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10类食品污染阪崎肠杆菌状况的调查研究【摘要】目的了解10类食品中阪崎肠杆菌的污染状况及污染数量，评估其风险性，为预防和控制阪崎肠杆菌的感染、传播、流行提供科学依据。
方法按照GB4789.1-2010采抽样技术、GB4789.40-2010《食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》、实时荧光PCR 法操作规程，对10类850份食品进行阪崎肠杆菌检验，标准菌株作对照。
结果检出阪崎肠杆菌54株，总检出率为6.4%。
该10类食品阪崎肠杆菌的检出率差异有统计学意义，由高至低排序为：冰淇淋＞巧克力坚果＞熟肉＞糖饼类＞面包糕点＞方便面＞奶类＞饮用水、生肉、调味品。
染菌量＞30 MPN/100g(ml)以上的有15份，占27.7%(15/54)。
结论 10类食品检出阪崎肠杆菌的有7类，应予以重视。
【关键词】阪崎肠杆菌；定性；定量Investigation of 10 kinds of food be poluted by Enterobacter sakazakii LU Xing-er，ZHENG Yue-kang，WU Can-quan.Zhongshan Center for Disease Control and Prevention in Guangdong Province，Zhongshan 528403，China【Abstract】 Objective To understand the contamination of Enterobacter sakazakii and the amount of pollution from 10 kinds of food，assess their risk，to provide the scientific basisfor control and prevent infection，communication and prevalence of Enterobacter sakazakii.Methods The samples were tested in accordance with the national standard and real-time fluorescence PCR method.The samples were tested from 850 samples of 10 kinds of food.Standard strain was used as control.Results The 54 strains of Enterobacter sakazakii were detected,the detection rate was 6.4%.There was statistically significant difference in terms of 10 kinds of food.The order from high to low was：ice cream>chocolate nut>cooked meat>candy cake>bread，pastry>instant noodles>milk>water，condiment，raw meat.15 samples were contaminated volume over>30 MPN/100g(ml) concentration range，accounting for 27.7%（15/54）.Conclusion Enterobacter sakazakii were detected from 7 of 10 kinds of food.We should be targeted to strengthen supervision and management.【Key words】Enterobacter sakazakii；Qualitative；Quantitative据WHO最新报告显示，乳粉中的阪崎肠杆菌是导致婴幼儿感染和死亡的主要原因之一。
食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数1 范围本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。
本标准适用于食品中大肠菌群的计数。
2 术语和定义2.1 大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2 最可能数most probable number，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
℃℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ±13.4 天平：感量0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
3.11 菌落计数器。
4 培养基和试剂4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1。
4.2 煌绿乳糖胆盐（Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录A中A.2。
4.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA）：见附录A中A.3。
4.4 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.4。
4.5 无菌生理盐水：见附录A中A.5。
4.6 无菌1 mol/L NaOH：见附录A中A.6。
4.7 无菌1 mol/L HCl：见附录A中A.7。
第一法 大肠菌群MPN计数法5 检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。
图1 大肠菌群MPN计数法检验程序6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g样品,放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内, 8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。
《食品卫生微生物学检验》-----阳性对照标准菌株
中国工业微生物菌种保藏管理中心
《食品卫生微生物学检验》新版标准GB/T 4789-2010于2010年6月1日开始实施。
新版《食品卫生微生物学检验》国标在检测流程、检验方法及培养基使用等方面进行了较大改动。
标准中要求实验室应当有阳性对照标准菌株，以下是中国工业微生物菌种保藏管理中心整理的《食品卫生微生物学检验》标准中涉及的阳性对照标准菌株，以方便食品监督管理部门、检验检疫机构、卫生防疫部门、大专院校、科研院所和食品企业微生物实验室使用。
附件：食品微生物学检验(GB/T 4789)阳性对照用菌。
中华人民共和国国家标准GB 4789.3—2010食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数National food safety standardFood microbiological examination: Enumeration of coliforms中华人民共和国卫生部发布前言本标准代替GB/T 4789.3-2008《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》。
本标准与GB/T 4789.3-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中英文名称；——“第二法大肠菌群平板计数法”的平板菌落数的选择范围修改为“15 CFU～150 CFU”；——删除了“第三法大肠菌群Petrifilm TM 测试片法”。
本标准的附录A、附录B为规范性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB 4789.3-1984、GB 4789.3-1994、GB /T 4789.3-2003、GB /T 4789.3-2008。
食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠菌群计数1 范围本标准规定了食品中大肠菌群（Coliforms）计数的方法。
本标准适用于食品中大肠菌群的计数。
2 术语和定义2.1 大肠菌群coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2 最可能数most probable number，MPN基于泊松分布的一种间接计数方法。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
℃℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ±13.4 天平：感量0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
食品微生物之检验方法－阪崎肠杆菌之检验1 适用范围：本方法适用于一般食品及奶粉中阪崎肠杆菌之检验。
2 检验方法：2.1 工作环境：工作平台须宽敞、洁净、光线良好，操作平台光度为100呎烛光以上，密闭室内换气良好，尽可能没有灰尘及流动空气。
每15分钟落菌数不得超过15 CFU／培养皿。
2.2 器具及材料：2.2.1 干热灭菌器。
2.2.2 高压灭菌釜。
2.2.3 搅拌均质器（Blender）或铁胃（Stomacher）：适用于无菌操作者。
2.2.4 天平：可称量到2000 g者，灵敏度为0.1 g；可称量到120 g者，灵敏度为1 mg。
2.2.5 冰箱：能维持5 ± 3℃者。
2.2.6 吸管或吸管尖：已灭菌，1 mL吸管应有0.01 mL之刻度；5 mL及10 mL吸管应有0.1 mL 之刻度。
2.2.7 吸管辅助器（Pipette aid）或微量分注器。
2.2.8 稀释瓶：160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、铁弗龙（Teflon）或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质，附螺旋盖。
2.2.9 培养皿：已灭菌，内径约9 cm，深度约15 mm，底皿之内外面应平坦，无气泡、刮伤或其它缺点。
2.2.10 增菌用容器：附螺旋盖之125 mL、250 mL、2 L三角锥瓶或广口瓶；玻璃、聚乙烯、铁弗龙或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质。
2.2.11 pH测定仪。
2.2.12 培养箱：能维持内部温度在± 1℃以内者。
2.2.13 温度计：量测温度范围1～55℃，最小刻度0.1℃。
2.2.14 水浴：加盖，具水流循环系统，能维持水温温差在± 0.2℃以内者。
2.2.15 接种针及接种环（直径约3 mm）：镍铬合金、铂铱或铬线材质，或可抛弃式者。
2.2.16 曲玻棒：可灭菌者，直径3～4 mm，涂抹区域45～55 mm。
2.2.17 试管：10 × 100 mm，13 × 100 mm，13 × 120 mm，15 × 150 mm，16 × 150 mm试管，或其它适用者。
