用选择培养基分离土壤中的自生固氮菌51页PPT
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从土壤中初步分离、纯化自生固氮菌广西师范大学生命科学学院生物科学专业2008级孔繁茂200811000069同组组员:何亮、梁梅杰唐书琴、陈容坤摘要:将从菜地获取的土壤稀释成一系列梯度浓度的溶液,再用平板涂布法将其涂布到预先配制好的无菌培养基上进行培养。
四天后,对培养皿中的菌落进行计数。
然后进行镜检(固氮菌的荚膜染色)确定菌体类别,并将其转移到另外的培养皿进行(划线)纯培养。
四天后,在对纯培养皿中生长出来的菌落镜检,进一步确认后,在试管斜面划线,进行自生固氮菌菌种的培养。
关键字:自生固氮菌平板涂布土壤是微生物的大本营,在这里生活的微生物无论是数量还是种类都是极其多样的,因此,土壤是开发利用微生物资源的重要基地,可以从中分离、纯化到许多有用的菌株。
本实验拟用选择性培养基从土壤中分离出自生固氮菌。
经过平板涂布、镜检筛选,然后纯培养,最终得到纯菌种。
1器材和方法1.1 从菜地菜地表层往下10厘米左右的土壤1.2 试验方法称取土样10g,加到装有90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,震荡使其混合(20min)。
用一只无菌吸管吸取1ml土样悬浮液加入9ml无菌水试管中,吹吸3次,使菌液混合;再从刚稀释的菌液中吸取1ml,按上述方法稀释,依次按此法重复五次,分别得到10-2、10-3、10-4、10-5、10-6等一系列稀释菌液。
将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号码,每一号码设置三个重复,用无菌吸管按操作要求吸取稀释液各1ml放入编号10-6的三个平板中,同法处理10-5、10-4稀释液。
再用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂抹均匀,每稀释度用一个无菌玻璃涂棒,更换稀释度时须将玻璃棒灼烧灭菌。
在28 摄氏度条件下倒置培养3-5天。
对培养皿内生长的菌落进行计数。
然后检查其特征是否一致,对不同的菌落进行细菌涂片(染色)后用显微镜检测,寻找属于固氮菌的菌落。
从自生固氮菌菌落上挑取少量细菌在平板上划线,使之形成单个菌落。