当前位置：文档之家 › 最新-自生固氮菌的隔离鉴别 精品

最新-自生固氮菌的隔离鉴别 精品

  • 格式：docx
  • 大小：13.54 KB
  • 文档页数：3

自生固氮菌的隔离鉴别
摘要从非豆科作物根际土壤中分离筛选得到213个在无氮培养基上能良好
生长的菌株，通过酶活测定，从中筛选得到18株固氮能力较强的菌株，并对其
中酶活最高的4株菌株进行了鉴定，结果表明它们属于固氮菌科的不同属。
利用它们可望制成适合于不同农作物生长的生物复合肥。
关键词自生固氮菌；固氮酶；微生物肥料0引言微生物肥料的一些作用和生
态效益是化学肥料所不具备的[1]，施用微生物肥料，能提高土壤肥力，刺激作
物生长和抑制有害微生物的活动，从而达到增产的目的[2]。
此外，生产微生物肥料投资少，可利用农副产品就地取材。
因而，微生物肥料的生产吸引了许多研究者的兴趣。
本文报道从水稻、小麦、玉米和蔬菜等非豆科作物根际土壤中分离得到18
株固氮能力较高的自生固氮菌，并对其中65、72、58、82四株固氮能力最高的
菌株进行了分类鉴定，结果表明它们属于固氮菌科的不同属。
1材料和方法11菌种采集水稻、小麦、玉米和蔬菜等农作物的根际土壤土
样56个，从中分离获得213株在无氮培养基上能良好生长的菌株。
12分离培养基及分离方法121富集培养基蔗糖15，磷酸二氢钾08，硫酸镁
02，氯化钠02，碳酸钙1，质量分数为10的钼酸钠、硼酸、硫酸锰、硫酸亚铁
现配水溶液各1，水1000，为65～70，在250三角瓶中，每瓶分装30，灭菌备
用。
122富集培养方法取3～5土样用50水制成混浊液，吸取5悬浮液装入盛有
30富集培养液的250三角瓶中，100，28℃，培养3～5天后，换新鲜培养基继
续培养，重复4～5次后，稀释分离。
123平板分离培养基在富集培养基中加入2琼脂制成平板分离培养基，灭菌
后，倒入无菌培养皿中备用。
124分离方法取富集培养后的培养液，稀释涂布平板分离培养基。
28℃培养2天后，将在稀释度较大的平板上，生长较大的菌落移入斜面。
培养后，保藏备用。
13固氮酶活性测定131气相色谱法参考文献[3]的方法，略加改变，将2乙
炔气体冲入试管斜面内，塞上无菌橡皮塞，28℃，培养24后，用气相色谱仪测
量固氮酶的活性，每种取4～5个重复，进样量100μ，按以下公式进行计算酶
活。
1=580××××××μ斜面乙烯峰面积;开氏绝对温度=27313实验条件下的
大气压强;乙炔峰面积;实验条件下的温度;绝对大气压强=10132472;=培养时间
=24132微量凯氏定氮法[4]用以下公式计算含氮量2=1-2×14×10001样品滴定
时用去的001标准硫酸溶液毫升数;2空白滴定时用去的001标准硫酸溶液毫升
数;14是1个毫克当量氮的毫克数;发酵液样品毫升数。
2结果和讨论21分离结果从非豆科作物根际土壤中分离得到213个菌株，
用气相色谱法和微量凯氏定氮法测定它们的固氮酶活性。
结果发现，34株没有固氮能力含氮量10，其中65、72、58和82四株菌产
酶能力最高。
表1对固氮能力较强的18株菌株的酶活测定结果进行了统计。
表1固氮酶活力测定结果18株菌株表1中，1μ斜面是用气相色谱法测定各
菌株的试管斜面的固氮酶活性值。
按以下公式计算1=580××××××虽然理论上，在固定条件下，乙炔还原
活性与固氮酶对氮气的固定活性呈正相关，但在实际实验过程中，会由于斜面的
新鲜程度，斜面培养基中的某些组成等原因，而影响实验结果的准确性，所以，
每种菌都取5支对数生长期的斜面做重复试验，以尽量减少误差。
2是将菌株接种到无氮培养液中，28℃，100培养7天后，用微量凯氏定氮
法测定最终发酵液的含氮量。
按以下公式计算2=1-2×14×1000经回归分析[6]，1与2呈强正直线相关
相关系数=09527，回归方程为2=79560+05016×1，其结果与文献[3]的有关报道
相似。
22鉴定结果221形态特征见表2所示。
表2形态特征222生理生化特征见表3所示。
表3生理生化特征表4褐球固氮菌、拜氏固氮菌和敏捷单孢菌模式种的特征
[5]223命名根据以上形态和生理生化特征，参照[伯杰细菌鉴定手册]表4、表5
列出了其中有关模式种的鉴别特征，将以上四株菌命名如下65与固氮菌科，氮
单胞菌属的敏捷单胞菌相近，但甘露醇发酵及淀粉分解试验与模式种不同，暂定
名为氮单胞菌6565。

合集下载

棕色固氮菌分离鉴定与初步应用研究

棕色固氮菌分离鉴定与初步应用研究

棕色固氮菌分离鉴定与初步应用研究摘要棕色固氮菌分离鉴定与初步应用研究结果表明，通过分离培养和鉴定，分离出的6个棕色固氮菌贵州地方株，其中4株有一定固氮能力，另外2株固氮能力较强。

应用棕色固氮菌制成菌肥，可以显著提高黑麦草产量。

AbstractIsolation and identification and primary application of Azotobacter vinelandii were studied. The results showed that through isolation，culture and identification，6 strains of Azotobacter vinelandii were obtained. Among them，four strains had certain nitrogen fixation ability，and other two strains were even better．Using Azotobacter vinelandii，the bacterial fertilizer was made，and it significantly increased the yield of ryegrass.Key wordsAzotobacter vinelandii；isolation and identification；primary application棕色固氮菌属于自身固氮菌，不仅能在土壤中自行繁殖，固定空气中的游离氮，而且能产生藻聚糖（Alginates），棕色固氮菌染色体有4种基因对藻聚糖的生物合成与调节起作用。

这种细菌产生的藻聚糖与海藻酸盐具有相似的功能和作用，可作外科敷料、牙模、食品及药物缓释剂等用途，或是用作固定化酶和细胞工程等方面[1-2]。

国内研究发现海藻糖能提高绵羊红15号小麦幼苗耐盐能力[3]；海藻糖可以提高大豆植物抗性[4]。

玉米内生联合固氮菌的分离与鉴定

玉米内生联合固氮菌的分离与鉴定


ｏｈ ｒ， ｅａ ｓ ｅ ｎ ｙ ｎ ｕ ｈ ａｂ ｎ ｏ ｒｅａ ｄｐｏｅｔ ｎｎｔｅｐ ｎ ｓ ｅ Ｔ ｅｒｓ ａｃ ｔｄ ｄ ｔ ｓ ｂ ｃ ｕｅｔ ｙ ｊ ｏ ｇ ｒｏ ｕｃ ｎ ｒｔｃｏ ｌ ｔｉ ｕ ． ｈ ｅ ｒｈｓ ｉ ｅ ｈ ｅｏ ｅ ｃ ｓ ｉ ｉ ｈ ａ ｔ ｓ ｅ ｕｅ
Ｎ Ｒ （ｒ ｒｂ ｃ ｒ ｐ）Ｎ Ｒ０ ｅｕ ｓ ｃ ｂ ｍ ｃｆ￣ ｓ ｗ ｒ ｓ ｉ ｄｗｔ ｎ ｒｇ ｎｆ ｉ ｃｖ ． ｈ Ｆ ｒ ｔ ｏ ａ ｔ ． Ｆ ４Ｃ ｌｌ ｉ ｒ ｉ ｅｕ ｎ ） ｅｅ ｔ ｎ ｉ ｉｏ ｅ －ｘ ｇａｔ ｉ Ｔ ｅ Ａ ｈ ｅｓ ， （ ｌｏ ｍｉｏ ｕ ｌ ａ ｅ ｈ ｔ ｉｎ ｉｔ ｙ
Ｅ ｖ ｏ ｍｅ ｔｌＥ ｇｎ ｅｉｇ ｅｌ ｇｉｎ ｉｎａ Ｃ ｌｇ ，Ｈ ｒｉ １ ０ ８ ，Ｃ ｉ ；２ ｎ ｔｕ ｆ ｎ ｉ ｎ ｎａ ｎ ｉ ｒ ，Ｈ ｉｎ ｊ ｇ Ｏｒ ｔｌ ｏｌ ｅ ａｂ ０ ６ ｈｎ ｒ ｅ ｎ ｏ ａ ｅ ｅ ｎ ５ ａ ．Ｉ ｉ ｔ ｏ ｓｔｅ Ｍｉｏ ｉｌ ｙ Ｈ ｉｎ ｊ ｎ ｃ ｄ ｍｙ ｆ ｃ ｎ ｅ ， ａｂｎ１ ０ １ ， ｈ ａ ３ Ｃ ｌｇ ｆ ｉ ｃ ｎ ｅ ， ｃ ｂ ｏ ， ｅｌ ｇｉ ｇＡ ａ ｅ ｉ ｃ ｓ Ｈ ｒｉ ０ Ｃ ｉ ； ． ｏｅ ｅｏ ｆ Ｓ ｉ ｃ ｓ ｒ ｏｇ ｏ ａ ｏＳ ｅ ５ ０ ｎ ｌ Ｌｅ ｅ Ｈ ｉｎ ｊ ｎ ｎ ｅｓｙ １ ０ ８ ， ｉ ） ｅｌ ｇａ ｇＵ ｉ ｒｉ ， ０ ６ Ｃｈ ａ ｏ ｉ ｖ ｔ ５ ｎ
张多英 ，张淑梅 ，蔡柏岩。
（． １ 黑龙江东方学院食品与环境工程学部，哈尔滨 １０ ８ ：２ 黑 龙江省科学院微生物研究所，哈尔滨 １０ １ ： ５０６ ． ５０ ０ ３ 黑龙江大学生命科学学院，哈尔滨 ． １０ ８ ） ５０ ６
微生物大实验 土壤中固氮微生物的分离与纯化

微生物大实验 土壤中固氮微生物的分离与纯化

土壤中固氮微生物的分离与纯化一、实验目的1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。

2、学习微生物纯系分离、培养方法。

3、掌握划线分离纯化微生物的方法。

4、对提取的土样进行微生物的分离、纯化培养，并进行简单的形态鉴定5、了解该菌种的生物学特征。

二、实验原理农业生产不仅要求高产、稳产，而且要求品质优良。

长期以来，为确保农产品高产丰收，人们大量使用化学农药化肥，使得生态环境每况愈下，十分不利于农业可持续发展。

生物肥料由于具有增加土壤生物多样性、改善农产品品质、能自我更新增殖和永续利用的特性，其发展备受关注。

微生物肥料是指应用于植物或土壤环境中有生物活性，起肥料效用、或以肥料方法施用的，以微生物活性生物体或其代谢产物为主要作用因子的生物制剂或肥料制品[1]。

固氮菌可将空气中N2还原为可被作物吸收利用的NH4+，由于共生固氮菌具有宿主专一性，所以应用范围窄，而自生固氮菌不受这些因素限制，固氮能力较强，还能产生吲哚乙酸等植物激素，刺激植物生长，促进增产，其生产和使用很方便[3]。

因此，试验将从农田土壤中分离得到自生固氮菌，为研究开发新型生物氮肥提供理论依据。

通过土壤微生物的分离与计数及划线纯化，涂布分离长出的单菌落，须经划线纯化，再转斜面培养后保藏备用。

涂布分离细菌的平板，温箱培养1d～2d后，然后挑取各单菌落的部分培养物，在预先制备好的平板上划线纯化。

根据所得纯种菌，依次进行简单染色，革兰氏染色，芽孢染色，确定菌种的形态特征。

然后根据伯杰手册确定菌种的大体范围，有针对性的进行生理生化实验，从而最终确定菌种所在的属。

三、实验材料1．土样浙江理工大学百果园土壤2．培养基阿须贝培养基：葡萄糖10g，KH2PO4 0.2g，CaSO4 0.2g，NaCl 0.2g ，CaCO3 0.2g，MgSO40.2g ，1000mL水，pH 7.2无氮培养基：3．实验仪器超净工作台、恒温培养箱、微量移液枪、冰箱、电子天平、显微镜、酒精灯、试管、培养皿、锥形瓶、糖瓷杯、玻璃棒、接种环、棉塞、标签、打火机、酒精棉球、试管架、照相机等。

固氮细菌

固氮细菌

固氮细菌第一固氮细菌的简介固氮细菌是一种能进行生物固氮的各种原核生物的通称，包括自生固氮菌、共生固氮菌、联合固氮细菌三种；固氮细菌可提高土壤肥力、将一氧化碳变燃料等作用。

第二个固氮细菌的分类自生固氮菌指各种自由生活、能独立固定大气氮的原核生物，包括多种生理类型的种类，如化能异养、好氧性的固氮菌属(Azotobacter）、化能异养、兼性厌氧的克雷伯氏菌属(Klebsiella）和化能异养、专性厌氧的巴氏梭菌（Clostridium pasteurianum），光能自养、好氧性的念珠蓝细菌属（Nostoc）、光能异养、兼性厌氧的红螺菌属(Rhodospirillum）和光能自养、专性厌氧的着色菌属(Chromatium）等。

克雷伯氏菌共生固氮菌指必须与它种生物共生时才能固氮的原核微生物。

包括与豆科植物共生结根瘤的根瘤菌属(Rhizobium）、与非豆科植物共生结根瘤的弗兰克氏菌属(Frankia)放线菌以及与地衣共生的鱼腥蓝细菌属（Anabaena）等。

弗兰克氏菌电镜照片联合固氮菌指必须生活在植物根际、叶面或动物肠道等处才能固氮的原核生物。

包括在热带植物根际固氮的固氮螺菌属（Azospirillum）以及在叶面固氮的拜叶林克氏菌属（Beijerinckia）等。

所有的固氮菌都有固氮酶，在有氧障保护的严格厌氧微环境中进行固氮。

生物固氮对全球生物圈的存在、繁荣与发展极端重要，对人类的生存和农业增产也有极其重要的作用。

[1]固氮螺菌好氧固氮菌防止氧伤害其固氮酶的机制固氮酶对氧极其敏感，因此固氮作用必须在严格的厌氧条件下进行。

这对于厌氧固氮菌当然不成问题。

但是大多数固氮菌却是必须在有氧条件下才能生活的好氧菌，它们是如何解决需氧但又必须防止氧伤害其固氮酶这个矛盾的呢？已知有以下一些保护固氮酶免受氧伤害的机制：固氮细菌的保护1．固氮菌保护固氮酶的机制⑴呼吸保护固氮菌属的许多细菌以其较强的呼吸强度迅速耗去固氮部位周围的氧，以使固氮酶处于无氧的微环境中而免受氧的伤害。