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实验三 大、小鼠的基本操作技术
[实验目的]： 通过大鼠、小鼠的抓取固定、性别辨认、灌胃、注射、采血、麻醉、标记、安乐死、动物剖检、脏器摘除与检查等实际操作，掌握大、小鼠动物实验的基本操作技术。
[实验动物]：大鼠、小鼠
[材料与器材]：大、小鼠饲养盒（带面罩）、大鼠和小鼠手术固定台，常规手术器械、大鼠灌胃针、小鼠灌胃针、lml注射器、5ml注射器、l0ml注射器、烧杯、75％酒精及酒精棉，干棉球。生理盐水、20％乌拉坦溶液（或3％戊巴比妥钠）、乙醚、新洁尔灭、3—5％苦味酸溶液、0.5％中性红或品红溶液、
[实验内容]：
一 、 实验动物标记编号的方法一染色法
（一）被毛染色法
1、单色涂染法；（3—5％苦味酸溶液，可染成黄色）。
2、双色涂染法：苦味酸（黄色）—为个位数；品红（红色）—为十位数．
（二）耳缘打孔法：适于做长期实验用。、
（三）刺数钳烙印法：适用于长期或慢性实验的大动物编号。
（四）号牌法：用于大动物实验。
二、实验动物被毛的去除方法
（一）剪毛法；（二）拔毛法；（三）剃毛法；（四）脱毛法；
三、大鼠、小鼠性别的鉴定
方法步骤：
1、将动物抓取后，腹部朝上，观察肛门与生殖器之间的距离，距离近的为雌性，距离远的为雄性，
2、成年雌性大小鼠有12个乳头。
3、天热时或性成熟后，雄性动物的睾丸一般会从腹腔降至阴囊内，此时易于区别。
四、大鼠、小鼠的抓取和固定
（一）小鼠的抓取固定：
[实验器材]：小鼠饲养盒(带面罩)1套，小鼠防护手套若干。
[方法步骤]：
1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起，放在饲养盒面罩上。 2 2、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后、颈背部的皮肤，将小鼠提起。
3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条直线。
4、用左手无名指压住小鼠背部的皮肤，小指压住小鼠的尾巴根部。
5、松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。
《医学微生物学》动物接种实验与病毒培养技术实验
实验动物在病原微生物中的研究上占有重要地位。利用实验动物可以进行病原菌的分离鉴定、毒力的检测、制备免疫血清等生物制品；进行各种皮肤试验；建立人工感染的动物模型；进行发病机制、疾病防治以及免疫机制的研究等。
一、实验动物的管理
1．实验室常用的动物：家兔、豚鼠、小白鼠、大白鼠、地鼠、绵羊、鸡等，根据实验的目的选择最适宜的动物。
2．实验动物必须与正常动物分开饲养，动物室内要经常保持清洁和空气畅通，并应有防蚊、防蝇、防逃跑及保暖设备。
3．实验动物要精心饲养，喂以适当的饲料并给以充足的水，任何动物也不要断水。
4．实验动物要有详细的记录，包括性别、体重、体表特征(如毛色等)、接种材料、接种日期、接种途径、剂量、次数以及接种变化等。
5．实验动物应做好标记，对较大动物如家兔、豚鼠等可用金属号码牌固定于耳朵上，对较小动物如大白鼠、小白鼠等可用复红(或苦味酸等染料)涂于身体的不同部位，以资识别。盛装动物的笼具等，也应付以标签。
6．接种后的动物应每天观察1～2次，注意动物的精神状态，活动能力、饮食和大小便情况，体温、注射部位的反应以及全身反应，如不安、耸毛、震颤、弓背、麻痹及死亡等，并应详细记录之。
7．感染动物死亡后，应立即剖检或暂时冻存。动物的排泄物及使用的笼具等必须严格消毒。任何用过的动物，不宜再做其他试验。
二、实验动物的选择
选择实验动物应注意以下几点：
1．易感性：是选择实验动物的首要条件。
2．动物健康：体质健康、发育正常、体重适宜；最好使用自己繁殖的动物，由市场购买的动物至少经过一周的隔离观察，证明无隐性感染方可使用；某些特殊实验应需选用专门喂养繁殖的无菌动物；实验动物应容易获得，便于喂养和管理。
3．动物大小：同一实验应选用大小一致的动物，通常以年龄或体重为标准。 4．性别：某些实验最好选用同一性别，特别是免疫的动物和需要观察较长时间的实验动物。
医学动物实验学
进行实验研究的基本要素AEIR：动物、设备、信息、试剂。
实验动物：是指经过人工定向培养、对其携带的微生物和寄生虫实行控制，其遗传背景明确，来源清楚，并在相应的环境设施内饲养，用于科学研究、教学、生产、检定以及其他科学实验的动物。
实验用动物：所有用于科学实验的动物统称为实验用动物。包括实验动物、野生动物、经济动物和观赏动物。
实验动物和实验用动物的区别：实验动物具有一下特点：1实验动物是遗传限定的动物；2对其携带的微生物、寄生虫实行人工控制；3实验动物的目的用于科学研究。
实验动物的研究方向：1推广“3R”实验（替代replacement、减少reduction、优化refinement）；2转基因动物研究；3动物疾病模型的开发和利用；4动物组织器官的克隆研究；5实验动物福利。
实验动物微生物学分类、概念、环境要求和应用范围：1普通动物CV；2清洁动物CL；3无特殊病原体动物SPF；4无菌动物GF和悉生动物GN。1无菌动物GF：是指现有的检测技术在动物体内外的任何部位均检不出任何活的微生物和寄生虫的动物。饲养条件：无菌隔离器内（隔离系统）。应用：在生物医学研究中有较独特的作用；微生物学研究、免疫学研究、放射医学研究、营养代谢研究、老年病学研究、药理和毒理学研究、心血管病研究、肿瘤、寄生虫学、口腔医学研究。2悉生动物GN：也称已知菌动物，指在动物体内带有明确的微生物种类的动物。饲养条件：无菌隔离器内（隔离系统）。应用：在多种研究中可代替无菌动物。微生物、免疫、微生物和寄生虫相互关系等的研究。3无特殊病原体动物SPF：指动物机体内无特定的微生物和寄生虫存在，但带有非特定的微生物和寄生虫的动物。饲养条件：屏障环境。应用：适用于所有科研实验，是目前国际标准级的实验动物。各种疫苗生产所采用的动物应为SPF动物。4清洁动物CL：除普通的动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体，是根据我国国情而设定的等级动物。饲养条件：屏障系统。应用：在我国已经成为用于科学研究的标准的实验动物；国际上仅用于短期试验或部分科学研究实验。5普通动物CV：是在微生物学和寄生虫学控制上要求最低的动物，它要求不携带人兽共患病和动物烈性传染病的病原体。饲养条件：开放系统。应用：生物医学教学示教，预试验，不可用于科研、生产和检定。
实验动物(Laboratory Animal): 是指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的，应用于科学研究、教学、生产和检定以及其他科学实验的动物。
近交系(Inbred Strain)是指至少连续经过20代以上全同胞兄妹或亲子交配，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。近交系动物的近交系数（Inbreeding Coefficient）应大于99%。
转基因动物 Transgenic Animals转基因动物是指基因组中稳定地整合有以实验方法所导入的外源基因或特定DNA片段的动物。
嵌合体动物（chimeric animal）：只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因。 逆转录病毒感染法、胚胎干细胞介导法制备的动物第一代均为嵌合体。雄原核显微注射法制备的动物第一代中1-10%为嵌合体（延迟整合）。 屏障环境：与外界隔离，是饲养清洁级动物和SPF级动物的设施。进入实验动物生存环境的空气须经过滤净化处理，其洁净度相对于10000级，进入屏障内的人、动物和物品如饲料、水、垫料及实验用品等均需有严格的微生物控制。
实验动物人性化及3R原则
1959年，《人道主义实验技术原理》第一次全面系统地提出了包括动物实验和实验动物的减少、替代与优化的动物实验替代方法（简称3R）理论。
一、人性化的概念：至少要满足动物五种基础需要:足够饮水和营养良好的食物；任何时间不受饮水的限制；免受痛苦和疾病的折磨；免受焦虑和害怕的折磨；能够表达正常生理学行为，如躲藏、犊和互相关照等。
二．3R的基本内涵 ：(一)减少 （Reduction）是指在科学研究中，使用较少量的动物获取同样多的实验数据或使用一定数量的动物能获得更多实验数据的科学方法。 二）替代 (Replacement)是指使用其它方法而不用动物所进行的试验，或者说是使用没有知觉的试验材料代替以往使用神志清醒的活的脊椎动物进行试验的一种科学方法。①根据是否使用动物或动物组织分:相对性替代和绝对性替代②按照替代物的不同分:直接替代（如志愿者或人类的组织等）和间接替代（如鲎试剂替代家兔热原试验）。③根据替代的程度分:部分替代（利用其他替代实验手段来代替动物实验中的一部分或某一步骤）和全部替代（用新的替代方法取代原有的动物实验方法）。 （三）优化 （Refinement）是指在符合科学原则的基础上，通过改进条件，善待动物，提高动物福利或完善实验程序和改进实验技术，避免或减轻给动物造成的与实验目的无关的疼痛和紧张不安的科学方法。 ①充分阐明实验的必要性，并证明没有任何其它方法可以取代该动物实验。②充分阐明实验的合理性，即所用的实验动物种类、品系、数量、性别、日龄等都是科学合理的。③明确实验过程可能给动物造成的疼痛、痛苦，有些国家制定了疼痛等级的评分标准。④如果是用非人灵长类动物做实验，对实验完成后退役的动物必须有妥善安置措施。
