磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

科研实验 2010-04-20 22:25:48 阅读935 评论0 字号：大中小订阅

0.01M PBS

PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L

称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水

0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：

0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。

若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方：

pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）

5.7 93.5

6.5

5.8 92 8

5.9 90 10

6.0 8

7.7 12.3

6.1 85 15

6.2 81.5 18.5

6.3 7

7.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 3

7.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51 49

6.9 45 55

7.0 38 62

7.1 33 67

7.2 28 72

7.3 23 77

7.4 19ml 81ml

7.5 16 84

7.6 13 87

7.7 10.5 90.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7 93

8.0 5.3 94.7

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在

15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PH 7.6 7.4 7.2 7.0

H2O 1000 1000 1000 1000

NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5

Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2

NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4

根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS，如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。

PBS缓冲液

称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml 双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。

十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次~

PH8.0的PBS配方详细

1. NaCl 137mmol/L，KCl

2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：

甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸馏水至1000ml ;