利用基因芯片准确检测乙肝病毒变异基因

---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------慢性乙肝研究论文【关键词】,肝炎Observationoftherapeuticefficacyoflamivudinecombinedwithalp hainterferoninpatientswithchronichepatitisB【Abstract】AIM:Tostudythetherapeuticefficacyoflamivudinecombinedwithal phainterferoninpatientswithchronichepatitisBandtofindanewap proachtocontrolthedisease.METHODS:EightychronichepatitisBpa tientswithHBVDNAandHBeAgpositiveweredividedintotwogroups:LA MIFNgrouptreatedwithlamivudineandalphainterferonfor12months andLAMgrouptreatedwithlamivudinealonefor12months.RESULTS:Th etherapeuticeffectonYMDDmutationinthegroupwithlamivudineand IFNα1bwassignificantlybetterthanthatinthegroupwithlamivudi nealone（P0.01）.CONCLUSION:Lamivudinecombinedwithalphainterferonh asbettertherapeuticefficacyinpatientswithchronichepatitisB.【Keywords】hepatitisB,chronic;treatment；lamivudine;interferon【摘要】目的：了解拉米夫定(LAM)和干扰素对慢性乙肝的疗效，为慢性乙肝的治疗开辟一条新的途径.方法：将HBVDNA和HBeAg均阳性的慢性乙肝患者80例，1∶1随机分为两组，即治疗组和对照组.其中治疗组(LAM干扰素)为：INFα1b，隔日5MU,im，及LAM100mg/d；对照组(LAM组)为LAM100mg/d，口服，共1 / 612mo.结果：LAM和干扰素（治疗组）对YMDD变异株的治疗作用初步结果明显高于LAM单独作用（对照组）（P＜0.01）.结论：LAM和干扰素联合治疗慢性乙肝的初步结果显示出有较好的疗效，为临床进一步验证提供了科学依据.【关键词】肝炎，乙型，慢性；治疗；拉米夫定；干扰素0引言拉米夫定(LAM)通过特异性的阻断嗜肝病毒DNA 的合成，显著抑制HBV的复制，目前已广泛的应用于乙肝的治疗［1］，长期应用LAM其耐药突变的发生率为16%~43%.突变发生后一方面降低疗效，另一方面使肝病活动，甚至诱发重症肝炎，为此我们采用了LAM与干扰素联合对抗乙肝病毒变异进行了临床试验，取得了明显的治疗效果.1对象和方法1.1对象200202/200407住院的HBeAg和HBVDNA阳性，丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常，均经过LAM正规的治疗12~18mo的患者80(男48，女32)例,年龄20~52岁.按1∶1的比例随机分为2组，其中LAM与干扰素共用为联合治疗组，LAM单独为对照组.联合治疗组：INFα1b，隔日5MU，im,及LAM100mg/d；LAM 组LAM100mg/d，口服，共12mo，慢性乙肝的诊断标准符合2000年西安全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案标准［2］.1.2方法①肝功能用美国Beckman全自动生化仪及其配套的试剂检测；判定标准；治疗后ALT降至正常参考值为显效，有所下降为有效，无下降者为无效.②HBVM用酶联免疫法试剂由美国Abbott公司提供；e抗原的判定：e抗原转阴，产生e抗体，若e抗原转阴，但没有产生抗体表示基因突变.③HBVDNA用荧光定量聚合酶链反应PCR检测，由广州达安基因诊断中心提供仪器和试剂盒，截止值为---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 103copies/mL；判定标准：HBVDNA转阴的标准是0.001PG/mL，约等于100copies/mL.④YMDD变异用基因芯片检测［3，4］，以HBV序列（GenBank4490408）为模板设计以下引物：上游引物：5′GATGTGTCTGCGGCGT3′，下游引物：5′GTAAACTGAGCCAGGAGAAA3′，在50μL含20mmol/LTrisHCl,50mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdATP,dTTP 和Cy5dCTP(英国Amersham公司产品)，100mmol/L引物、2UTaq酶的体系中，经95℃5min预变性，以94℃30s,50℃30s,72℃30s循环30次，扩增并标记长度为308bp的待测片段.扩增产物经乙醇沉淀纯化，55℃杂交30min,45℃洗两次，晾干扫描，计算判读按每块芯片检测4位点计可测得基因突变数同时可获得确切的突变类型.⑤肝脏组织病理的变化用肝穿刺活检的方法对肝脏的炎症程度进行检测，每个受试对象都接受2次肝穿.用放免法对肝纤维化程度进行检测.统计学处理：用SPSS10.0软件，记数资料用χ2检验，计量资料用成组t检验.2结果2.1均衡性检验两组在性别、年龄、病程、ALT、乙肝病毒e抗原和乙肝病毒定量方面无明显差异（P＞0.05）.LAM组：40（男25，女15）例，年龄（36.26±1.25）岁，病程（12.20±1.61）mo,ALT （86.07±1.26）,乙肝病毒e抗原阳性（40例）、乙肝病毒定量阳性（40例）；联合治疗组：40（男23，女17）例，年龄（36.18±1.75）岁，病程（12.01±1.23）mo,ALT（87.25±1.34）,为乙肝病毒e抗原阳性（40例）、乙肝病毒定量阳性（40例）.2.2治疗后在ALT，HBeAg，3 / 6HBVDNA的变化联合治疗组ALT复常率、HBeAg和HBVDNA转阴率明显的高于LAM组（P0.01,Tab1).表1两组治疗后ALT、乙肝病毒e抗原、乙肝病毒定量方面的比较（略）2.3肝脏组织病理的变化治疗后两组肝脏组织病理的改善，LAM组为45.0%(18/40);联合治疗组为87.5%(35/40)，联合治疗组肝脏组织病理的改善明显高于LAM组（P ＜0.01）.2.4对治疗后基因突变的检测在常规PCR检测中，发现LAM 抗病毒作用在短期达到较好效果，但随着抗病毒时间的延长，治疗效果反而有减弱的现象，为此用基因芯片技术对有关标本进行了进一步的检测，观察HBVYMDD变异，LAM组基因突变数为80%(32/40)，联合治疗组基因突变数为37.5%(15/40)，LAM组突变率明显高于联合治疗组（χ2=14.907，P＜0.01）.3讨论虽然LAM是目前治疗乙肝的主要药物，它可迅速抑制HBV的复制，在短时间间内使HBVDNA转阴，肝功能和肝脏组织学得到改善［5］，但是在其抗病毒治疗过程中可出现HBVYMDD变异，其突变率高达16%~43%［6，7］，给治疗带来许多困难，是继续用药还是终止用药，一直是临床工作争论的焦点，现在还无定论.体外实验证明，YMDD突变发生后LAM的用量提高105~106倍［8］，应该停药或更换其他的药物治疗.由于缺乏相应的临床资料也有专家认为；体外实验并不能说明体内LAM的效果，因此即使出现耐药，还应继续用药.针对这一临床问题，我们采用了LAM联合干扰素对乙肝病毒变异进行了正规的治疗，通过治疗临床观察表明：LAM和干扰素联合治疗可显著的减少YMDD变异的产生，能有效的抑制野生株并能控制突变株的发生已获得满意的治疗效果.可能因乙肝的发病机制是---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 持续的胞内病毒复制和细胞介导的免疫损伤，所以联合治疗仍然是慢性乙肝抗病毒治疗的主要方向，即在抗病毒治疗的同时进行免疫调节治疗.治疗后可使血清转换率、肝脏的炎症及纤维化程度得到了明显的改善，也使HBVYMDD变异出现了抑制或是延缓的发生.LAM联合干扰素对乙肝病毒变异应该是理想的治疗.【参考文献】［1］YaoGB，WangBE，CuiZY，etal.Arandomizeddoubleblindplacebocontrolledstudyoflamivudi neinthetreatmentofpatientswithchronichepatitisBvirusinfecti on［J］.ChinMed（Engl），1999;12（35）：387-391.［2］中华医学会传染病与寄生虫病学分会.病毒性肝炎防治方案［J］.中华肝脏病杂志，2000;8（6）：324-329.BranchofinfectiousdiseasesandparasitediseasesofChin esemedicinemeeting.Virusnaturehepatitispreventionandcuresch eme［J］.ChinJLabMed,2000;8（6）：324-329.［3］宋家武，林菊生，孔心涓，等.检测拉米夫定耐药基因芯片的制作及其初步应用初探［J］[1][2].中华检验医学杂志，2003;26（15）：1-3，68.SongJW，LinJS，KongXJ，etal.DoingofdetectlamivudinedurablegeneCMOSchipanditsfirste xploringofprinaipiumapplication［J］.ChinJCheckout，2003；26（15）：1-3，68.［4］宋家武，林菊生，孔心涓，等.基因芯片检测拉米夫定致乙型肝炎病毒耐药突变的临床研究［J］.中华肝脏病杂志，5 / 62003；6（9）：361-363.SongJW，LinJS，KongXJ，mivudineinwhichgeneCMOSchipdetectresultinclinicresea rchofhepatitisBvirusdurabledruggenemutation［J］.ChinJHepatol，2003；6（9）：361-363.［5］姚国弼，催振宇，姚集鲁，等.国产拉米夫定治疗2200例慢性乙型肝炎的IV期临床试验［J］.中华肝脏病杂志，2003；11（6）：103-108.YaoGB，CuiZY，YaoJL，etal.IVperiodclinicTestof2200caseschronichepatitisBinwhichl amivudinemadeinChinatreating［J］.ChinJHepatol，2003；11（6）：103-108.［6］ZoulimF.TherapyofchronichepatitisBvirusinfection；inhibitionoftheviralpolymeraseandotherantiviralstrategies ［J］.AntiviralRes，1999；44（26）：1-30.［7］计淼淼，杨敏燕，钱又宏，等.拉米夫定治疗慢性乙型肝炎临床疗效及病毒变异［J］.肝脏，2000；6（18）：75-77.JiMM，YangMY，QianYH，etal.Cliniccurativeeffectandvirusmutationoflamivudinetreati ngchronichepatitisB［J］.Liver，2000;6（18）：75-77.［8］AllenMI，DeslauriersB，AndrewsCW，etal.Identificationandcharacterizationofmutationinhepatitis Bvirusresistanttolamivudine［J］.Hepatology，1998；27（28）：1670-1677。

乙肝病毒检测在临床应用的研究进展陈善昌【摘要】固相放射免疫法、反向被动血凝改良一步法、酶联免疫吸附法、胶体金免疫层析、实验微粒子酶免疫分析、化学发光免疫法、时间分辨荧光免疫法、核酸探针法、多聚酶链式反应、基因芯片技术方法对检测乙型肝炎有一定的优越性,可为临床诊断、用药疗效等提供准确可靠的实验依据.笔者对相关研究进展进行综述.【期刊名称】《华夏医学》【年(卷),期】2016(029)004【总页数】5页(P166-170)【关键词】乙型肝炎病毒;酶联免疫吸附法;核酸探针法【作者】陈善昌【作者单位】贺州市人民医院检验科,广西贺州 542800【正文语种】中文【中图分类】R446.112;R512.621965年Blumberg发现”澳大利亚抗原”，随后确定为乙肝病毒表面抗原(HBsAg)，1970年英国的Dane等在电镜下鉴定了直径为42 nm完整的乙肝病毒颗粒，又称为Dane颗粒，1986年被列入嗜肝DNA病毒科，并阐明了颗粒的HBsAg、HBcAg、HBeAg等成分。

乙肝病毒检测技术经历了20世纪60年代的放射免疫技术（RIA）、20世纪70年代的酶标技术(ELESA)、20世纪80年代化学发光技术（CLIA)、20世纪90年代的时间分辨技术（TRFIA)及现在正在研究的生物芯片技术［1］。

近几年来，随着对乙型肝炎发病机制、HBV感染与复制等研究的深入，发现HBV感染呈世界性分布,许多慢性感染者演变成慢性活动性肝炎、肝硬化、肝癌,严重威胁人类健康。

现就乙肝病毒结构、检测及其在临床上的应用综述如下。

乙肝病毒结构是一个具有外壳和核心两部分完整的乙肝病毒颗粒，直径约42 nm，HBV基因组有一个约3 200 bp小环行DNA结构，双链长度不对称。

外壳厚7～8 nm，由脂质双层和蛋白质组成的囊膜。

核心部分——含DNA和DNA聚合酶（病毒复制所需的酶），DNA分子含有约3 200个核苷酸。

它包括1个长度固定的负链和另一长度不定的正链。

专利名称：乙型肝炎病毒耐多药基因突变检测芯片、试剂盒及方法
专利类型：发明专利
发明人：林希瑾,秦伟,胡守旺,姚铭锋,谢佐福,周晓强
申请号：CN201210175851.0
申请日：20120530
公开号：CN102732640A
公开日：
20121017
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种疾病病原体基因检测技术，尤其涉及一种新型的乙型肝炎病毒耐多药基因突变检测芯片、试剂盒及方法。

本发明技术方案为提供一种乙型肝炎病毒耐多药基因突变检测芯片、试剂盒及方法，包括检测探针和扩增引物等。

本发明具有很好的检出率、特异性和灵敏度。

特别是对HBV敏感野生菌株和耐药突变菌株混合感染的检测灵敏而准确，更有利于慢性HBV感染抗病毒治疗过程的动态监控。

且能够在一次实验中既有效检测HBV野生菌株，又检测其拉米夫定和阿德福韦酯两种耐药突变，对于慢性HBV感染的临床诊疗非常适用。

申请人：泰普生物科学(中国)有限公司
地址：350002 福建省福州市金山工业区金洲北路7号二期7号标准厂房四层
国籍：CN
代理机构：福州市鼓楼区博深专利代理事务所(普通合伙)
代理人：林志峥
更多信息请下载全文后查看。

两种全自动核酸检测系统对乙肝核酸检测性能的比较乙肝病毒（HBV）感染是一种常见的严重传染病，是全球范围内的公共卫生问题。

乙肝核酸检测是诊断和监测乙肝病毒感染的重要手段。

近年来，随着技术的不断发展，出现了许多全自动核酸检测系统。

本文将比较两种全自动核酸检测系统对乙肝核酸检测性能的差异。

第一种全自动核酸检测系统是荧光定量PCR（qPCR）系统。

这种系统利用荧光探针来测量PCR扩增产物的含量。

qPCR具有高灵敏度和高特异性的优势，是目前乙肝核酸检测的标准方法。

它可以精确地定量HBV病毒DNA的含量，从而评估病毒的复制水平。

qPCR还可以检测HBV基因的变异情况，帮助研究乙肝病毒的进化和耐药性。

第二种全自动核酸检测系统是基因芯片技术。

这种技术利用微阵列芯片上固定的探针来检测多个核酸序列。

它具有高通量、高灵敏度和高特异性的特点。

基因芯片技术可以通过一次实验检测多个核酸标志物，不仅可以检测HBV病毒DNA，还可以检测其他乙肝相关基因的表达水平。

这种多目标检测的能力使得基因芯片技术在乙肝的早期诊断和分型上具有潜力。

两种全自动核酸检测系统在乙肝核酸检测性能上存在一些差异。

qPCR系统具有更高的灵敏度。

它可以检测到非常少量的HBV病毒DNA，可以帮助早期诊断乙肝病毒感染。

相比之下，基因芯片技术的灵敏度稍低，可能会错过一些低水平的感染。

两种系统在特异性上也存在差异。

qPCR系统具有非常高的特异性，可以准确区分HBV 和其他相关病毒的核酸序列。

而基因芯片技术可能存在一定的交叉反应，可能会导致一些假阳性结果。

两种系统的成本和操作复杂性也有所不同。

qPCR系统相对简单易用，操作便捷，但成本较高。

而基因芯片技术的成本相对较低，但操作复杂，需要专业技能人员进行操作。

两种全自动核酸检测系统在乙肝核酸检测性能上存在一些差异。

选择适合的系统应根据实际需求和资源情况进行综合考虑。

qPCR系统适用于需要高灵敏度和高特异性的临床实验室，而基因芯片技术适用于大规模筛查和研究领域。

网络信息实用检索技术作业2 中文数据库检索实践一.列出10种中文数据库名称，并简要注明其资源特点：1.中国知网中国知网，是国家知识基础设施（National Knowledge Infrastructure，NKI）的概念，由世界银行于1998年提出。

CNKI工程是以实现全社会知识资源传播共享与增值利用为目标的信息化建设项目，由清华大学、清华同方发起，始建于1999年6月。

在党和国家领导以及教育部、中宣部、科技部、新闻出版总署、国家版权局、国家计委的大力支持下，在全国学术界、教育界、出版界、图书情报界等社会各界的密切配合和清华大学的直接领导下，CNKI 工程集团经过多年努力，采用自主开发并具有国际领先水平的数字图书馆技术，建成了世界上全文信息量规模最大的"CNKI数字图书馆"，并正式启动建设《中国知识资源总库》及CNKI 网格资源共享平台，通过产业化运作，为全社会知识资源高效共享提供最丰富的知识信息资源和最有效的知识传播与数字化学习平台。

2.万方数据库万方数据库是由万方数据公司开发的，涵盖期刊，会议纪要，论文，学术成果，学术会议论文的大型网络数据库。

也是和中国知网齐名的中国专业的学术数据库。

开发公司——万方数据股份有限公司是国内第一家以信息服务为核心的股份制高新技术企业,是在互联网领域,集信息资源产品、信息增值服务和信息处理方案为一体的综合信息服务商。

3.中文科技期刊数据库由专业质检人员对题录文摘数据进行质检（包括标引和录入错误），确保原始文本数据的质量。

考虑到在期刊收录过程中存在缺期情况，公司定期进行刊期统计并作增补，数据完整率达到99%以上。

在主题标引用词基础上，编制了同义词库、同名作者库并定期修订，有助于提高文献检全率。

4.中国医院知识仓库（China Hospital Knowledge Databases，简称CHKD）数据库介绍中国医院知识仓库（China Hospital Knowledge Databases，简称CHKD），是在1997年创办的《中国学术期刊（光盘版）》医药卫生专辑的基础上发展而来，专门针对各级各类医疗卫生机构的信息化、知识化建设而设计的大型全文知识仓库，为CNKI工程的重要知识仓库之一。

基因芯片技术在临床微生物检验中的应用和优势汤桂丽【摘要】The gene chip technology as a kind of frontier biotechnology has the advantages of sensitivity, rapidness and high throughput, and has a wide range of applications in various fields of medicine and clinical microbiological detections. The application and superiority of the gene chip technology in the clinical microbiological detection are briefly reviewed.%基因芯片技术作为一种前沿生物技术，具有灵敏、快速、高通量的优点，在医学的各个领域和临床微生物检验中都有广泛的应用。

该文就基因芯片技术在临床微生物检验中的应用和优势进行了简要综述。

【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】3页(P92-93,94)【关键词】基因芯片技术;临床微生物;应用;优势【作者】汤桂丽【作者单位】中国人民解放军广州军区武汉总医院，湖北武汉 430010【正文语种】中文【中图分类】R446.61基因芯片技术(gene chip technology，GCT)可以准确、快速、及时地诊断感染性疾病的病原体[1-2]，对患者感染性疾病的临床治疗、预后具有重要价值[3-5]。

传统的抗体检测法(antibody detection method)、病原体培养法(pathogen culture method)等，操作烦琐且所需周期较长[6-7]，GCT的出现和成熟为临床微生物的检验提供了有力的技术条件。