检验技术化学发光和荧光免疫技术及仪器

免疫分析技术和相关仪器4.1．酶免疫分析仪4.1.1酶免疫分析技术的分类酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 是目前临床应用最多的一类免疫分析技术，可分为非均相(或异相)酶免疫测定和均相酶免疫测定两种方法。

均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种方法。

非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay）常用的酶免疫分析法多为非均相法，又可分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，以后者最常用，称为酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。

ELISA是临床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析仪都是基于ELISA技术，称为酶免疫分析仪。

4.1.2酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构根据仪器结构和自动化程度, 针对固相支持物的不同（如微孔板、试管、小珠、磁微粒等）作为吸附免疫试剂的载体，因而设计成不同的酶免疫分析仪，其基本工作原理就是分光光度法，在光电比色计或分光光度计的基础上根据ELISA技术的特点而设计。

包括：微孔板固相酶免疫测定仪器国际上微孔板式ELISA使用的载体为96孔板，采用直接对微板孔测定吸光度（A）的比色计。

(1) 酶标仪酶标仪也称为ELISA测读仪（ELISA reader）,有单通道和多通道两种类型。

自动型多通道酶标仪有多个光束和多个光电检测器，检测速度快。

如8通道的仪器，设有8条光束（或8个光源）、8个检测器和8个放大器。

多通道酶标仪的检测速度较快。

酶标仪的工作原理与主要结构和光电比色计几乎完全相同（见图16-1）。

既可以使用和分光光度计相同的单色器，也可以使用干涉滤光片来获单色光，此时将滤光片置于微孔板的前、后的效果是一样的。

图16-1 酶标仪工作原理酶标仪的工作原理和光路与普通光电比色计的不同之处在于（见图16-2）：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶标仪以垂直光束通过微孔板中的待测液；酶标仪通常使用光密度OD来表示吸光度。

免疫荧光层析法化学发光免疫荧光层析法（Immunofluorescence Assay，简称IFA）和化学发光（Chemiluminescence）是两种常用的检测技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程等领域。

本文将介绍这两种技术的原理、步骤和应用，以及它们之间的区别和优缺点。

免疫荧光层析法是一种利用抗体与特定抗原结合后可发出荧光信号的检测方法。

它的原理是将标记有荧光染料（如荧光素）的抗体与待检样品中的目标抗原结合，形成免疫复合物。

通过荧光显微镜观察，可以检测到目标抗原的存在与否。

这种方法具有高灵敏度、高特异性和无需放射性标记物的优点，被广泛应用于病原微生物的检测、抗体的定量和细胞蛋白的定位等研究领域。

化学发光是一种利用化学反应产生的光信号来检测目标物质的方法。

它的原理是将待检样品中的目标物与标记有化学发光底物的抗体结合，形成免疫复合物。

当加入特定的激发剂后，底物会发生化学反应，产生可见的光信号。

通过光电倍增管或摄像机的检测，可以定量地测量化学发光强度，从而判断目标物的含量。

化学发光方法具有高灵敏度、宽线性范围和较低的背景信号等优点，因此在临床诊断和生物工程领域得到广泛应用。

免疫荧光层析法和化学发光在实验步骤上存在一些差异。

免疫荧光层析法的步骤包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和显微镜观察等。

而化学发光的步骤则包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和化学反应等。

两种方法的原理都是基于抗体与抗原的特异性结合，但在标记物和检测信号的产生上有所不同。

免疫荧光层析法和化学发光在应用上也存在一些差异。

免疫荧光层析法常用于检测细胞表面标记物、病原微生物和抗体等，广泛应用于免疫学研究和临床诊断。

而化学发光常用于检测肿瘤标志物、药物残留和基因表达等，被广泛应用于药物研发和生物工程领域。

两种方法在不同领域有着各自的优势和适用范围。

总的来说，免疫荧光层析法和化学发光是两种常用的生物分析技术，具有高灵敏度、高特异性和广泛应用的特点。

化学发光与免疫荧光方法学对比一、《化学发光与免疫荧光方法学对比》1.概述化学发光（CL）和免疫荧光（IF）是用于检测特定病原体或病原体的特异性抗体的两种测定方法。

CL和IF之间的最显著差异是不同的技术原理，以及其具有不同的优势和劣势。

下面将比较这两种技术的方法学、特点和限制。

2.方法学对比化学发光和免疫荧光是两种完全不同的化学和物理技术。

（1）化学发光：CL技术使用放射性核素结合到抗体或含有特异性抗原的配体上，将其作为一种探针来检测特定目标物质。

检测物质特异性结合探针后，将其照射到发射波长范围的暗室，从而得到特定的发光细胞图像。

（2）免疫荧光：IF技术通过使用荧光标记抗体或特异性抗原，以可见光范围的荧光作为探针，检测特定的抗原或抗体。

被检测物质与荧光探针结合后，将其照射到可见光范围的暗室，从而得到特定的荧光细胞图像。

3.特点对比（1）CL技术可用于快速检测特定的物质：通过使用核素，可以迅速检测出特定的物质，这种技术不受受体或抗原的数量或特性影响。

（2）IF技术可以更简单、更灵敏地检测出特定物质：在IF技术中，荧光标记的抗体和抗原可以特异性地结合，使得能够更灵敏地检测出特定的物质，且不会受受体或抗原的数量或特性影响。

4.限制对比（1）CL技术存在一定的检测限制：CL技术受探针的数量的影响，抗原和抗体的结合特异性不强，因此无法准确检测受体或抗原的特定性。

（2）IF技术存在一定限度的检测效果：IF技术受荧光标记抗体和抗原的数量以及荧光强度的影响，因此无法准确检测受体或抗原的特定性。

综上所述，化学发光和免疫荧光有许多不同的方法学特点和限制，因此它们有不同的优势和劣势。

取决于检测病原体的要求，可以根据检测目标的特点，选择适合自己的技术来使用。

荧光和化学发光免疫分析方法荧光和化学发光免疫分析方法是一种常用的生物分析技术，广泛应用于生命科学研究、临床诊断和药物研发等领域。

本文将详细介绍荧光和化学发光免疫分析方法的原理、应用以及优缺点等方面。

首先，荧光免疫分析方法利用标记有荧光物质的抗体或抗原与待检测物相互作用，通过检测荧光信号来定量分析目标物。

其原理是当荧光标记物被激发后，会发射出特定波长的荧光信号，利用荧光光谱仪测量荧光强度来确定目标物的浓度。

荧光免疫分析方法具有高灵敏度、高选择性和多样性的优点，可用于检测蛋白质、核酸、细胞等生物分子。

化学发光免疫分析方法则是利用特定的化学反应产生荧光信号来检测目标物。

常用的化学发光免疫分析方法有酶免疫分析和化学发光免疫分析。

在酶免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与待检测物相互作用后，加入底物，酶催化底物发生化学反应产生荧光信号。

而化学发光免疫分析则是通过特定的化学反应产生激发态分子，激发态分子发生无辐射跃迁产生荧光信号。

化学发光免疫分析方法具有高灵敏度、快速、稳定性好的特点，常用于临床诊断和药物研发等领域。

荧光和化学发光免疫分析方法在生命科学研究中有广泛的应用。

例如，在蛋白质研究中，可以利用荧光免疫分析方法检测蛋白质的表达水平、相互作用以及酶活性等。

在细胞研究中，荧光免疫分析方法可以用于检测细胞的分子分布、内源性蛋白质的表达和细胞信号传导等。

此外，荧光和化学发光免疫分析方法还可以用于检测病原体、药物残留和环境污染物等。

荧光和化学发光免疫分析方法具有许多优点。

首先，这些方法具有高灵敏度，可以检测到非常低浓度的目标物。

其次，这些方法具有高选择性，能够在复杂的样品中准确地检测目标物。

此外，荧光和化学发光免疫分析方法还可以实现高通量分析，节省时间和成本。

然而，荧光和化学发光免疫分析方法也存在一些缺点。

首先，荧光信号受到背景干扰的影响，可能导致误差的产生。

其次，荧光标记物的稳定性较差，容易受到光照和温度等因素的影响。

时间分辨免疫荧光与化学发光法、酶联免疫法测定乙肝标志物的比较摘要目的: 比较化学发光免疫测定（CL）、酶联免疫（EIA）与时间分辨免疫荧光（TRFIA）三种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。

方法: 用上述三种方法的检测试剂及仪器对189例临床血清标本分别进行检测，然后进行结果分析。

结果: 三者对乙肝表面抗原的检测灵敏度均达到了0.1ng/ml。

对HBcAb的测定，以CL的灵敏度最高，ELISA最低。

对表面抗体、E抗原及E抗体的检测，相互符合率均在95%以上，但对核心抗体的检测符合率，TRFIA与CL为83.23%，TRFIA与EIA为85.19%。

结论: 三种方法的检测性能相差不大，但操作性各有特点，应按各实验室具体情况加以选择。

关键词：化学发光法，酶联免疫试验，时间分辨荧光免疫测定本文作者:肖征周薇薇白立彦赵莉萍parison of chemiluminescence, ELISA and time-resolved fluoroimmunoassay in detecting Hepatitis B markers肖征，副主任医师，副教授周薇薇，主管技师白立彦，主管技师赵莉萍，主管技师解放军总医院微生物科，100853Zheng Xiao, Weiwei Zhou, Liyan Bai, Liping ZhaoGeneral Hospital of PLA, Beijing, 100853 PRCAbstractSubject:To pare three deferent assays to see their abilities in detecting hepatitis B markers.Methods：By using Chemiluminescence (CL), ELISA and Time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA), 189 serum samples were tested for hepatitis B markers, then the results were analyzed.Results:The three assays all can detect as low as 0.1ng/ml of HBsAg. But in HBcAb, The CL showed the highest sensitivity, ELISA showed the lowest sensitivity. The coincidences of the three methods in detecting HBsAb, HBeAg, and HBeAb are normally above 95%, but for HBcAb, the coincidence was 83.23% between TRIF and CL, and 85.19% between TRIFA and EIA.Conclusion:There were not much difference among these three methods regarding their abilities in detecting hepatitis B markers, but the maneuver flexibilities of each method differed a lot. One should consider his own lab's situation before making choice.Key words:chemiluminescence, ELISA, time-resolved fluoroimmunoassay自二十世纪七十年代以来，许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测。

多功能荧光化学发光免疫仪测定原理
该仪器的测定原理基于免疫学反应的核心原理，即抗原与抗体的特异
性结合。

免疫学试剂盒中的抗原会与样品中的抗体特异性结合，形成抗原
-抗体复合物。

该复合物随后与含有分子标记物的特异性抗体结合，形成
多肽复合物。

仪器中的化学发光介质会释放能量激发化学反应产生的氧化物，这些
氧化物与触发剂共同作用的过程中释放出光。

这种光的发光强度与氧化物
的浓度成正比，因此可以通过测量发光强度来定量测定氧化物的浓度。

多功能荧光化学发光免疫仪利用荧光技术来激发样品中的分子标记物
产生荧光。

在荧光激发器的作用下，样品中的分子标记物被激发到高能态。

当它们复原到基态时，会以荧光的形式释放出能量并发射出特定波长的光。

荧光发射的强度与标记物的浓度成正比，因此可以通过测量荧光强度来定
量测定标记物的浓度。

多功能荧光化学发光免疫仪通过光学系统来接收和测量发射的光。

光
学系统包括一个光导纤维和一个光电倍增管。

光导纤维将发射的光传输到
光电倍增管中，光电倍增管通过适当的电路将光电信号转换为电信号。

然后，电信号经过放大和转换后，被送入计算机进行信号处理和结果分析。

总之，多功能荧光化学发光免疫仪是一种通过结合化学发光和荧光技
术来检测和定量分析免疫学试剂盒中的分子标记物的仪器。

它的测定原理
基于免疫学反应的特异性结合和化学发光、荧光产生的原理。

通过测量发
光或荧光的强度，可以获得分子标记物的浓度信息。

该仪器的广泛应用可
以为医学研究和临床诊断提供强大的实验工具。

荧光和化学发光免疫分析方法免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应，应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。

由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。

本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。

一、免疫免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。

免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。

特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制，针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体，只能对同一种抗原发挥免疫功能。

而对变异或其他抗原毫无作用。

1、抗原1.1抗原的定义抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答（免疫原性），并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质（免疫反应性）。

抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上。

1.2抗原的分类完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。

半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。

如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性，1.3抗原的性质决定簇是指抗原分子表面的基团，它直接决定免疫学反映的特异性。

抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。

因此，抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。

2、抗体2.1抗体的定义抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。

2.2抗体的结构抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。

一、实习背景为了进一步了解检验科发光技术，提高自己的专业技能，我于20XX年X月进入某三甲医院检验科进行为期一个月的发光实习。

在这一个月的时间里，我跟随检验科发光组的老师们学习，掌握了发光技术的基本原理、操作流程及注意事项，并对临床检验中常见的发光项目有了更深入的了解。

二、实习内容1. 发光技术的基本原理发光技术是一种利用荧光物质在特定条件下发出荧光的现象，广泛应用于临床检验、病理诊断等领域。

本次实习中，我学习了荧光免疫技术、化学发光免疫技术等发光技术的基本原理，了解了荧光物质、激发光源、检测仪器等相关知识。

2. 发光技术的操作流程在实习过程中，我跟随老师们学习了发光技术的操作流程，包括样本处理、试剂配置、仪器操作、结果分析等环节。

以下列举几个典型项目的操作流程：（1）乙肝五项检测：首先，对样本进行离心处理，分离血清；然后，根据试剂说明书进行试剂配置；接着，将配置好的试剂加入样本中，放入化学发光仪进行检测；最后，根据仪器显示的结果进行判断。

（2）肿瘤标志物检测：同样，对样本进行离心处理，分离血清；根据试剂说明书进行试剂配置；将配置好的试剂加入样本中，放入化学发光仪进行检测；最后，根据仪器显示的结果进行判断。

3. 发光项目的注意事项在实习过程中，我了解到发光项目的注意事项，包括：（1）样本处理：样本采集、处理过程中要严格遵守无菌操作规程，避免污染。

（2）试剂配置：严格按照试剂说明书进行试剂配置，注意试剂的保存条件。

（3）仪器操作：熟悉仪器操作流程，确保检测结果的准确性。

（4）结果分析：结合临床知识，对检测结果进行分析，为临床诊断提供依据。

三、实习收获1. 提高了专业技能：通过本次实习，我对发光技术有了更深入的了解，掌握了发光项目的操作流程和注意事项，提高了自己的专业技能。

2. 增强了团队协作能力：在实习过程中，我学会了与同事们相互配合、共同完成工作任务，增强了团队协作能力。

3. 丰富了临床知识：通过学习发光项目，我对临床检验有了更全面的认识，为今后从事临床检验工作打下了基础。

化学发光仪工作原理测定技术继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）之后发展的一项新兴测定技术。

由于这种测定具备很高的特异性和很小的干扰，因此，如同RIA、FIA等一样利用免疫反应的特异性和化学发光本身的信号特异性形成了目前所说的化学发光免疫测定（CLIA）技术。

工作原理：化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器。

将定量的患者血清和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结合物和固相载体上的抗体特异性结合。

分离洗涤未反应的游离成分。

然后，加入鲁米诺Luminol发光底液，利用化学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能量以光子的形式释放。

此时，将微孔板置入分析仪内，通过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔的光子数。

样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学模型进行定量分析。

最后，打印数据报告，以辅助临床诊断。

产品参数：测量系统：单光子计数器（PMT）样品形式：96孔微孔板光谱范围：300～700nm检测时间：0.1～100S/孔检测速度：0.1 秒/孔时小于3分钟每96孔孔间干扰：< 1×10－6本底噪声：0RLU—100RLU/秒检测范围：0RLU—2.5×107RLU/秒灵敏度：1×10-22mol/孔重复性:CV<3%功率:小于等于300瓦数据接口：RS232串行口或USB通信口工作环境：0℃—45℃，最大相对湿度85％工作电压：220V±10% 50HZ±1HZ试剂自动加样器(为选配)数量：0,1,2(可升级)加样体积：20-300μL,最小步进1μL加样速度：多于180个测试/6分钟加样精度：20μL ±1%50μL ±0.4%100μL ±0.2%200μL ±0.1%300μL ±0.067%加样模式：1个加样器孔孔随机任选2个加样器正向反向起始加样加样泵及管线: 原装进口耐酸碱四.产品特点：1、可以选用试剂自动加样器可选配试剂自动加样器，免去发光底物人工加样程序,提高检测精度2、远程网络诊断和远程数据交互专门为出口型仪器配套网上硬件监控诊断系统，并且实现网络远程**作仪器和无损数据交换，方便产品技术支持和服务。

都在这⼉！24款全⾃动化学发光仪⼤盘点！器械之家医疗器械媒体报道先锋分享专业医疗器械知识关注来源：体外诊断⽹本⽂主要针对以下24款最新化学发光分析仪做⼀个介绍：01罗⽒最新全⾃动化学发光分析仪cobas e 801电化学发光免疫分析仪：cobas e 801，单模块即可提供48个试剂通道，检测速度达300测试/⼩时，并可实现1-4个模块的灵活拓展，满⾜实验室多种需求。

cobas®8000系统最多可配置4个cobas e 801模块，提供⾼通量的免疫综合解决⽅案；最多可提供192个试剂通道，每⼩时进⾏1,200个测试，极⼤缩短了样本周转时间。

cobas e 801电化学发光免疫分析仪cobas®8000 e 801/e 801/e 801/e 80102雅培最新全⾃动化学发光分析仪雅培全新⼀代诊断产品Alinity ci⽣化免疫⼀体机：Alinity ci是雅培全新⼀代Alinity™家族中的⼀员。

其中“Alinity c”是⽣化诊断模块，⽽“Alintiy i”则是免疫诊断模块。

此外，Alinity™诊断系统还包括⾎液学、⾎液筛查、分⼦诊断、床旁检测、信息化系统[ii]等关键的实验室学科，能够连接并整合雅培各类解决⽅案。

⽬前最多4模块的Alinity iiii，速度⾼达200*4=800速每⼩时，也就是单个Alinity i模块，检测速度为200测试/⼩时。

Alinityci⽣化免疫⼀体机Alinity iii03西门⼦Atellica IM 1600全⾃动化学发光免疫分析仪Atellica IM 1600全⾃动化学发光免疫分析仪的检测速度可达440测试/⼩时，最多可连接3台仪器，最⾼速度可达1320测试/⼩时。

除了显著提升的检测速度，西门⼦医疗通过先进的⼯程学设计，提升了检测系统的稳定性。

例如内置温度和湿度控制单元，确保反应环境温湿度恒定；采⽤兆级清洗减少“噪⾳”，提升反应特异性。