移至棕色瓶中，于4℃避光保存。

注意：溴化乙啶是一种诱变剂，必须小心操作。

（6） 70％乙醇（C2H5OH）100ml70ml无水乙醇溶于30ml蒸馏水。

（7） 50×葡萄糖Glucose（150ml储备液）将54g D-葡萄糖溶于超纯水，磁力搅拌至完全溶解，并将体积调至150ml，过滤除菌，室温贮存。

（8） 10mol/L氢氧化钠（NaOH）将400g NaOH颗粒，加入到一个约含有0.9L蒸馏水的烧杯中，磁力搅拌至完全溶解。

生物学中常用的试剂：1.斐林试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液)。

用法：将斐林试剂甲液和乙液混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红色。

2.班氏糖定性试剂：为蓝色溶液。

和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红色沉淀。

用于尿糖的测定。

3.双缩脲试剂：成分：0.1g/ml NaOH(甲液)和0.01g/ml CuSO4(乙液)。

用法：向待测液中先加入2ml甲液，摇匀，再向其中加入3~4滴乙液，摇匀。

如待测中存在蛋白质，则呈现紫色。

4.苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。

用于检测脂肪。

可将脂肪染成橘黄色(被苏丹Ⅳ染成红色)。

5.二苯胺：用于鉴定DNA。

DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色。

6.甲基绿：用于鉴定DNA。

DNA遇甲基绿(常温)会被染成蓝绿色。

吡罗红：检测RNA，呈红色7、50%的酒精溶液：用于洗去苏丹Ⅲ在脂肪上的浮色。

8、70%的酒精溶液：用于医学临床上的消毒灭菌。

9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集DNA10、15%的盐酸：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。

11. 龙胆紫溶液或醋酸洋红：碱性染料，用于染色体染色时，前者呈深蓝色，后者呈红色改良苯酚品红染液：检测染色体，红色健那绿：检测线粒体，专一性让线粒体染色呈蓝绿色12.20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁：用于比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率。

（新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。

14.碘液：用于鉴定淀粉的存在。

遇淀粉变蓝。

遇糖原变红15.丙酮：用于提取叶绿体中的色素16.层析液：(成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93号汽油)可用于色素的层析，即将色素在滤纸上分离开。

17.二氧化硅：在色素的提取的分离实验中研磨绿色叶片时加入，可使研磨充分。

分子生物学实验常用试剂配制分子生物学实验常用试剂配制(1) 0.01M PBS缓冲液：一袋粉制PBS缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

(2) 0.01M枸橼酸盐缓冲液：一袋粉制枸橼酸盐缓冲液（中杉有售）加1000ml蒸馏水。

0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。

(3)1mol/L的TBS缓冲液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl 调至pH8.0,加水至1000ml。

(4) 1‰DEPC水：1mlDEPC加入1000ml新鲜三蒸水中，剧烈震荡20分钟使充分混匀，37o C至少放置2h或过夜，HIRAYAMA HV-50高压灭菌器高温高压30分钟降解DEPC，4℃保存。

(5) 1%琼脂糖凝胶：取琼脂糖0.2g置烧杯中，加入20ml的1×TAE缓冲液，封闭锥形瓶口，放入微波炉内加热，不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液，待琼脂糖全部熔化后取出摇匀，冷却至60℃左右，加入10mg/ml溴化乙锭（EB）1μl，EB的终浓度为0.5μg/ ml，充分混匀。

将温热的凝胶倒入已经放好梳子的凝胶槽中，厚度约为3-5mm，注意不要有气泡，将凝胶放置室温待其自然凝固。

凝固后从胶槽中轻轻取出梳子。

(6)0.5mol/L EDTA缓冲液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH调至pH8.0，加水至1000ml。

(7) 50×TAE缓冲液：Tris碱242g，17.4mol/L冰乙酸57.1ml，0.5mol/L EDTA (PH8.0)100ml加蒸馏水至1000ml。

一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA 的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

LB 培养基PBS 缓冲液1x 10x 胰蛋白胨Tryptone 10g/L液体Na2HPO4（8mM/L ）1.14g/L11.36g/L酵母提取物Yeast extract 5g/L Nacl(136mM/L)7.95g/L 79.56g/L氯化钠Nacl10g/L KH2PO4(2mM/L)0.27g/L 2.72g/L 琼脂20g/L固体Kcl(2.6mM/L)0.2g/L 1.94g/L ddWater 至1L 至1LSDS-PAGE 电泳缓冲液5X NaOH 调节pH 至7.4-7.6Tris 15.1g 用前稀释TBS 缓冲液1X 10X甘氨酸94g Tris 2.42g/L 24.2g/L SDS 5g氯化钠Nacl 8g/L 80g/L ddWater 至1L ddWater 至1L 至1LHcl 调节pH 至7.4-7.6WB 湿转转膜液10X 加500ul Tween-20/L 得PBST/TBST Tris 30.3g/用前稀释甘氨酸144g/L细胞破碎缓冲液ddWater 至1L Kcl(300mM)22.37g/L WB 湿转转膜液使用KH2PO4(50mM) 6.81g/L 10X Trans Buffer 100mlEDTA(1mM)0.292g/L 甲醇200ml ddWater 至1L pH8.0ddWater 700ml 10%SDS 50℃加热可促溶解IPTG （1mM/L ）1ul+1ml 菌液SDS 10g IPTG 2.38g10XddWater 至100ml 灭菌ddWater 至10ml稀释10倍后10ul+1ml 菌液10%过硫酸铵APS3周内使用过硫酸铵APS0.2g Amp （50-100ug/ml ）10X1ul+1ml 菌液ddWater 2ml Amp 1g 灭菌ddWater至10ml1.5MTris-Hcl pH 8.8Hcl 调至8.8稀释10倍后10ul+1ml 菌液Tris 18.8g ddWater 至100ml考马斯亮蓝染色液过滤后可循环使用1M Tris-Hcl pH6.8Hcl 调至6.8甲醇500ml Tris 12.12g 乙酸100ml ddWater 至100ml R-250考马斯亮蓝0.5gddWater 至1L考马斯亮蓝脱色液乙醇比例越高脱色越快3705ZZL甲醇/乙醇100-500ml 乙酸50ml ddWater 至1LTAE 50X ELISA 包被液Tris 242g 先溶解再加乙酸后定容Na2CO3 1.59g pH9.6Na2EDTA·2H2O 37.2g NaHCO3 2.93g ddWater 800ml灭菌ddWater 至1L 乙酸57.1ml ddWater 至1L 生理盐水0.9%氯化钠Nacl 9g 灭菌使用SDS 分离胶浓度分离范围ddWater 1L6%50-150kd 8%30-90kd 鲜血培养基10%20-80kd 培养基100ml 约37℃加血12%12-60kd 鲜血5ml 15%10-40kd巧克力培养基同样5%鲜血于≥90℃时加入琼脂糖凝胶琼脂糖1XTAE 1%核酸染料透析袋处理0.2g 20ml 6/8/11孔1ul 2%(W/V)碳酸氢钠+1mmol/L ED TA(pH 8.0)煮沸10min 0.3g 30ml 13孔 1.5ul 0.4g 40ml 18/25孔2ul 0.3g 20ml 1.5%1ul ddWater 清洗0.4g20ml2%1ul1mmol/LEDTA(pH 8.0)煮沸10min包涵体溶解液包涵体洗涤液磷酸钠（20mm ） 3.27g Hcl 调至pH 7.4EDTA （0.5mM ）0.146g Hcl 调至pH8.0氯化钠(300mM)17.53g Nacl （100mM ） 5.844g 咪唑（10mM ）0.68g Tris （50mM ） 6.06g 尿素（8M ）484.8g TritonX-100（1%）10mlddWater 至1L ddWater 至1L 加入后超声10min ，离心20min 0.1M 氯化钙CaCl2感受态用蛋白复性缓冲液CaCl2 1.1g 照紫外灭菌Nacl （100mM ） 5.85g Hcl调至pH8.灭菌ddWater 10mlTris （50mM ） 6.06g甘油（5-10%）50ml枸橼酸钠抗凝剂109mM/LGSH （2mM)0.6gNa3C6H5O7·2H2O 32.05g 灭菌后用，以实际分子量计算用量GSSG(0.2mM)0.1gddWater 至1L 尿素(6/4/2/0M)计算1：9血使用ddWater 至1L尿素6-4-2-0梯度分别1LELISA 终止液（2mM/L ）H2SO43705ZZL浓硫酸（98%）21.7ml酸入水中！ddWater 178.3ml。

生物化学实验常用试剂的配制方法1、0.5mol/L 氢氧化钠溶液 *组份浓度 0.5mol/L*配制量 2L*配置方法 1.准确称取氢氧化钠 40g。

2.用去离子水溶解并稀释至 2L。

2、0.5mol/L 盐酸溶液 *组份浓度 0.5mol/L*配制量 2L*配置方法 1.准确量取盐酸 83.4mL。

2.用去离子水稀释至 2L。

4、0.2％葡萄糖标准溶液 *组份浓度 0.2％*配制量 1L*配置方法 1.称取葡萄糖 2.5g 置于称量瓶中，在70℃干燥 2 小时。

2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。

3.准确称取葡萄糖 2.000g。

4.用去离子水溶解并定容至 1L5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清 *组份浓度 250μg/mL白蛋白标准液 *配制量 2L*配置方法 1.准确称取 250mg标准牛血清白蛋白。

2.用 0.03mol/LpH7.8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L。

3.4℃保存。

6、Folin 试剂甲*配置方法 1.称取 10g氢氧化钠溶于 400mL去离子水中，加入 50g 无水碳酸钠，溶解，待用。

2.称取 0.5g酒石酸钾钠，溶于 80mL去离子水中，加入 0.25g 硫酸铜.5水，溶解。

3.将 1：2：去离子水按 20：4：1的比例混合即可。

4. 4℃保存，可用一周。

7、Folin 试剂乙*配置方法1.在 500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠.2水 25.0359g，钼酸钠.2水6.2526g，去离子水 175mL，85％磷酸 12.5mL，浓盐酸 25mL，充分混合。

2.回流 10 小时，再加硫酸锂 37.5g，去离子水 12.5mL及数滴溴。

3.然后开口沸腾 15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到 250mL。

4.于棕色瓶中保存，可使用多年注意：上述制备地 Folin 试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol/L 左右，几种操作方案都是把 Folin 试剂乙稀释至 1mol/L 的浓度作为应用液，我们这时是把贮备液于使用前稀释 18 倍，使之浓度为 0.1mol/L 略高。