同步荧光分析法测定生物蛋白质

蛋白质定量分析了解生物体内蛋白质表达的方法蛋白质是生物体内重要的组成成分，它们在维持生命活动以及调节生理功能等方面起着关键作用。

了解生物体内蛋白质的表达水平对于研究生物体的功能与疾病机制具有重要意义。

在实验室中，科学家们常常需要进行蛋白质定量分析来准确测量生物体内蛋白质的表达水平。

本文将介绍几种常见的蛋白质定量方法。

一、BCA（巴氏反应）法BCA法是一种常用的蛋白质定量方法，它基于巴氏反应原理，通过将被测蛋白质样本与BCA试剂反应生成可着色的络合物，然后利用分光光度计测定络合物的吸光度来确定蛋白质浓度。

BCA法具有操作简单、反应时间短、灵敏度高的特点，被广泛应用于生物科学研究领域。

二、Lowry法Lowry法是另一种常用的蛋白质定量方法，它利用蛋白质在碱性条件下与铜离子和碱式碳酸铜反应生成可测量的蓝色复合物，再利用比色法测定复合物的吸光度来确定蛋白质浓度。

Lowry法具有较高的敏感性和较宽的线性范围，在分析蛋白质样品时非常可靠。

三、Bradford法Bradford法是一种相对快速且便于操作的蛋白质定量方法。

该方法利用考马斯亮蓝G250（Coomassie Brilliant Blue G-250）与蛋白质之间的非共价相互作用形成蓝色复合物，再通过比色法来测定蛋白质样品的吸光度。

Bradford法具有灵敏度高、线性范围广等优点，常被用于较快速的蛋白质定量。

四、荧光定量法荧光定量法是一种常用于测定蛋白质浓度的灵敏度高的方法。

该方法利用特定的荧光染料与蛋白质发生非共价相互作用，生成荧光染料-蛋白质复合物，进而通过测量荧光信号的强度来确定蛋白质浓度。

相比于上述几种方法，荧光定量法的线性范围更广，并且对于小样本量也能获得可靠结果。

五、质谱分析法质谱分析法是一种利用质谱技术对蛋白质进行定量分析的方法。

此方法通常结合先进的液相色谱技术与质谱仪器，通过将样品中的蛋白质分离和离子化，进而测量离子化蛋白质的质量-电荷比（m/z），最终得到蛋白质的浓度。

实验题目：测定生物样品中的蛋白质（同步荧光法）1.实验原理：蛋白质是一类重要的生物大分子，它是构成生命体最重要的物质基础之一。

蛋白质的定量测定是临床检验中诊断疾病及检查治疗效果的重要指标。

因此，蛋白质定量测定在化学、生物、医药、食品等各相关学科中已经成为一个非常热门的研究课题。

血清白蛋白是动物和人体血浆中重要的载体蛋白，它能和许多种内源或外源化合物产生作用，承载着将药物运输到达靶点产生药效和储存药物延长药效等重要作用，对研究药物的药效和药理及临床用药有重要意义。

蛋白质测定较常用的经典方法有凯氏定氮法、Lowry法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法b1等，其中，凯氏定氮法因其适用样品广泛，测试结果准确，是常用分析有机化合物含氮量的经典方法之一。

近来又发展了一些新方法如荧光光度法、化学发光法和共振光散射法[等。

同步荧光光谱法自1971年被提出以来，由于其与常规荧光分析法相比具有灵敏度高、选择性好、光谱简化、谱带窄化及可减小散射光影响等优点，已成功地应用于多组分的同时测定以及生物分子的研究中。

2.仪器与试剂：FP-6500荧光分光光度计(日本分光公司)；T-6紫外一可见分光光度计(北京普析通用仪器公司)；PB．10型酸度计(北京赛多利斯仪器系统公司)；BS．110S型电子天平(北京赛多利斯天平公司)；脱氧尿苷1．0×10。

3 mol／L水溶液；人血清白蛋白(HSA，华兰生物工程公司)4．0×10。

5 mol／L水溶液，在冰箱中保存(1～4 oC)；pH 7．4的％s．HCI 缓冲溶液；考马斯亮蓝溶液(溶液中含0．0l％考马斯亮蓝G-250，4．7％乙醇，8．5％磷酸)；0．5 mol／L的NaCl水溶液。

所用试剂均为分析纯，实验用水均为二次去离子水。

3. 实验方法：于10 mL比色管中依次加入：pH 7．4的Tris．HCl缓冲溶液2．0 mL，0．5 mol／L的NaCI溶液2．0 IllL，一定体积的HSA标准溶液，1．0×10。

荧光分析方法在生化分析中的应用研究生化分析是一种研究生物体内基本物质构成和代谢变化的科学分析技术。

随着现代技术的发展和精细化研究的需要，生化分析方法也得到了大力发展。

其中荧光分析方法因其高灵敏度、高选择性、快速分析等优点，在生化分析中得到了广泛的应用。

本文将从荧光分析方法的基本原理、荧光探针的特点以及在生化分析中的应用等方面进行探讨。

一、荧光分析方法基本原理荧光分析法是利用荧光物质和生物样品(如蛋白质、核酸等)之间的配位作用所发生的荧光现象来进行分析的，通俗的说，其基本原理是通过荧光物质与生物样品之间的特异性作用来测定样品中的化合物或生物分子。

荧光分析法基本步骤是：首先选择合适的荧光物质，并将其加入待检测样品中，荧光物质与样品分子发生特异性作用之后，再运用光源进行激发，样品便会发出荧光信号，通过特定光电探测系统测量荧光信号的强度，可间接测定样品中化合物或生物分子含量。

二、荧光探针的特点荧光探针是指具有特定的荧光物质，以及配合体、酶或抗体等的化合物。

在荧光分析中，荧光探针是非常重要的作用体，其特点如下。

1、高选择性：荧光探针对于不同的样品具有高度的选择性，能够针对不同生物分子进行特异性的测定。

2、高灵敏度：用荧光探针进行检测，在低浓度下依然能够发出较强的荧光信号。

相对于传统方法，荧光分析法的灵敏度更高。

3、简便易行：荧光探针的制备方法简单，可通过化学合成、生物发酵等方式得到。

三、荧光分析法在生化分析中的应用1、蛋白质分析荧光分析法可以通过荧光标记的抗体来进行蛋白质的测定，这一方法也被称为荧光免疫测定法。

利用荧光标记抗体与待检测蛋白质发生反应，再进行荧光分析，可用于检测血清中的肿瘤标志物、IgE等疾病相关蛋白质，具有高度的特异性和灵敏度。

2、核酸分析荧光探针可以通过与DNA或RNA结合来测定其含量或特定序列。

由于荧光探针对不同序列的结合能力不同，在核酸分析中具有高度的特异性。

例如，通过利用靶向特定基因序列的探针，可用于测定基因的存在、突变情况等。

荧光光谱法在蛋白质研究中的应用尹燕霞;向本琼;佟丽【摘要】荧光光谱法对研究蛋白质结构及其构象变化是很重要的.描述了荧光光谱的概念、发光机理及特点,介绍了荧光光谱仪的仪器原理和结构,记述了荧光光谱技术在检测蛋白质的构象变化、蛋白质的含量和酶活性方面的具有应用.【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2010(027)002【总页数】5页(P33-36,40)【关键词】荧光光谱法;蛋白质;构象【作者】尹燕霞;向本琼;佟丽【作者单位】北京师范大学,生命科学学院,北京,100875;北京师范大学,生命科学学院,北京,100875;北京师范大学,生命科学学院,北京,100875【正文语种】中文【中图分类】O657.3;TQ937某些物质被一定波长的光照射时,会在较短时间内发射出波长比入射光长的光,这种光称为荧光。

荧光光谱在各方面的应用及有关的方法称为荧光光谱技术。

1.1 荧光发光机制每一个分子具有一系列分离的电子能级,每一电子能级中又有一系列的振动能级和转动能级。

当物质被光照射后,大约在10-15s内光被物质吸收,物质分子获得能量,分子内的电子跃迁到较高能级而变成激发态。

处于激发态的分子很不稳定,它首先通过内转换将部分能量转移给周围分子,回到最低电子激发态振动能级(称为第一级电子激发态振动能级),处于这一能级的分子平均寿命大约是10-8s,如果这时分子通过发射相应的光量子来释放剩余能量而回到基态的各个不同的振动能级,就产生了荧光。

因此,最低第一级电子激发态振动能级是产生荧光的基础。

由于分子发射荧光前已有一部分能量被消耗,所以荧光能量要比物质吸收的光能量小,因而荧光的发射波长总比激发波长长。

1.2 常用荧光参数荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便以及能提供较多的物理参数等优点。

因而被广泛地应用于各个研究领域。

它能提供包括激发谱、发射谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命等许多物理参数,这些参数从各个角度反映分子的构象情况,通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量分析,而且可以推断生物大分子在各种环境下的构象变化,从而阐明蛋白质结构与功能的关系。

分别 为 ０ ０ ３和 ００ ５ ．２ ． ３ ｇ・ｎ ＿ ， ｒＬ 。 相对标准偏差 （ Ｄ）． ～３ ３ ，加标回收率 为 ９ ． ～１ｏ ４ 。该 ＲＳ １ ２ ． ７２ ｏ ．
方法具有简单 、 快速 、 敏度较 高 、 灵 线性范围宽 、 精密度和 回收率较好等优点 。该法可 直接 用于血清样 品 中 蛋 白质总量 的测定 ， 结果令人满意 。 关键 词 人血清 白蛋 白（ Ａ） ＨＳ ；牛血清 白蛋 白（ Ｓ ； －２氰基乙基） Ｂ Ａ） ３（ 一 胞嘧啶 （ Ｅ Ｔ） Ｃ Ｃ ；同步荧 光光谱
法 如 分 光 光 度 法 嘲 、荧 光 光 度 法 、共 振 光 散 射 法 ｌ 、 学 ］ ＿ 化 ９ ］ 发 光 法 和 电化 学 方 法 ＿ １ 。其 中荧 光 光 度 法 ，由 于 具 有 简
１ 实验 部 分
１ １ 试 剂 和 仪 器 ． 人血 清 白蛋 白 （ Ａ， 兰 生 物有 限公 司 ） 牛 血 清 白蛋 ＨＳ 华 和 白（ Ｓ 华 兰 生 物 有 限 公 司 ） 别 配 制 成 ４０ １ 和 ２０ Ｂ Ａ， 分 ．× ０ ．Ｘ
探 针 ３ （一 基 乙 基 ） 嘧 啶 同 步 荧 光 法 测 定 血 清 中 蛋 白质 一 ２氰 胞
崔凤 灵，王俊 丽，崔延瑞 ，渠桂荣 ，卢 雁 ，樊 静
河 南师范大学化学与７
摘
要
在模拟人体生理条件下 ， 基于 ３（一 一２氰基 乙基 ） 胞嘧啶（ Ｅ Ｔ） Ｃ Ｃ 与人血清 白蛋 白（ Ａ） ＨＳ 和牛血清 白蛋
着 调控作用 ，具有抗 菌 、 肿瘤 、抗病毒 等药效 。近来 有许 抗 多抗病毒核 苷类 似 物 已应 用 于临 床 ，如 阿糖 胞苷 、拉 米 夫 定、 阿昔洛韦等抗 病毒药物 。 －２氰基 乙基） 嘧啶 （ Ｅ Ｔ） ３（一 胞 Ｃ Ｃ 是无环核苷类似 物，目前还未见 其与血 清 白蛋 白相互作用 并 作 为分 子探针测定蛋 白质 的文献报道 。 文在模拟人体 生理 本 条件下 ， 利用荧光猝灭光谱研究 了 Ｃ Ｃ Ｅ Ｔ与 ＨＳ Ａ和 Ｂ Ａ的 Ｓ 相互作用 。另外 ， 在相 同实验条件 下 ，随着蛋 白质 浓度 的不 断增加 ，同步荧光强度（Ｓ ） ＩＦ 明显增强 ， 据此建立 了以 Ｃ Ｃ Ｅ Ｔ 为分子 光谱 探针 测定 蛋 白质 的新方 法 。该方 法具 有 操作 简 便、 试剂 不玷污器 壁 、 敏度高 、重现性 好 、线性范 围宽和 灵 测定结果可 靠等优点 ， 可直接用于血清样 品 中蛋 白质 总量的

的同步荧光峰 ： ５ ．７ｎ ／ ２ ｒ） ３０６ ｍ（ ａ＝ ０ｎｎ发生猝灭 ， Ｘ 猝灭程度与 ＢＡ的浓度成正 比， Ｓ 线性范 围为 ６ ４ ／ ～２ ｍＪ Ｉ检测限为 ６ ． ｎ／ Ｌ 测定 方法简单 、 ， ３５ ｇｍ ． 快速 ． 该法用于合成样 品中牛血清 白蛋 白的测定 ， 结果满意 ．
８ ５Ａ Ｑ Ｓ Ｃ与牛血清 白蛋 白的相互作用 的报道 ． 本文建立 了 ８ ５Ａ Ｑ Ｓ Ｃ同步荧光猝灭法测定 牛血清 白蛋 白（ Ｓ ） ＢＡ 的新方法 ． 实验表 明， Ｈ＝ ． 在ｐ ３３ ２的 Ｂｉ ｎＲｂ ｓ 缓冲溶液 中， ｒｔ ．ｏｉ ｏ ｔ ｏ ｎｎ 随着 Ｂ Ａ的加入 ，Ｑ Ｓ Ｃ的同步荧光光谱 Ｓ ８ ５Ａ 峰 ＝３０６ ｍ（ ａ：２ ｍ） 生猝 灭 ， 灭 程度 与 Ｂ Ａ的浓度 成 正 比 ， 性 范 围为 ６ ２ ｇｍ ， ５ ．７ｎ Ａ ０ｎ 发 猝 Ｓ 线 ４ｕ／ Ｌ 检测 限 为 ６ ． ｎ／ Ｌ 测定 方法 简单 、 速 ． 法用 于 合成样 品 中牛血清 白蛋 白的测定 ， 果满 意 ． ３５ ｓｍ ． 快 该 结
２０ｍ Ｈ＝３３ ． Ｌｐ ．２的 ＢＲ溶 液 ， — 用蒸 馏 水稀 至 １ Ｌ刻度线 ， 匀 ， ０ｍ 摇 静置 ５ｒｎ在 Ｌ一５荧光 光谱 仪 上 ， ｉ． Ｓ５ ａ 固定激
发 和发射 波长差 △ 为 ２ ｉ ０Ｂ ｎ进行 同步 荧光 扫描 和测 定 ．
２
江西师范大学学报 （ 自然科学版 ） Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ ＩＮ Ｘ Ｏ ＭＡ ＮＶ Ｒ ＩＹ Ｎ Ｔ Ｒ ＬＳ ＩＮ Ｅ Ｏ Ｒ Ａ ＦＪ Ｇ Ｉ Ｒ ＬＵ ＩＥ ＳＴ （ Ａ Ｕ Ａ ＣＥ Ｃ ） Ａ Ｎ
Ｖｏ ． ４ Ｎｏ． １３ ３ Ｍ ａ ０１ ｙ２ ０
关键 词 ： ５Ａ ； ８ Ｓ Ｃ牛血清白蛋 白； Ｑ 同步荧光猝灭

收稿日期:2000-02-18作者简介:石　燕(1964-),女,副教授. 文章编号:1006-0464(2000)03-0282-04牛血清白蛋白的同步荧光分析法石　燕1　鄢　远2　黄坚锋2(南昌大学1.食品科学系;2.化学系,江西南昌　330047)摘　要:建立了用染料麦塔喇红固定波长同步荧光分析法测定牛血清白蛋白的新方法,实验结果表明,以麦塔喇红为荧光探针,用同步荧光分析法测定蛋白质方法简便,反应速度快,灵敏度高,线性范围为0～4μg /mL ,检测限为66.0ng /mL 。

相对标准差(n =8)为0.67。

关键词:麦塔喇红;蛋白质;同步荧光分析法中图分类号:O657.3 文献标识码:A蛋白质中研究得较多的是白蛋白,白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质,在人体内起着重要的储存和输运作用〔1〕。

因此对蛋白质的定量分析具有十分重要的意义。

自1971年同步荧光光谱法被提出以来,由于其具有灵敏度高,选择性好,谱带简化及可减小散射光影响等优点,已成功地应用于多组分的同时测定〔2〕以及生物分子的研究中〔3〕。

目前,临床上测定蛋白质多采用染料结合法,而用同步荧光分析法鲜有报道。

麦塔喇红(以下简称MR )是一种发荧光的碱性染料,蛋白质能与其发生作用,使其荧光发生猝灭,其荧光猝灭程度在一定的范围内呈现良好的线形关系。

但是,如果用于蛋白质的测定,由于其stokes 位移(λex /λem =540nm /556nm )很小,散射光会对其产生影响。

因此,我们采用同步荧光分析法可减小由上述因素带来的误差。

实验结果表明,以麦塔喇红为荧光探针,用同步荧光分析法测定牛血清白蛋白(以下简称BSA )方法简便快速,灵敏度也较高。

1　实验方法Hitachi F -3010荧光分光光度计(日本日立),pH s -2c 型酸度计(上海雷磁仪器厂),BSA 购自华美公司,以50mmol /L NaCl 水溶液配制。

M R (分析纯)用水配制。

测定 了大鼠尾静 脉 注射模 型 药物后血 浆 中药物 浓度 随时 间 的 变化 ． 系统研 究 了
样 品 处理 、 试条 件 等 一 系列 因素 对测 试 结果 的影 响 ， 立 了一 种 简 单有 效 的 测 建 测定 生物体 内的微 量外 源性 蛋 白质 的方 法 ， 并与 酶联 免 疫 吸 附 法测 定 结果进 行
收 稿 日期 ：０ ００ —１ 修 回 日期 ：０ ００ —５通 讯 联 系 人 ： 云 华 ， － ｉ ｙ ｇｏ ｍａｌｉｃａ． ｌ ２ １—５１ ： ２ １—５２． 高 Ｅｍａ ： ｈ ａ＠ ｌ ｉ ｐ． ｃｅ ． ｌ 作 者 简 介 ： 光 炯 （９ ３） 博 士 研究 生 ， 覃 １８ 一 ， 主要 从 事 药 学 分 析 研 究 ， － ｉ ｇｑ ＠ ｙｈ ｏ ｃｎ． ｎ Ｅ ｍａｌ ｊｉ ： ｎ ａｏ ．ｏ ３ｃ ．
电子 有 限公 司） ＥＡ ＹＰ ｒ Ｆ超 纯 水 仪 （ 国 Ｂ ｒ ｓｅ ； Ｓ ｕ ｅＬ 美 ａｎ ｔｄ公 司 ） ；ＴＧＬ １ Ｂ高 速 离 心 机 ＿６
（ 上海 安亭 科学 仪器 厂 ） ． 试剂 ： 异硫 氰 酸荧 光素标 记 牛血 清 白蛋 白（ Ｉ －Ｓ 标 记 比 ＭＦｃ：ＭＢ 一 １７ ， ＦＴＣＢ Ａ， 丌 ｓ Ａ ． ５
３ ５４
第 ５ 期
覃光炯等 ：同步荧光法测定 大鼠血浆中牛血清 白蛋 白的研究
３５ ５
拟建 立 一种快 速 、 敏的 测定 实 验 动 物体 内蛋 白 和多 肽 类 药 物 血 药 浓度 的 分 析方 法 ． 灵 采
用异 硫氰 酸标 记 的牛血 清 白蛋 白（ Ｉ － Ｓ 为模 型药 物 ， 过对 样 品处理 、 Ｆ ＴＣ Ｂ Ａ） 通 测试 方 法等

４ （ ｅｈ ｔｉ ｍ ｔｙｌ ｏ）ｂ ａ ｏ ｃ ａ ｉ （ ＹＭ ＢＡ ） ｈ ｕｔｎ ｉ ｃｄ Ｐ
２ 实 验 部 分
２ １ 仪 器 与 试 剂 ．
Ｆ 一５ ０荧光分 光光度 计 （ Ｐ６ ０ 日本分 光 公 司 ） Ｂ 一 １Ｓ型 电子天 平 （ 京赛 多 利 斯 天平 有 限 公 司 ） ； Ｓ １０ 北 ； Ｐ 一０型酸度计 （ Ｂ１ 北京赛 多利 斯仪器 系统有 限公 司） 。
第 ３ ９卷 ２ １ 年 ５月 ０１
分 析 化 学 （Ｅ Ｆ ＮＸＩＨＵＡＸＵＥ） 研 究 简 报
Ｃｈ ｎ ｓ ｏ ｒ ｌｏｆＡｎａ ｙ ｉ ａ ｅ ｓｒ ｉ ｅ ｅ Ｊ ｕ ｎａ ｌ ｔｃ ｌ Ｃｈ ｍｉ ｔｙ
第 ５期
７８ ７２ ２ ～ ３
Ｎ一６嘌 呤 ）蛋氨 酸探 针测 定生 物样 品 中蛋 白质 含 量 （一 一
２ １－ ６０ ０ ００ －６收 稿 ； ０ ０ ¨一 ９ 受 ２ １－ ２ 接 本 文 系 国 家 自然 科 学 基 金 （ ． ９ ０ ９ ） Ｎｏ ０ ７ ６ ６ 资助 项 目 ３ Ｅ ｍ ｉ ｆｎ ｌ ｇｕ＠ ｈ ｔ ｉｃ ｒ ａｌ ｅ ｇｉ ｃ ｉ ｏｍａ ｏ ： ｎ ｌ ｎ
与经 典 的 考 马 斯亮 蓝法 一 致 。
关 键 词 Ｎ （ 一 －６ 嘌呤 ）蛋 氨酸 （ Ｙ Ａ） Ｐ ＭＢ ；人 血 清 白蛋 白 （ Ａ） ＨＳ ；同步 荧光 光 谱 ；三 维荧 光
１ 引 言
蛋 白质是 人体 中一类重要 的生 物大 分子 。血 清 白蛋 白是 血浆 中含量 最 丰富 的蛋 白质 ， 多 种 内源 是
ＨＮ
与 机 体 的 氧 化 还 原 反 应 ， 现 其 抗 氧 化 、 毒 作 用 。 它 参 与 体 实 抗

测定蛋白质含量的方法和原理蛋白质是生物体内最为重要的有机分子之一，对于了解生物体的结构和功能至关重要。

因此，准确、精确地测定蛋白质含量是生物化学研究中的关键一步。

本文将介绍常用的测定蛋白质含量的方法和其原理。

一、低里德伯法（Lowry法）低里德伯法是测定蛋白质含量的常用方法之一。

其原理基于酚在碱性条件下与蛋白质发生反应，在存在重铬酸钾的条件下生成一种带有吸收峰的蓝色化合物。

这种蓝色化合物在750 nm波长处有最大的吸光度，其吸光度与蛋白质含量呈线性关系。

二、比色法比色法是测定蛋白质含量的常用方法之一。

常用的比色剂有布拉德福法和加伦氏法。

布拉德福法主要原理是根据蛋白质中含有的酪氨酸、酪氨酸衍生物等组分在碱性条件下与染料结合，形成有色产物，利用比色计测定产物的吸光度从而测定蛋白质的含量。

三、BCA法BCA法是一种基于铜离子的氧化还原反应的方法。

其原理是在碱性条件下，蛋白质中的蛋白质-联没有的二瓣基色团（BCA）与四氢呋喃（THF）结合，生成紫色的螯合物。

这种紫色螯合物的吸光度与蛋白质的含量成正比，可以通过比色计测定吸光度值来确定蛋白质含量。

四、荧光法荧光法是一种基于蛋白质与荧光染料之间的相互作用的测定方法。

常用的荧光染料有吖啶橙、铜铁磺胺二异硫氰酸盐（Ferrozine）等。

这些荧光染料在特定的pH值和溶液中与蛋白质发生作用，产生荧光信号。

利用荧光光谱仪测定荧光强度，通过标准曲线得出蛋白质的含量。

五、生物传感器法生物传感器法是利用生物传感器对蛋白质的特异性识别和反应进行测定的方法。

常用的生物传感器包括酶传感器、抗体传感器等。

这些传感器可以通过与蛋白质结合形成复合物或发生反应，产生信号。

利用信号的强度可以测定蛋白质的含量。

六、尿素与氨基酸分析法尿素与氨基酸分析法是通过测定蛋白质降解产生的尿素和游离氨基酸来推测蛋白质的含量。

该方法基于蛋白质降解后，其氨基酸经氧化反应生成尿素，通过检测尿素或游离氨基酸的浓度来间接测定蛋白质含量。

蛋白质互作网络的建立及分析方法蛋白质是生命体中最基本的分子之一，它们不仅构成生物机体的骨架和酶系统，还参与多种生命活动，如信号传导、细胞分化和凋亡等。

蛋白质之间的相互作用是生命活动的基础，构成了蛋白质互作网络。

蛋白质互作网络的建立和分析方法是蛋白质组学研究领域的重要课题。

一、蛋白质互作网络的建立方法蛋白质互作网络的建立有多种方法，包括基于结构、功能、细胞生物学和生物信息学等方面。

其中，生物信息学方法是最常用的方法之一，可以利用大量的蛋白质相互作用数据来建立蛋白质互作网络。

1. Yeast two-hybrid系统酵母双杂交系统是一种常用的蛋白质相互作用筛选技术。

该技术基于酵母细胞中的转录因子相互作用原理，将兴趣蛋白与感受器部位重组，通过观察启动子的活性来判断两个蛋白是否相互作用。

这种方法可以同时筛选出数千对蛋白质的相互作用关系，是一种高通量的蛋白质互作网络建立方法。

2. 质谱法质谱法是一种直接测定蛋白质和多肽质量的技术，可以用于鉴定和定量蛋白质之间的相互作用关系。

当两个蛋白质相互作用时，它们会形成一个稳定的复合物。

利用质谱法可以分离并鉴定这些复合物中的蛋白质成分，以建立蛋白质互作网络。

3. 同步荧光分析同步荧光分析是一种高通量的蛋白质相互作用筛选技术，通过将目标蛋白标记为荧光染料，然后在不同时间点复合到其他蛋白质上进行测量，来研究蛋白质相互作用。

这种方法可以同时筛选出大量蛋白质互作关系，是一种适用于筛选蛋白质互作网络的高效方法。

二、蛋白质互作网络的分析方法建立蛋白质互作网络后，需要进行网络分析，来探究网络内部蛋白质相互作用的关系，揭示网络特征和功能。

1. 网络拓扑分析网络拓扑分析是研究蛋白质互作网络结构和特征的方法。

常用的指标包括度、中心性、聚类系数、群落分析等。

网络度是指节点与其他节点连接的数目，是一个节点在网络中的重要性指标。

网络中心性则是衡量节点在网络中的重要性，包括介数中心性、紧密中心性、特征向量中心性等。

(2) 重原子同晶衍生物:
把蛋白晶体 浸在重原子（Pt、
Au、Hg、Pb等）缓冲液中，使
重原子进入到蛋白晶体中 。
R r
(3) X-射线衍射及数据旳搜集（衍射点旳亮度、位置等） (4) 衍射数据旳分析（晶胞体积、构造振幅、衍射相角）
从而绘制电子云密度图
(5) 蛋白构造解析和校正: 密度大旳地方即原子所在部位
原理: 自旋量子数I≠0旳原子核可旋转并带电，所以而产
生磁矩 ()，在外加电场作用下沿磁场方向取向，同 步发生能级分裂（占有能级数为2I+1），相邻能级能 量差都是△E 。 当能量为△E=h电磁波经过时，低 能核可吸收电磁波而产生跃迁—— 核磁共振
NMR谱与分子构造旳关系：
▪ 化学位移 : 电子云 → 感生磁场 →对核形成屏蔽 因为电子云产生旳感生磁场旳屏蔽作用，引起共振时
▪ 量子产率（量）： Q = 发射旳荧光光子数
吸收旳光子数
（三பைடு நூலகம் 圆二色谱(CD)
原理:
偏振面：电场矢量旳平面。
平面偏振光（ plane polarized light )：
仅在固定方向上有振动旳光。
圆偏振光：两个电场矢量相互垂直、位相相差1/4旳平面
偏振光加成旳光，电场矢量旳尖端沿螺旋线迈进，从光旳
▪ NMR类型： 1H-NMR；13C-NMR等 一维谱: 吸收峰强度对一种频率变量作图 多维谱（二维、三维）
▪ NMR技术在测定生物大分子构造方面旳优点: ① 不破坏生物分子旳构造 ② 能在溶液环境下测定大分子空间构造，测定构造更 接近生物分子旳天然状态 ③ 能研究大分子内部旳构象动力学 ④ 辨别率较高，是测定溶液中大分子构象旳最佳旳方 法，与X-光晶体衍射法互为补充

同步荧光光谱法测定蛋白质崔凤灵;张强斋;渠桂荣;王丽;王俊丽;卢雁【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2009(045)002【摘要】在模拟生理条件下,由于核苷类药物中间体氰基乙基尿嘧啶(CEU)与血清白蛋白相互作用,血清白蛋白的内源荧光发生特异性变化,且体系的同步荧光强度和溶液中血清白蛋白的浓度呈线性关系,据此提出以氰基乙基尿嘧啶为探针,用固定波长同步荧光光谱法测定人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)的方法.在最佳试验条件下,体系的荧光强度与HSA和BSA的质量浓度分别在1.38～496.2 mg·L-1和1.56～624.0 mg·L-1范围内呈线性关系,检出限(3S/N)分别为0.045 mg·L-1和0.051 mg·L-1.方法应用于人血清及牛血清中HSA及BSA的测定,并以此样品为基体分别加入HSA及BSA标准溶液作回收试验,测得回收率在95.1%～102.5%之间,相对标准偏差(n=6)在0.43%～2.72%之间.【总页数】4页(P144-147)【作者】崔凤灵;张强斋;渠桂荣;王丽;王俊丽;卢雁【作者单位】河南省环境污染控制重点实验室河南师范大学,化学与环境科学学院,新乡,453007;河南省环境污染控制重点实验室河南师范大学,化学与环境科学学院,新乡,453007;河南省环境污染控制重点实验室河南师范大学,化学与环境科学学院,新乡,453007;河南省环境污染控制重点实验室河南师范大学,化学与环境科学学院,新乡,453007;河南省环境污染控制重点实验室河南师范大学,化学与环境科学学院,新乡,453007;河南省环境污染控制重点实验室河南师范大学,化学与环境科学学院,新乡,453007【正文语种】中文【中图分类】O657.3【相关文献】1.同步荧光光谱法测定滁菊中氨基酸总量 [J], 吴霖生;潘升玲;孙艳辉;汪全炉2.同步荧光光谱法测定环境水样中的多环芳烃 [J], 何立芳;章汝平;章丽燕3.恒波长同步荧光光谱法测定人体尿液中氯波必利的研究 [J], 罗娟娟;马红燕;马莹;辛建伟;王浩4.同步荧光光谱法研究明胶蛋白质与铜(II)的相互作用 [J], 唐世华5.同步荧光光谱法测定水中痕量萘和菲 [J], 宋广清;席宏波;周岳溪;李杰;赵京田;崔俊华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

牛血清白蛋白的同步荧光分析法
石燕;鄢远;黄坚锋
【期刊名称】《南昌大学学报（理科版）》
【年(卷),期】2000(024)003
【摘要】建立了用染料麦塔喇红固定波长同步荧光分析法测定牛血清白蛋白的新方法,实验结果表明,以麦塔喇红为荧光探针,用同步荧光分析法测定蛋白质方法简便,反应速度快,灵敏度高,线性范围为0～4μg/mL,检测限为66.0ng/mL.相对标准差(n=8)为0.67.
【总页数】4页(P282-285)
【作者】石燕;鄢远;黄坚锋
【作者单位】南昌大学食品科学与工程系,江西,南昌,330047;南昌大学化学系,江西,南昌,330047;南昌大学化学系,江西,南昌,330047
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3
【相关文献】
1.同步荧光光谱法研究丹参素-牛血清白蛋白体系的光增强效应 [J], 张曦;寇自农;石羽佳;朱靖博
2.荧光各向异性结合同步荧光法研究1-羟基芘与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 张静;陈薇晓;张唯;段滢;朱玉秀;朱亚先;张勇
3.同步荧光光谱法结合分子对接研究金雀花碱与牛血清白蛋白间相互作用 [J], 吴雨杭;韩忠保;马嘉泽;何妍;刘丽艳;辛士刚;于湛
4.维生素B5与牛血清白蛋白相互作用的同步荧光光谱和紫外差光谱研究 [J], 王志军;梁瑞瑞;王慧慧;雷海英
5.同步荧光光谱法研究叶酸与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 王珊;高奕红;高丰琴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

荧光分析法检测原理及应用荧光分析是一种应用广泛的分析技术，其原理是利用物质在激发光作用下发生荧光现象，通过测量荧光强度来确定物质的存在、浓度和质量。

荧光分析技术具有灵敏度高、选择性强、操作简便、可在线监测等优点，因此在化学、生物、环境等领域得到广泛应用。

荧光分析的基本原理是荧光的激发和发射。

荧光是电子从高能级跃迁到低能级时发生的一种发光现象，这个过程与吸收光的波长、激发态的能级、自旋、分子振动和环境因素有关。

荧光物质受到激发光后会发生激发态跃迁，跃迁的能量损失会通过发射光发出，发出的光的波长和强度与荧光物质的种类、浓度、环境和仪器参数等因素有关。

荧光分析法通常有多种变体，如直接荧光法、间接荧光法、竞争性荧光法、荧光共振能量转移法（FRET）和生物传感等。

在直接荧光法中，即使没有其他化学试剂参与反应，荧光分析也可以直接检测分析物的荧光强度。

对于一些无法进行直接荧光检测的分析物质，可以使用间接荧光法或竞争性荧光法进行检测。

在这些方法中，某些分析物会与其他的分析物或化学试剂发生作用，从而影响荧光强度或比例。

利用这些作用，可间接地检测分析物的浓度。

荧光共振能量转移法（FRET）是一种新兴的荧光分析方法。

该方法利用两种染料之间的荧光共振能量传输来测量分析物质的存在和浓度。

该方法的一个优点是，它可以在小颗粒中检测小分子，因此被广泛应用于药物筛选、细胞检测和酶学研究等领域。

荧光分析技术在许多领域得到广泛应用。

生物分析方面，荧光法可用于检测DNA、蛋白质、抗体等生物分子。

在环境监测方面，荧光法可用于检测重金属、农药、水中有害化学物质等污染物质。

在医学领域，荧光法可用于检测癌症、病毒、细胞增殖和分化等生理过程。

总之，荧光分析法是一种非常有用和广泛应用的分析技术，其原理和方法对于许多不同领域的化学、生物和环境应用都有很大的意义。

随着科学技术的不断进步，人们可以期待荧光分析法在未来发挥更加重要和创新的作用。

荧光分析法检测原理及应用举例荧光分析法是一种常用的分析方法，根据样品在受到激发光后所发射出的荧光信号来进行分析。

荧光分析法具有灵敏度高、选择性好、分析快速等优点，适用于各种领域的分析和检测。

本文将详细介绍荧光分析法的检测原理，并给出几个应用举例。

荧光分析法的原理主要包括荧光激发和荧光发射两个过程。

在荧光激发过程中，样品受到吸收光束的照射后，其中的一些分子受到激发，处于高激发能级。

在随后的荧光发射过程中，这些激发分子会从高激发能级跃迁到低激发能级，释放出能量的同时发出特定波长的荧光光谱。

通过测量样品发出的荧光光谱，可以确定样品的成分以及其含量。

以下是几个荧光分析法的应用举例：1.荧光酶标技术：荧光酶标技术是生物荧光分析法中的一种重要应用。

通过将荧光标记在特定的抗体、蛋白质或核酸上，可以实现对患者样品中特定生物分子的检测。

例如，在临床诊断领域中，可以利用荧光酶标技术检测病原体的存在，并通过荧光信号的强弱来确定病菌的数量。

2.荧光染料的分析：荧光染料广泛应用于材料科学、生命科学等领域中的分析和检测。

例如，在环境监测中，可以使用荧光染料来检测水体或土壤中的有害物质，如重金属离子、有机污染物等。

荧光染料在分析过程中的发光特性可以提供非常灵敏和选择性的检测结果。

3.荧光显微镜技术：荧光显微镜技术是生命科学研究中常用的一种技术手段。

通过给样品标记荧光探针，可以在显微镜下观察样品的荧光信号来研究细胞结构、蛋白质相互作用等生物过程。

荧光显微镜技术还可以用于检测细菌感染、癌细胞等疾病的诊断和研究。

4.荧光透射谱分析：荧光透射谱分析是一种常用的荧光分析技术，可以用于分析各种化合物的组成和浓度。

例如，在食品安全领域，可以通过荧光透射谱分析来检测食品中的有害添加物，如亚硝酸盐、农药残留等。

通过测量样品在特定波长下的荧光强度，可以快速、准确地确定样品中有害物质的含量。

除了以上几个应用举例外，荧光分析法还可以用于环境监测、药物研发、生物学研究等领域。

荧光分析法的应用荧光分析法是一种常用的光谱分析方法，通过检测样品中的荧光信号来定性和定量分析物质的存在和浓度。

它具有灵敏度高、快速、准确度高、非破坏性等优点，广泛应用于生物化学、环境保护、食品安全、材料科学等领域。

本文将详细介绍荧光分析法的应用。

一、生物化学领域1.蛋白质分析：荧光分析法可以通过荧光染料标记蛋白质，然后通过测定荧光强度来定量分析蛋白质的含量。

这对于研究蛋白质的表达、纯化和结构等具有重要意义。

2.DNA分析：荧光分析法可以通过荧光探针与DNA发生特异性结合，并通过测定荧光强度来检测DNA序列突变、基因表达和DNA杂交等。

这对于基因诊断、基因工程和分子生物学研究具有重要意义。

二、环境保护领域1.水质监测：荧光分析法可以通过荧光指示剂来监测水中的污染物，如重金属离子、有机物和荧光增白剂等。

这对于水环境的监测和保护具有重要意义。

2.大气监测：荧光分析法可以通过荧光探针来检测大气中的污染物，如挥发性有机物、大气颗粒物和气象污染等。

这对于大气环境的监测和治理具有重要意义。

三、食品安全领域1.农药残留检测：荧光分析法可以通过荧光染料和荧光探针来检测食品中的农药残留，如杀虫剂、除草剂和杀菌剂等。

这对于保障食品安全具有重要意义。

2.食品质量检测：荧光分析法可以通过荧光指示剂来测定食品中的营养成分和添加剂，如维生素、氨基酸和食品着色剂等。

这对于评价食品的品质和安全性具有重要意义。

四、材料科学领域1.荧光探针：荧光分析法可以通过荧光探针来研究材料的物理和化学性质，如表面活性剂、功能材料和纳米材料等。

这对于材料的制备和性能研究具有重要意义。

2.荧光显微镜：荧光分析法可以通过荧光探针和荧光显微镜来观察材料的形貌和结构，如细胞、分子和纳米颗粒等。

这对于材料的表征和应用具有重要意义。

总结：荧光分析法是一种广泛应用于生物化学、环境保护、食品安全和材料科学等领域的光谱分析方法。

它具有灵敏度高、快速、准确度高、非破坏性等优点，可以用于定性和定量分析物质的存在和浓度。