阿氏液、pbs液配方

血凝-血凝抑制试验中配制四单位抗原试验佚名【摘要】血凝-血凝抑制(HA-HI)试验是鉴定病毒及检测相应抗体常用的检测方法之一,是兽医实验室人员必须掌握的试验技能,主要应用于家禽H5N1/H7N9型禽流感、鸡新城疫的免疫效果评估.试验中根据血凝(HA)试验的终点判定,正确计算和配制四单位(4HAU)抗原是直接影响试验成败的关键,配制4HAU抗原后需进行抗原回滴验证,确保血凝抑制(HI)试验结果无误.【期刊名称】《湖南畜牧兽医》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】3页(P47-49)【关键词】四单位抗原;抗原回滴;血凝-血凝抑制试验;鸡禽流感抗体检测【正文语种】中文【中图分类】S851.4在HA-HI试验操作过程中，应准备好试验试剂、器材，按照试验步骤，提前配制好阿氏液、PBS液、1%鸡红细胞、病毒抗原、阳性血清，在完成HA试验后仔细观察抗原的最高稀释倍数，根据观察结果计算配制出4HAU抗原，HI试验与抗原回滴验证依次进行，抗原回滴验证结果出现抗原少、太少或太多的问题，则配制4HAU抗原环节出现误差，抗原回滴情况好则HI试验成功。

1 试验准备1.1 试剂禽流感病毒H5亚型（Re-8株）血凝抑制试验抗原、禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验阳性血清、PBS干粉、柠檬酸钠。

1.2 器材分析天平、超纯水仪、离心机、微量振荡器、注射器、离心管、三角烧杯、移液器及吸头、96孔V型微量反应板。

1.3 阿氏液配制称3.8g柠檬酸钠于三角烧杯中，加蒸馏水100mL。

1.4 PBS液配制按PBS干粉说明配制出1 000 mL PBS缓冲液。

1.5 1%鸡红细胞悬液制备取十分之一阿氏液于注射器中，采SPF公鸡血混匀。

用10倍血量的PBS液洗涤3次（高速离心），抽干清液，如SPF公鸡血量为1mL，则加30 mL PBS液，如SPF公鸡血量为2 mL，则加60 mL PBS液，以此类推。

1.6 病毒抗原、阳性血清按试剂要求加入蒸馏水2 mL。

86.6
13.4
7.8
90.8
9.2
8.0
94.0
6.0
10.5
7.8 91.5
8.5
7.9 93.5
6.50
8.0 94.7
5.3
Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液为 35.61g/L。 Na2HPO4·12H2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64g/L。 NaH2PO4·H2O 分子量 = 138.01，0.2 mol/L 溶液为 27.60g/L。 NaH2PO4·2H2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为 31.21g/L。
常用磷酸缓冲液的配制方法
一、磷酸钠缓冲液（phosphate buffer，PB） 试剂： NaH2PO4·2H2O Na2HPO4·12H2O
配制方法： 配制时，常先配制 0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 0.2mol/L 的 Na2HPO4，两者按一定比例混合
即成 0.2mol/L 的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的 PB 和 PBS。 （1）0.2mol/L 的 NaH2PO4：称取 NaH2PO4.2H2O 31.21g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至 1000ml 溶解。 （ 2 ） 0.2mol/L 的 Na2HPO4 ： 称取 NaHPO4·12H2O 71.64g （或 Na2HPO4·7H2O 53.6g 或 Na2HPO4·2H2O 35.61g）加重蒸水至 1000ml 溶解。 （3）0.2mol/L pH7.4 的 PB 的配制：取 19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4 和 81 ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4， 充分混合即为 0.2mol/L 的 PB（pH 约为 7.4～7.5）。若 pH 偏高或偏低，可通过改变二者的比 例来加以调整，室温保存即可。

PBS缓冲液的配制PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。

以下是总结：母液的配制：0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCl的话，加入 NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）5.7 93.56.55.8 92 85.9 90 106.0 87.7 12.36.1 85 156.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51 496.9 45 557.0 38 627.1 33 677.2 28 727.3 23 777.4 19ml 81ml7.5 16 847.6 13 877.7 10.5 0.57.8 8.5 91.57.9 7 938.0 5.3 94.70.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。

pbs缓冲液各种PH值得配制方法配置方法编辑用去离子水、KH2PO4和na2hpo42h2o按以下步骤制备PBS溶液：（1）制备1/15mol/lkh2po4，即每升水溶解9.078g KH2PO4；(2)配制1/15mol/lna2hpo42h2o，即每升水中溶解11.876克na2hpo42h2o；(3)将18.2%（体积分数）kh2po4溶液和81.8%na2hpo42h2o混合；最终测定pbs液的ph值约为7.4。

磷酸盐缓冲液：取38.0g磷酸二氢钠和5.04g磷酸二氢钠，加水至1000ml。

磷酸盐缓冲液（ph2.0）溶液A：取16.6ml磷酸，加水至1000ml，摇匀。

B液：取71.63g磷酸氢二钠，加水溶解成1000ml。

取72.5毫升液体a和27.5毫升液体B，混合并摇匀。

磷酸盐缓冲液(ph2.5)取磷酸二氢钾100g，加水800ml，用盐酸调节ph至2.5,用水稀释至1000ml。

磷酸盐缓冲液（pH5.0）：取一定量的0.2mol/l磷酸二氢钠溶液，用氢氧化钠试液调节pH值至5.0。

磷酸盐缓冲液(ph5.8)取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,加水使溶解成1000ml，即得。

磷酸盐缓冲液（pH6.5）：取0.68g磷酸二氢钾，加入15.2ml 0.1mol/l氢氧化钠溶液，用水稀释至100ml。

磷酸盐缓冲液(ph6.6)取磷酸二氢钠1.74g、磷酸氢二钠2.7g与氯化钠1.7g，加水使溶解成400ml，即得。

磷酸盐缓冲液（包括胰蛋白酶）（pH 6.8）取6.8g磷酸二氢钾，加水500ml溶解，用0.1mol/l氢氧化钠溶液调节pH至6.8；此外，取胰蛋白酶10g，加入适量水溶解，将两种溶液混合，用水稀释至1000ml。

磷酸盐缓冲液(ph6.8)取0.2mol/l磷酸二氢钾溶液250ml，加0.2mol/l氢氧化钠溶液118ml，用水稀释至1000ml，摇匀，即得。

磷酸盐缓冲液（pH7.0）：取0.68g磷酸二氢钾，加入29.1ml 0.1mol/l氢氧化钠溶液，用水稀释至100ml。