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开展“高血压”化学发光免疫检测技术可行性分析20120712

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博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 高血压系列

1 运用化学发光免疫检测技术开展“高血压项目”

检测的可行性分析

一、开展“高血压项目检测”在医疗机构检测中的重要性

放射免疫分析技术开展肾素活性—血管紧张素—醛固酮系统（RRAS）测定，临床意义介绍如下：RAAS是人体血压、水和电解质平衡重要的调节系统，对维持人体内环境的稳定起着十分重要的作用。肾素在生理和许多病理情况下，其数量和活性决定了整个体系的活性，测定肾素活性因此成为RAAS活性的标志。实际工作中肾素活性的测定是通过测定血管紧张素I（Ang I）的量和在 37℃ 条件下1hAI的增加量（即肾素原被肾素催化转化为AI的量）来计算肾素活性的。肾素的主要生理功能是将血管紧张素原分解成Ang I，AI在血管紧张素转移酶（ACE）作用下转变成AngⅡ，并可引起醛固酮（ALD）分泌,以此发挥对机体血压的调节作用。ALD是肾素-血管紧张素系统的一个延伸部分，它也参与了高血压的发病过程。原发性醛固酮增多症患者，肾上腺因肿瘤或增生等原因大量分泌ALD，肾素分泌受抑制。临床上表现为高血压、低血钾。血、尿中ALd水平升高。

肾素--血管紧张素--醛固酮系统（RAAS）是由一系列激素及相应的酶组成,通过对血容量和外周阻力的控制，调节人体血压、水和电解质平衡，来维持机体内环境恒定。另外，它与一些肾脏疾病及与肾脏有关的一些疾病有密切的关系。目前检测血浆中肾素活性（PRA）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）和醛固酮（ALD）已成为原发性和继发性高血压分型诊断、治疗及研究的重要指标。对一些有关肾脏疾病的诊断、治疗以及发病机理的探讨有着重要意义。

二、采用化学发光法检测“高血压项目”是医学检验技术的必然趋势

1. 本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 高血压系列

2 与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。

2. 临床实验数据对照案例：

2.1试验方案

试验目的：通过博奥赛斯试剂盒对临床样本（金域提供）的对比试验，验证博奥赛斯试剂与金域现用试剂是否等效，从而验证博奥赛斯试剂和进口试剂的测值相关性。

试验项目：博奥赛斯醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）（以下简称博奥赛斯ALD）

博奥赛斯血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）定量检测试剂盒（化学发光法）(以下简称博奥赛斯PRA)

博奥赛斯血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）定量检测试剂盒（化学发光法）(以下简称博奥赛斯AngⅡ)

对照试剂：贝克曼（Beckman Coulter）ALD放射免疫试剂（以下简称Beckman ALD）

索林（DiaSorin）血浆肾素活性放射免疫试剂（以下简称DiaSorin PRA）

伯乐免疫测定质控品三水平（371,372,373）（以下简称伯乐质控品）

美国病理学家协会（College of American Pathologists，CAP）尿样本室间质评（2012年）（以下简称CAP 尿样室间质评）

试验样本：金域当天新鲜检测样本，样本量应足够进行比对试验。试验前去除严重溶血、脂血、黄疸和染菌的样本。

试验方法：双盲法。

2.2试验结果与结论

2.2.1醛固酮（ALD）定量检测试剂盒（化学发光法）

2.2.1.1分析灵敏度、剂量反应曲线性

同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值X与标准偏差SD。计算X-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。

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3 表1 ALD分析灵敏度、线性

S0发光值 校准品浓度（pg/mL） 发光值 参数

2975594 3229144 25 2622225 2456235 ｜r｜ 0.9995

3098946 3077668 75 1979591 1963318 XS0 3076676

2896896 3137982 210 1242804 1231795 SDS0 105600.1

3160725 2990420 650 557883 517335 分析灵敏度 13.7 3185593 3013787 1500 262278 263060

本次试验分析灵敏度为13.7pg/mL，｜r｜=0.9995.

2.2.1.2精密度（CV%）

10孔平行测定高值和低值的样本，计算测定值的平均浓度（X）与标准差（SD）。批内不精密度（CV %）= SD／X×100%

表2 ALD精密度

样本1

（2010-5-30 75160） 样本2

（2010-5-30 75180）

孔数 发光值 测定值 发光值 测定值

1 1817980 115.98 2186680 70.65

2 1809837 126.29 2225978 66.38

3 1802299 129.84 2114100 76.64

4 1804197 129.45 2117125 76.13

5 1828486 124.53 2174596 71.45

6 1874899 115.67 2146345 75.3

7 1875937 115.48 2123842 78.03

8 1831369 125.45 2096379 81.49

9 1773696 130.91 2106238 80.23

10 1827748 124.68 2122615 78.18

123.83 75.45

SD 6.02 4.67

CV% 4.86% 6.20%

样本1,2的变异系数分别为4.864%，6.20%.

2.2.1.3测值重复性

取10~20份新鲜样本，将每份样本分装成3~5份。每天测定一次，连续3~5天。计算每个样本测定值的CV%.

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4 表3 ALD测值重复性

2012-6-1高血压样本

样本号 放免测定值（pg/mL） 6-2

测定值 6-4

测定值 6-7

测定值 SD CV%

1 75128 770 1339.99 1183.67 1262.59 1262.08 78.16 6.19%

2 75104 116 154.45 175.64 164.78 164.96 10.6 6.43%

3 75105 273 173.35 153.07 170.15 165.52 10.9 6.59%

4 75106 575 397.76 341.49 357.33 365.53 29.02 7.94%

5 75155 794 1108.32 1038.14 1106.46 1084.31 39.99 3.69%

6 75108 235 279.25 246.47 257.12 260.95 16.72 6.41%

7 75109 62 60.31 53.65 55.44 56.47 3.45 6.11%

8 75156 218 94.87 83.93 83.59 87.46 6.42 7.34%

9 75157 58 98.06 85.63 89.91 91.2 6.31 6.92%

10 75158 77 58.34 49.85 50.84 53.01 4.64 8.75%

11 75159 90 185.47 165.63 182.14 177.75 10.62 5.97%

测得2012年6月1号金域高血压样本11个，分别于6月2号、4号、7号测定，分别计算CV%,结果在3.69%~8.75%之间。

2.2.1.4准确性

2.2.1.4.1测定伯乐质控品

表4 ALD测定伯乐质控品

伯乐质控品

（批号40250） 测定值（pg/mL） Beckman Coulter测定范围

（pg/mL） 是否在质控范围内

371 79.18 <87.0 是

371 200.26 130-296 是

373 400.47 281-688 是

2.2.1.4.2测定CAP 尿样室间质评

表5 ALD测定CAP 尿样室间质评

CAP 尿样室间质评

（2012） 测定值

（ug/L） CAP提供ALD测定范围

（ug/L） 是否在质控范围内

N-01 47.9 36.7-100 是

N-02 17.7 13.5-35 是

N-03 19.7 14.1-34.2 是

2.2.1.5与Beckman Coulter测定值的临床符合率。 X博奥赛斯（天津）生物科技有限公司 高血压系列

5 本次测定金域高血压样本213个，分别根据Beckman ALD，和博奥赛斯ALD说明书中普食立位的参考值判断样本值，判断样本值属于正常，偏高或者偏低。结果如下表。

表6 ALD临床符合率（具体结果见附件一）

低值样本数 正常样本数 高值样本数 总数

213例

21 174 18 213

符合例数 17 162 17 196

不符例数 4 12 1 17

临床符合率 92.00%

2.2.1.6结论

2.2.1.6.1博奥赛斯ALD试剂灵敏度为13.7pg/mL、批内不精密度4.864%，6.20%、测值重复性的不精密度在3.69%~8.75%之间、剂量反应曲线线性0.9995、测定伯乐质控品值，CAP室间质评值均在要求范围之内。

2.2.1.6.2博奥赛斯ALD试剂和Beckman ALD试剂进行临床对比试验，符合性大于90%，说明两种试剂测值符合性良好。

2.2.2血管紧张素Ⅰ（AngⅠ）定量检测试剂盒（化学发光法）

2.2.2.1分析灵敏度、剂量反应曲线性

同时测定10个校准品零值（S0），计算发光值的平均值X与标准偏差SD。计算X-2SD，从校准品曲线中得出其对应浓度值即为分析灵敏度。

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免疫发光常见检测项目

免疫发光常见检测项目

免疫发光常见检测项目

免疫发光是一种用于检测生物体中特定分子的方法，利用特定的抗体结合目标分子后，再结合荧光素酶等酶促发光物质产生荧光或发光信号，通过测量光信号的强度来判断目标分子的存在与浓度。免疫发光技术已经广泛应用于医学诊断、生物学研究和药物筛选中，以下是免疫发光常见的检测项目：

1. 甲型肝炎病毒(HAV)抗体检测：使用免疫发光法检测患者体内是否存在甲型肝炎病毒抗体，用于诊断甲型肝炎和评估疫苗免疫效果。

2. 丙型肝炎病毒(HCV)抗体检测：通过检测丙型肝炎病毒抗体来判断患者是否感染了丙型肝炎病毒，用于早期诊断和治疗监测。

3. 人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体检测：利用免疫发光技术检测患者体内是否存在HIV抗体，用于早期发现HIV感染并进行防治工作。

4. 乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原检测：用于检测患者体内是否存在乙型肝炎病毒表面抗原，用于早期诊断和治疗监测。

5. 梅毒螺旋体特异抗体检测：通过检测患者体内梅毒螺旋体特异抗体来判断是否感染了梅毒，用于早期发现和诊断。

6. 甲亢相关抗体检测：用于检测患者体内是否存在与甲状腺功能亢进相关的抗体，帮助诊断和评估甲亢的程度。

7. 进展性多灶性白质脑病相关抗体检测：通过检测患者体内特定的抗体，帮助早期诊断进展性多灶性白质脑病。

8. 自身免疫性肝炎相关抗体检测：利用免疫发光技术检测患者体内是否存在与自身免疫性肝炎相关的抗体，帮助早期诊断和治疗选择。

9. 甲状腺自身抗体检测：通过检测患者体内存在的甲状腺自身抗体，帮助诊断自身免疫性甲状腺疾病。

10. 类风湿因子检测：通过检测抗体类风湿因子的存在来诊断类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。

11. 癌胚抗原(CEA)检测：用于检测患者体内是否存在癌胚抗原，用于早期诊断以及治疗效果的监测。

12. 前列腺特异抗原(PSA)检测：通过检测前列腺特异抗原的存在来筛查和诊断前列腺癌。

以上是免疫发光常见的检测项目，通过检测特定分子的存在和浓度，免疫发光技术为临床医生提供了快速、准确、灵敏的检测手段，对于疾病的早期诊断、治疗效果的监测以及临床研究具有重要意义。

免疫荧光层析法 化学发光

免疫荧光层析法 化学发光

免疫荧光层析法 化学发光

免疫荧光层析法（Immunofluorescence Assay，简称IFA）和化学发光（Chemiluminescence）是两种常用的检测技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程等领域。本文将介绍这两种技术的原理、步骤和应用，以及它们之间的区别和优缺点。

免疫荧光层析法是一种利用抗体与特定抗原结合后可发出荧光信号的检测方法。它的原理是将标记有荧光染料（如荧光素）的抗体与待检样品中的目标抗原结合，形成免疫复合物。通过荧光显微镜观察，可以检测到目标抗原的存在与否。这种方法具有高灵敏度、高特异性和无需放射性标记物的优点，被广泛应用于病原微生物的检测、抗体的定量和细胞蛋白的定位等研究领域。

化学发光是一种利用化学反应产生的光信号来检测目标物质的方法。它的原理是将待检样品中的目标物与标记有化学发光底物的抗体结合，形成免疫复合物。当加入特定的激发剂后，底物会发生化学反应，产生可见的光信号。通过光电倍增管或摄像机的检测，可以定量地测量化学发光强度，从而判断目标物的含量。化学发光方法具有高灵敏度、宽线性范围和较低的背景信号等优点，因此在临床诊断和生物工程领域得到广泛应用。

免疫荧光层析法和化学发光在实验步骤上存在一些差异。免疫荧光层析法的步骤包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和显微镜观察等。而化学发光的步骤则包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和化学反应等。两种方法的原理都是基于抗体与抗原的特异性结合，但在标记物和检测信号的产生上有所不同。

免疫荧光层析法和化学发光在应用上也存在一些差异。免疫荧光层析法常用于检测细胞表面标记物、病原微生物和抗体等，广泛应用于免疫学研究和临床诊断。而化学发光常用于检测肿瘤标志物、药物残留和基因表达等，被广泛应用于药物研发和生物工程领域。两种方法在不同领域有着各自的优势和适用范围。

总的来说，免疫荧光层析法和化学发光是两种常用的生物分析技术，具有高灵敏度、高特异性和广泛应用的特点。它们在原理、步骤和应用上存在一些差异，可以根据实际需求选择合适的方法。未来随着科学技术的不断发展，免疫荧光层析法和化学发光技术将进一步完善和应用于更广泛的领域，为生物医学研究和临床诊断带来更多的突破和进展。

全自动化学发光免疫分析仪临床应用质量控制探讨

全自动化学发光免疫分析仪临床应用质量控制探讨

全自动化学发光免疫分析仪临床应用质量控制探讨

随着科学技术的不断进步，全自动化学发光免疫分析仪在临床检验中得到了广泛应用。全自动化学发光免疫分析仪是一种能够自动实现荧光免疫分析技术的仪器设备，能够实现样本的自动处理、检测和数据分析等功能。这种技术具有操作简便、准确性高、高通量等优点，因此被广泛应用于临床化验室。

然而，在临床应用中，全自动化学发光免疫分析仪的质量控制问题也不容忽视。质量控制是确保实验结果准确可靠的重要环节，对于免疫分析仪器尤为重要。下面，将从质量控制的概念、目的和方法等方面进行探讨。

首先，质量控制是指通过标准物质对仪器进行校准和验证，以确保实验结果的准确性和可靠性。质量控制的目的是发现和纠正由于人员、方法、仪器等原因导致的误差和偏差，提高实验结果的准确度和稳定性。

首先，要建立适当的质量控制系统。这包括选取合适的质控品、建立合理的质控标准和范围、建立质控样本档案等。质控品的选取要符合实际临床需求，并保证其准确度和稳定性。质控标准和范围的建立要根据仪器的特点和实验室的情况确定，经过验证和校准后才能使用。质控样本档案要详细记录每一次质控样本的检测结果，以便日后比对和分析。

其次，要进行日常的质量控制监测。这包括内部质量控制和外部质量控制。内部质量控制是指在实验室内部进行的质控监测，通过参比实验室内的质控样本进行验证。外部质量控制是指将实验室的质控样本送至外部质量评估机构进行验证，以评估实验室的准确性和稳定性。通过定期监测和评估，可以及时发现实验室中的问题并进行纠正。 另外，还要加强人员培训和管理。仪器操作人员要具备一定的专业知识和操作技巧，定期进行培训和考核。要对质控结果进行及时分析和评估，对异常结果进行查找问题的原因，并采取相应的纠正措施。

在全自动化学发光免疫分析仪临床应用质量控制过程中，还需要注意一些常见问题和解决方法。例如，对于质控样本的多次检测结果出现较大波动时，首先应检查仪器是否正常工作，例如光源是否老化、荧光传感器是否灵敏等。同时，还应检查操作人员是否正确操作，例如样本的搅拌时间、试剂的存储条件等。如果以上问题都排除，仍然出现波动较大的情况，可能是质控品本身的问题，应考虑更换质控品进行验证。

免疫化学发光法

免疫化学发光法

免疫化学发光法

免疫化学发光法是一种具有高灵敏度、高特异性的免疫分析方法，在生物医学领域得到了广泛应用。下面是关于免疫化学发光法的各个方面的介绍。

1.直接法

直接法是一种简单的免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与发光标记物直接结合，形成免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，从而实现对目标分子的定量检测。直接法的应用范围广泛，如肿瘤标志物、病毒和细菌等微生物的检测。使用直接法时需要注意保证抗体的特异性，以及避免非特异性结合的影响。

2.间接法

间接法是通过将特异性抗体与酶或化学发光物质结合，形成酶或化学发光标记的抗体，然后将该抗体与目标分子反应，形成免疫复合物，最后加入相应的底物或激发剂，根据发光强度实现对目标分子的定量检测。间接法的灵敏度较高，适用于多种生物分子的检测。需要注意的是，要确保抗体的特异性以及发光标记物的稳定性。

3.竞争法

竞争法是一种免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与目标分子和发光标记的竞争性抗体结合，形成免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，实现对目标分子的定量检测。竞争法的应用范围包括激素、病毒和肿瘤标志物等生物分子的检测。使用竞争法时需要注意保证竞争性抗体的特异性，以及避免非特异性结合的影响。

4.夹心法

夹心法是一种免疫化学发光技术，通过将特异性抗体与目标分子和发光标记的抗体分别结合，形成夹心状的免疫复合物，然后测定复合物发出的光强度，实现对目标分子的定量检测。夹心法的灵敏度较高，适用于多种生物分子的检测。需要注意的是，要确保抗体的特异性和发光标记物的稳定性。

5.斑点免疫法

斑点免疫法是一种将特异性抗体或抗原点状固定在支持物上的免疫分析方法。在斑点免疫法中，待测样品中的目标分子与已固定的抗体或抗原相互作用，形成免疫复合物，然后加入发光标记物，形成点状发光。通过测量发光强度，实现对目标分子的定量检测。斑点免疫法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简便，适用于多种生物分子的检测。需要注意的是，要确保固定化抗体或抗原的特异性和稳定性。