不同剂量MOG_(35-55)抗原诱导EAE小鼠模型的免疫组织化学比较

不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答

刘成芳;殷国荣;刘娟娟;管志玉;石蓉;张宇斌 【期刊名称】《热带医学杂志》 【年(卷),期】2006(6)5 【摘 要】目的比较IFN-γ、蜂胶佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助可溶性速殖子抗原(STAg)增强机体黏膜免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组(各15只):20μgSTAg,20μgSTAg+40μg蜂胶,20μgSTAg+1000UIFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1000UIFN-,γ均溶于总体积为20lμ的PBS中,滴鼻免疫(10lμ/鼻孔),免疫2次,间隔14d。末次免疫后第10天用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击。攻击后第43天处死全部存活小鼠,比较各组小鼠肠黏膜小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、PP结T淋巴细胞数;检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液中弓形虫特异性sIgA含量。结果各佐剂组小鼠IEL、PP结T淋巴细胞数显著高于STAg组,黏膜sIgA含量显著高于STAg组;蜂胶+IFN-γ联合组小鼠黏膜免疫应答水平高于单独佐剂组,其中显著高于蜂胶组(P<0.05)。结论IFN-γ作为弓形虫黏膜疫苗佐剂的效应优于蜂胶,IFN-γ+蜂胶作为复合黏膜佐剂鼻内免疫效果优于两者单独应用。

【总页数】4页(P484-486) 【关键词】可溶性速殖子抗原;IFN-γ;蜂胶;鼻内免疫;黏膜疫苗 【作 者】刘成芳;殷国荣;刘娟娟;管志玉;石蓉;张宇斌 【作者单位】山西医科大学医学寄生虫学研究所寄生虫学教研室 【正文语种】中 文 【中图分类】R382.5 【相关文献】 1.重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合IL-2、IFN-γ佐剂鼻内免疫小鼠诱导的小肠黏膜免疫应答 [J], 祝建疆;李雅清;王海龙;孟晓丽;杨建一;殷国荣 2.弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答 [J], 管志玉;孟晓丽;殷国荣;刘红丽;王海龙 3.弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞持续性免疫应答 [J], 孟晓丽;殷国荣;吴静;唐旭;马广源;张杰 4.弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导NALT和GALT黏膜部位的免疫应答 [J], 李珀;孟晓丽;殷国荣;张杰 5.弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的肠IEL持续性免疫应答 [J], 殷国荣;孟晓丽;王海龙;石蓉;刘娟娟;管志玉

最新免疫检查点与自身免疫性疾病调节免疫系统具有多种复杂的机制，以实现和维持免疫耐受，而自身免疫性疾病如1型糖尿病(T1D)、多发性硬化症(MS)、类风湿性关节炎(R A)等，都是免疫耐受失败的结果。

有助于保持免疫耐受的机制之一是免疫检查点(ICP)。

在过去20多年中，广泛的研究已经证明了ICP对免疫耐受的重要性。

加强免疫检查点CTLA-4的融合蛋白Abatacept(Orencia®)，已被批准用于治疗成人类风湿关节炎，更多以ICPs为靶点治疗自身免疫性疾病的药物也正在开发中。

1.常见免疫检查点的机制来源参考文献1PD-1主要在T细胞、B细胞、树突状细胞(DCs)和巨噬细胞活化后表达。

PD-1具有两个配体PD-L1和PD-L2。

PD-1的激活抑制了T细胞的增殖、细胞因子分泌和细胞毒性;巨噬细胞表达PD-1的升高导致IL-10水平升高，降低血液中IL-12水平;最后，PD-1阳性APCs在促进CD4-T细胞向T调节细胞(Tregs)分化方面的能力弱于PD-1阴性APCs。

CTLA-4一种主要表达在DCs和活化T细胞上的ICP受体，包括记忆T细胞和Tregs。

它有两个配体(B7-1)和CD86(B7-2)，主要表达在APCs上。

C TLA-4通过与CD28竞争获得CD80和CD86，从而执行其免疫抑制功能，导致T细胞增殖和细胞因子分泌减弱。

BTLA属于CD28家族，主要表达在活化T细胞上，也表达在静止B细胞、成熟DC和自然杀伤细胞(NK)细胞。

BTLA配体是疱疹病毒侵入介质(HVE M)，表达于静止T细胞、巨噬细胞和未成熟DC细胞。

BTLA与HVEM的结合对免疫刺激的影响减弱，这种作用还抑制了T 细胞增殖和B细胞的活化，减少CD8+DC的数量，减少TNF-α，IFN-γ, IL-2和IL-4等细胞因子的分泌。

其它免疫检查点还包括TIGIT，VISTA，TIM-3，LAG-3，CD200R 表达细胞与配体见下表。

多发性硬化动物模型研究进展彭真;张礼标;吴洁;孙云霄【摘要】多发性硬化(MS)是一种慢性中枢神经系统自身免疫性疾病,为临床神经系统的疑难重病,对其病理过程、发病机制的研究以及治疗药物的筛选和评价都需要合适的动物模型.论文从实验动物选择、几种重要的诱导方法及模型的行为学、影像学及病理评价等多方面对MS动物模型研究进展进行介绍.%Multiple sclerosis(MS)is a chronic autoimmune disease in the central nervous system,and a difficult case in clinical nervous system.Appropriate animal models play a key role for the research of the pathological process and mechanisms,drug screening and evaluation.In this review,we reviewed the progress on MS models from animal selection,induction methods and the evaluation of the behavior,imaging and pathological aspects.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)004【总页数】5页(P108-112)【关键词】多发性硬化;中枢神经系统;免疫;动物模型【作者】彭真;张礼标;吴洁;孙云霄【作者单位】中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室,江苏南京210009;广东省生物资源应用研究所/广东省动物保护与资源利用重点实验室/广东省野生动物保护与利用公共实验室,广东广州 510260;广东省生物资源应用研究所/广东省动物保护与资源利用重点实验室/广东省野生动物保护与利用公共实验室,广东广州 510260;中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室,江苏南京210009;广东省生物资源应用研究所/广东省动物保护与资源利用重点实验室/广东省野生动物保护与利用公共实验室,广东广州 510260【正文语种】中文【中图分类】S852.34多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种慢性中枢神经系统(central nervous system,CNS)自身免疫性疾病，表现为局灶性炎性浸润(视神经、脑、脊髓)、脱髓鞘以及轴突损伤、胶质增生等，临床症状和病理特征极其易变。

NK细胞对颗粒酶B的继发性胞吞及其生物学意义NK细胞是一类重要的固有免疫细胞,在机体抗肿瘤、抗病毒中发挥重要作用。

NK细胞最重要的生物学作用是杀伤靶细胞,其主要机制之一是：NK细胞与靶细胞接触而形成免疫突触,NK细胞脱颗粒并释放效应分子,其中穿孔素可在靶细胞表面形成微孔道,颗粒酶循该孔道进入靶细胞内而诱导凋亡。

靶细胞内,颗粒酶诱导凋亡相关的caspase级联反应,通过直接作用pro-caspase切掉天冬氨酸残基激活下游caspase而发挥作用。

免疫突触内部分胞毒效应分子未进入靶细胞,其转归及功能尚不清楚,待阐明的问题之一是：滞留免疫突触内的穿孔素和颗粒酶是否会伤害NK细胞本身；其代谢与去向如何；等等。

文献已报道,细胞毒性细胞可通过独特机制处理胞内错位的颗粒酶B (GzmB)和穿孔素(PFN)。

例如,NK细胞内表达GzmB特异性抑制剂—丝氨酸蛋白酶抑制剂9(PI-9),后者可及时灭活胞内渗漏的GzmB。

鉴于NK细胞具有连续杀伤靶细胞的功能,我们提出如下推测：释放并滞留于免疫突触的效应分子可能被回收而重新利用。

本课题以非何杰金淋巴瘤来源的NK92细胞系为模型,在靶细胞刺激下,探讨NK92细胞所释放GzmB的转归。

一、NK92细胞在靶细胞刺激下出现继发性胞吞现象1.应用苯乙烯染料FM1-43观察NK92细胞继发性胞吞现象苯乙烯染料FM1-43可与细胞膜磷脂双分子层可逆性结合,发出荧光,而其在溶液中则几乎检测不到荧光。

细胞发生内吞后,苯乙烯染料内吞入细胞内,细胞膜上荧光可用磷酸盐缓冲液洗掉。

借此原理,本实验首先将NK92细胞用FM1-43预染,然后用猪内皮细胞(PEC)刺激1h,激光共聚焦显微镜(LCM)观察NK92细胞内吞情况。

结果显示,未用PEC刺激的NK92细胞膜上显示荧光,PEC刺激的NK92细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗细胞膜后,细胞内显示荧光,提示NK92细胞在胞吐后细胞膜发生内化。

2.靶细胞刺激的细胞膜内吞过程依赖于clathrin细胞膜的内吞常见形式为依赖于clathrin的经典途径,也可依赖于巨胞饮(macropinocytosis)、小窝蛋白(caveola)和脂筏(lipid raft)等途径。