专题06 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。
（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。
（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。
2、稀释涂布平板法计数微生物的注意问题
用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。解题时易出现以下误解：
（1）只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。
（2）得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：
①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。
②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。
可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。
一、选择题
1．在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，下列叙述正确的是（ ）
A．若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置未接种的LB培养基作对照
B．在尿素培养基上长出的菌落一定是尿素分解菌
C．尿素可以作细菌的碳源和氮源
D．如指示剂变红就能准确地认定该菌能分解尿素
2．幽门螺杆菌（含有脲酶）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。下列有关叙述不正确的是（ ）
A．分离纯化幽门螺杆菌时应使用以尿素为唯一氮源的培养基
B．鉴别幽门螺杆菌时应在培养基中加入酚红指示剂和缓冲物质
走近生物技术
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课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
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附录1 生物学实验室的基本安全规则
附录2 生物学实验室中常用的国际单位
附录3 常用培养基配方
附录4 常用的消毒灭菌操作方法
附录5 常用化学抑菌剂
第2课时 微生物的选择培养和计数
新课标
核心素养
1.能够运用生物与环境相适应的观点来理解选择培养的原理。
2.学会通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物。
3.掌握测定微生物数量的常用方法。 1.科学思维：根据微生物的代谢特征配制选择培养基。
2.科学探究：设计实验分离土壤中的尿素分解菌，并对实验结果进行分析与评价。
知识点(一)选择培养基及微生物的选择培养
1．实验室中微生物筛选的原理
人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。
2．选择培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
3．微生物的选择培养(稀释涂布平板法)
(1)系列稀释(梯度稀释)操作：
(2)涂布平板操作：
①取菌液：取0.1 mL菌液滴加到培养基表面。
②涂布器灭菌：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。再将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。
③涂布过程：用涂布器将菌液圴匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。
④培养分离：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37_℃的恒温培养箱中培养1～2 d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。
(1)选择培养基能使特定种类的微生物生长(√)
(2)微生物常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法(√)
(3)取1 mL稀释后的菌液，滴加到培养基表面进行涂布(×)
(4)将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽后，立即进行涂布(×)
1．(科学思维)筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示：
组分 含量
KH2PO4 1.4 g
Na2HPO4 2.1 g
MgSO4·7H2O 0.2 g
葡萄糖 10.0 g
尿素 1.0 g
琼脂 15.0 g
H2O 定容至1 000 mL
(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
基础巩固
1在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做( )
A.鉴别培养基 B.加富培养基
C.选择培养基 D.基础培养基
解析:选择培养基可选择目标微生物,同时抑制或阻止其他微生物生长。
答案:C
2测定土壤中某细菌和真菌数量的过程中,和真菌相比,细菌需要选用稀释倍数更高的稀释液进行平板培养的原因是( )
A.细菌个体小,真菌个体大
B.细菌易稀释,真菌不易稀释
C.在土壤中细菌比真菌多
D.随机的,没有原因
解析:在土壤中,细菌比真菌多,所以为了确保获得菌落数在30~300之间的培养平板,测定细菌数量时一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养,而测定真菌数量时一般选用102、103和104倍的稀释液进行平板培养。
答案:C
3下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( )
A.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水
C.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水
D.KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
解析:分解尿素的细菌能利用尿素,因此选择培养基中应只有尿素这一种氮源。此外,培养基中还应含有碳源。
答案:A
4能够测定样品活菌数的方法是( )
A.稀释涂布平板法
B.直接计数法
C.重量法
D.比浊法
解析:利用稀释涂布平板法能够在不影响细菌生存的情况下将细菌个体从固体培养基上分离出来,并可根据菌落数测定出样品活菌数,故稀释涂布平板法可用于测定样品活菌数。直接计数法计得的是活菌和死菌的总和。
答案:A
5下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是( )
A.微生物培养前,需对培养基进行消毒
B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法
