浙八味元胡的提取分离研究1
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理化检验-化学分册PTCA(PA RT B:CH EM.ANA L)2006年第42卷8试验与研究FTIR聚类分析结合差热分析法应用于中药材延胡索表征的研究成则丰,李丹婷,李花琼,程存归*(浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江省固体表面反应化学重点实验室,金华321004)摘 要:采用傅里叶变换红外光谱法(FTIR)对不同品种的大叶、小叶延胡索及非正品延胡索进行了直接测定,并用FTI R聚类分析并结合差热分析法(DTA)对延胡索正品的不同品种及与非正品的亲缘关系进行了研究。
FT IR聚类分析结果显示5个样品分为4组,大叶、小叶延胡索为一组,齿瓣元胡、东北元胡和土元胡各为一组;差热分析结果显示正品延胡索品种与非正品延胡索的DTA曲线有很明显的区别。
所提出方法可有效地鉴别亲缘关系相近的中药材植物。
关键词:红外光谱法;差热分析;聚类分析;延胡索;鉴别中图分类号:O653.33 文献标识码:A 文章编号:1001-4020(2006)08-0601-03S TUDY ON T HE CHA RACT ERIZA TION OF CORYDAL IS Y A N HUSUOBY FTIRS WITH CLUST ER ANA LYSIS AND BY DTAC HENG Ze-feng,LI Dan-ting,LI Hua-qiong,C HENG C un-gui(Zhej iang P rov incial K ey Laboratory of Chemistry of Solid S ur f ace Reaction,College of Chemistryand L i f e Science,Z he jiang N ormal University,J inhua321004,China)A bstract:Fo urier t ransfo rm infra red spectr ometry(F T IRS)w as applied to the direct de te rminatio n o fdiffe rent varieties of the big and small leaf ty pes of Cory dalis y anhusuo a nd their unqualified species.In the fur ther study of kindredship be tween different v arie ties of qualified a nd unqualified Cory dalis y anhusuo,in addition to FT I RS/Cluster analy sis,differential therma l ana ly sis(D T A)w as used simultaneously.Five samples of qualified and unqualified Cory dalis yanhusuo,i.e.the big(a)and small leaf(b)ty pes o f Cory dalis y anhusuo,the Cory dalis humosa M igo l(c),the Cory dalis turtschaninovi l Bess(d)and the cory dalis ambig ua Champ.et Schltd.v ar.amur ensis M ax im(e),we re taken in the experiments.A s sho w n by the results of Cluster Analy sis,the fiv e sample s mentio ned abov e w ere separ ated into4g roups at the distance matrix lev el of0.006;a clo se kindredship w as show n by the cluste ring of(a),(b)and(c)a t the distance mat rix level o f0.007;and clustering of(d)and(e)w as obse rved at distance matrix level o f0.013.T he results of DT A showed that obvious diffe rences wer e obser ved among the DT A curves o f the5sample s.T he pro po sed method w as prov ed to be an effectiv e w ay to identify traditio na l chine se medicinal plants of close kindredship.Keywords:Fo urier t ransfo rm inf rared spectrome try;Differential thermal analy sis;Cluster analysis;Cory dalis yanhusou;Ide ntificatio n 延胡索(Rhizo ma Co rydalis)为罂粟科植物,又收稿日期:2006-02-22基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(301468)作者简介:成则丰(1981-),男,浙江上虞人,硕士研究生,主要 从事天然产物化学、有机波谱分析的研究。
元胡镇痛作用小考李文萍【摘要】通过整理汇总元胡的古代文献记载,现代化学成分、药理作用、炮制及临床应用研究等与止痛相关的文献,对元胡的镇痛作用进行简要综述,以期为今后的临床应用提供参考.%Analgesic effects of YuanHu (corydalis tuber) were briefly reviewed through sorting out and collecting ancient literature of YuanHu, the related literature about analgesia in modern chemical composition, pharmacological action, processing, clinical study and so on to provide references for clinical application.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2012(025)002【总页数】3页(P108-110)【关键词】元胡;镇痛;综述【作者】李文萍【作者单位】甘肃省中医院,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R286元胡,又名玄胡、延胡、延胡索,本名“延胡”,宋朝时因避宋真宗赵延名讳而改为“玄胡索”,清代又避康熙大帝玄烨名讳改为“元胡索”,一直延用至今[1],为罂粟科多年生草本植物延胡索的块茎,我国大部分地区均有分布,主产于浙江省,为“浙八味”之一。
味辛、苦,性温,入肝经、胃经,有活血散瘀,行气止痛之功。
元胡多用于胸胁、脘腹疼痛、经闭通经、产后瘀阻、跌扑肿痛等。
现代临床多用于各种疼痛、心血管疾病等。
元胡始载于《开宝本草》,该书言其:“主破血,产后诸病因血者,妇人月经不调,腹中结块,崩中淋露,暴血,冲上,阴损下血,或洒摩及煮服。
”《汤业本草》载其:“治心气,小腹痛,有神”。
《日华子本草》云元胡“除风,治气,暖腰膝,止暴腰痛,破症癖朴损瘀血,落胎”[2]。
延胡索药材HPLC指纹图谱研究程林;浦锦宝;郑军献;梁卫青;胡轶娟;魏克民【摘要】Objective To establish the HPLC fingerprint of Corydalis yanhusuo. Methods Thermo hypersil GOLD C,,( 250mm x 4.6mm,5.0μm)was used with the mobile phase methanol and 0. 1% phosphoric acid(pH5.0). Flow rate was at l.0ml/min; detecting wavelength was at 280nm; temperature was at 30℃ and the chromatography was recorded in 108 minutes. Results HPLC - fingerprint of Corydalis yanhusuo was established, which contained 23 common peaks. Conclusion The method can be used as a quality control method for Corydalis yanhusuo.%目的应用RP - HPLC建立延胡索的指纹图谱.方法Thermo hypersil GOLD C18(250.0mm×4.6mm,粒径5.0μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(pH5.0)梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长为280nm,柱温30℃,记录时间:108min.结果获得了该药材的HPLC指纹图谱,含有共有峰23个.结论本方法样品处理简便,重复性好,可用于延胡索药材的质量控制.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2011(040)011【总页数】4页(P86-89)【关键词】延胡索;HPLC;指纹图谱【作者】程林;浦锦宝;郑军献;梁卫青;胡轶娟;魏克民【作者单位】310007 杭州,浙江省中医药研究院;310007 杭州,浙江省中医药研究院;310007 杭州,浙江省中医药研究院;310007 杭州,浙江省中医药研究院;310007 杭州,浙江省中医药研究院;310007 杭州,浙江省中医药研究院【正文语种】中文延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥块茎,具有活血、利气、止痛的功效,用于治疗胸肋、脘腹疼痛,经闭痛经,产后瘀阻,跌打肿痛等症[1,2]。
中药延胡索研究进展李㊀凯ꎬ杨㊀靖ꎬ彭晶晶ꎬ芦夏阳ꎬ曹晓燕(陕西师范大学西北濒危药材资源开发国家工程实验室ꎬ药用资源与天然药物化学教育部重点实验室ꎬ陕西西安㊀710119)㊀收稿日期:2018 ̄03 ̄06㊀㊀修回日期:2018 ̄03 ̄26㊀基金项目:陕西省社发领域重点项目(2017ZDXM-SF-005)ꎻ中央高校基本科研业务专项资金项目(GK201706004)ꎻ国家重点研发计划中医药现代化研究重点专项(2017YFC1701300)ꎻ陕西省社发攻关项目(2017K14-03-01)ꎮ㊀第一作者简介:李凯(1994 ̄)ꎬ男ꎬ湖北黄冈人ꎬ在读硕士研究生ꎮ㊀通信作者:曹晓燕(1975 ̄)ꎬ女ꎬ副教授ꎬ博士ꎬ硕士生导师ꎮ摘㊀要:延胡索是我国常用中药材ꎬ应用历史悠久ꎬ在诸多本草著作中均有记载ꎬ具有活血㊁利气㊁止痛等功效ꎮ近年来ꎬ因其广泛的药理作用ꎬ使用量逐年增大ꎬ受到广泛关注ꎮ本文就延胡索的繁育技术㊁栽培管理㊁炮制以及药理等方面的国内外研究进展作简要综述ꎬ以期为延胡索的进一步深入研究提供参考ꎮ关键词:延胡索ꎻ繁育技术ꎻ栽培管理ꎻ炮制ꎻ研究进展㊀㊀延胡索又名元胡㊁玄胡等ꎬ是我国传统中药材ꎬ为罂粟科紫堇属多年生草本植物延胡索(Co ̄rydalisyanhusuoW.T.Wang)的干燥块茎[1]ꎮ与白术㊁白芍㊁浙贝母㊁杭白菊㊁玄参㊁笕麦冬㊁温郁金并称 浙八味 ꎮ经明朝产地变迁后ꎬ现主要分布于浙江㊁安徽㊁湖北㊁河南等地[2]ꎬ陕西㊁甘肃等地也有分布ꎮ«本草纲目»中记载其 能行血中气滞ꎬ气中血滞ꎬ专治一身上下诸痛 [3]ꎬ在东亚地区被广泛用于治疗胸胁㊁脘腹疼痛㊁经闭通经㊁产后瘀阻㊁跌扑肿痛等ꎮ近年来ꎬ关于延胡索的研究报道越来越多ꎬ而且其销量也与日俱增ꎮ本文对近年关于延胡索在繁育㊁栽培㊁炮制等方面的研究进行总结ꎬ以期为后期开展延胡索的研究提供参考和依据ꎮ1㊀延胡索繁育技术延胡索是东亚地区常用的大宗中药材品种ꎬ具有活血㊁利气㊁止痛等功效ꎬ随着中医药技术走出国门ꎬ汉方制剂的使用越来越广泛ꎬ并且由于其止痛作用效果显著ꎬ并无成瘾性等原因ꎬ延胡索的市场需求量不断增加ꎬ出口量也逐年增大ꎮ从2002年延胡索价格出现低谷后ꎬ其主产区面积逐步减小ꎬ加上南方工业发展以及其他经济作物的冲击ꎬ延胡索的生产面积不断缩减ꎬ全国延胡索主产区已经转移到浙江磐安以及陕西城固等地区ꎮ近年来延胡索价格稳中有升ꎬ随着延胡索越来越多的药理作用被发现ꎬ其临床应用也越来越广泛ꎬ市场前景非常广阔ꎮ因此对于延胡索的繁育技术的探索是十分必要的ꎮ延胡索虽然生产上主要采用子元胡作为种茎进行无性繁殖ꎬ但关于种茎繁殖的研究报道较少ꎮ高普珠等[4]用聚类分析法将延胡索块茎分级ꎬ播种ꎬ测定株高㊁总叶片数等主要生长指标ꎬ结果发现用中块茎(1.70cmȡ直径ȡ1.20cm)播种的延胡索长势最旺ꎬ延胡索块茎最大ꎮ刘彩霞等[5]通过相关分析和主成分分析确定了延胡索种茎的分级指标ꎬ在生长期测定延胡索植株的生长指标㊁光合效率及产量参数ꎬ收获后室内测定延胡索药材有效成分含量ꎬ确定净度和最大直径为延胡索种茎的分级指标ꎬ初步确立了延胡索种茎的质量分级标准ꎮ郭聪聪等[6~7]研究发现ꎬ延胡索种子吸胀时间较长ꎬ种皮透水性不良ꎬ虽然由于种子内部含有抑制萌发的物质导致延胡索种子具有休眠期ꎬ但可以通过层积方法来解除其休眠期ꎬ室温沙藏是较好的贮藏方式ꎮ实验证明ꎬ当温度为15ħꎬGA3浓度为1500mg L-1时能最大效率的促进延胡索种子萌发ꎬ并且2000Lx的光照强度更有利于延胡索种子的萌发ꎮ胡珂等[8]通过采集野生延胡索种子在不同条件下贮藏ꎬ发现不同的贮藏条件对延胡索种子的发育有不同影响ꎬ层积后种子发芽率最高ꎬ可达92%ꎬ而干藏种子完全丧失生命力ꎬ且只有经过层积处理的种子才能形成完整的胚ꎮ植物组织培养快速繁殖具有培养周期短㊁不受地区季节限制㊁投资少效益多等优点ꎬ可短时间大量繁殖ꎬ解决有些植物产种子少等问题ꎬ目前有关延胡索组织培养方面的研究较少ꎮ李安生等[9]以齿瓣延胡索的花蕾为外植体ꎬ诱导愈伤组织ꎬ进而形成胚状细胞团块并分化出胚状体ꎬ成功39 陕西农业科学2018ꎬ64(06):93-96㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ShaanxiJournalofAgriculturalSciences筛选出最佳继代和分化培养基MS+0.5mg L-1BA+0.2mg L-1NAAꎮ张东向[10]研究发现ꎬ在MS培养基添加2.0mg L-12ꎬ4-D和1.0mg L-1BA不仅有利于干物质积累ꎬ而且可显著提高延胡索乙素含量ꎻ蔗糖不仅可提高培养物鲜重ꎬ而且与半乳糖组合可显著促进干物质积累和延胡索乙素水平的提高ꎮ2㊀延胡索的栽培管理延胡索主要分布在长江中下游丘陵地带ꎬ分布面积不断减少ꎬ不同种群的样品中生物碱含量存在差异ꎮ一些野生种群的主要生物碱种类高于栽培种ꎬ对育种具有重要意义[11]ꎮ延胡索的栽培周期主要经过土地准备㊁种子挑选㊁播种㊁施肥㊁病虫害防治㊁除草及清沟排水㊁迟缓枯苗期技术㊁适时收获等过程[12]ꎮ延胡索对种植地方的要求是地势较高㊁光照强㊁排水良好㊁土层深厚的砂质壤土ꎮ目前主要种植的是优质㊁高产㊁抗性强的大叶型元胡良种 浙胡一号 [13]ꎮ延胡索是喜肥的植物ꎬ所以在生长的过程中要做到适施基肥㊁重施腊肥㊁看苗施春肥[14]ꎮ延胡索最主要的病虫害是霜霉病ꎬ目前应对的方法主要是喷洒农药ꎬ虽然能有效的解决病害问题ꎬ但是会影响延胡索的质量[15]ꎮ余顺慧㊁戚特等研究发现[16~19]ꎬ延胡索在Cd2+㊁Pb2+㊁Cr6+㊁Cu2+污染下生长会受抑制ꎬ生物量下降ꎬ影响延胡索抗氧化酶活性ꎬ叶绿素含量与可溶性糖的含量随着Cd2+㊁Pb2+㊁Cr6+㊁Cu2+浓度的增加而逐渐减少ꎬ而丙二醛MDA的含量逐渐增加ꎮ随着Cd2+㊁Pb2+㊁Cr6+㊁Cu2+污染浓度的增加ꎬ延胡索地下块茎对Cd2+㊁Pb2+㊁Cr6+㊁Cu2+的积累逐渐增多ꎮ生产上应该注意土壤中的Cd2+㊁Pb2+㊁Cr6+㊁Cu2+含量ꎬ栽培延胡索应尽量选择在Cd2+㊁Pb2+㊁Cr6+㊁Cu2+污染较少的土壤进行ꎮ外源K影响延胡索植株地上部分和地下部分Cu2+㊁Cr6+㊁Cd2+的积累ꎬ能明显缓解Cu2+㊁Cr6+㊁Cd2+对延胡索幼苗的抑制作用ꎻ另外适量外源Ca2+㊁N也能通过提高延胡索幼苗的抗氧化能力来缓解Cd2+㊁Cr6+对幼苗毒害和细胞染色体损伤[20~22]ꎮ高普珠等[23]通过对延胡索进行4种覆盖方式处理发现白地膜覆盖种植的延胡索块茎大ꎬ产量高ꎬ质量优ꎮ另外发现不同施肥水平对延胡索产量和品质影响很大ꎬN和P2O5对延胡索乙素的含量影响较大ꎬ最佳效益施肥量为:N-P2O5-K2O为14.77-9.22-15.81(kg 667m-2)ꎬ最佳效益产量为619.2kg 667m-2[24]ꎮ3㊀延胡索的炮制炮制具有加强药物效用ꎬ减除毒性或副作用ꎬ便于贮藏和便于服用等作用ꎮ延胡索采摘后经过一系列的加工才能更好的发挥疗效ꎮ产地加工时最佳加工方法是将新鲜延胡索切成4~5mm厚的片ꎬ在70~80ħ干燥或微波干燥至药典要求[25]ꎮ龙全江等[26]研究发现ꎬ经煮制加工的延胡索药材样品中3种生物碱的含量总体低于蒸制加工所得的延胡索药材ꎬ为延胡索药材炮制工艺的确定提供了依据ꎮ在一些产地加工中ꎬ为使产品品相好一些或利于贮藏等ꎬ常使用熏硫等方法ꎬ但研究表明ꎬ熏硫加工使延胡索药材中总生物碱含量降低ꎬ故应当改进这种产地加工方法[27]ꎮ研究发现ꎬ延胡索经过醋炙后ꎬ饮片中延胡索乙素的含量较醋炙前变化较小ꎬ但醋炙后延胡索煎剂中延胡索乙素的含量变化较大ꎬ溶出会显著增加ꎬ表明延胡索醋制后大量生物碱和醋酸反应生成生物碱盐ꎬ可提高煎出量ꎬ继而提高延胡索止痛作用[28~29]ꎮ江国荣等[30]将延胡索生品分别经醋炙㊁醋煮㊁醋烘㊁酒炙后ꎬ测定生物碱的含量ꎬ发现延胡索经不同炮制后生物碱含量均有所升高ꎬ说明临床上可以根据治疗需要ꎬ对延胡索采用醋烘㊁醋炙㊁酒炙等炮制方法来提高有效成分的含量ꎮ4㊀延胡索药理作用4.1㊀抗疼痛作用从延胡索中提取的化合物lev-corydalmine通过抑制脊髓中NMDA和mGlu1/5受体以及下游PKCγꎬERK1/2信号通路来减弱TCI诱导的骨癌疼痛[31]ꎮ延胡索另一提取物YHSꎬ能有效地减轻急性炎症和神经性疼痛ꎬ而不引起耐受ꎬ是在美国市场上销售的用于疼痛治疗的膳食补充剂[32]ꎮHuang等[33]研究发现ꎬ延胡索的镇痛作用涉及CB1受体的参与ꎬ表明延胡索为三叉神经痛提供了一种有效的治疗途径ꎮ4.2㊀抗依赖作用Zhu等[34]研究发现ꎬ延胡索可用于防止慢性药物依赖性复发ꎬ表明传统中药可以用来补充目前的吸毒成瘾ꎬ包括戒断和复发ꎮ另外ꎬ胃肠道损伤随多巴胺含量降低ꎬ胃和十二指肠D2R异常增高ꎬ通过延胡索和延胡索乙素治疗可逆转吗啡依赖[35]ꎮ4.3㊀其他作用研究表明ꎬ从延胡索中提取的五种生物碱49陕西农业科学2018年第64卷第6期(glaucineꎬdehydrocorydalineꎬcanadineꎬtetrahydro ̄coptisine和corydaline)都能够以低剂量抑制凝血酶诱导的血小板聚集[36]ꎮ延胡索提取物cana ̄dine对于酸性胃溃疡大鼠有积极的治疗作用[37]ꎮWu等[38]研究表明ꎬ延胡索对大鼠心肌梗死所致心力衰竭具有有益的作用ꎬ延胡索能够大大降低左心室/体重比ꎬ肺/体重比和显著抑制神经激素活化ꎮ延胡索和莪术协同具有很强的抗癌作用ꎬ两种草药提取物的组合物以3ʒ2(莪术至延胡索ꎻ简称E3Y2)的比率显示出最强的抗癌细胞增殖作用[39]ꎬ通过Westernblot检测ERK1/2ꎬp-ERK1/2和p-Rb的表达ꎬ发现E3Y2显著抑制p-ERK的表达ꎬ为莪术和延胡索的协同抗肿瘤作用提供了可信的分子基础ꎮ5㊀延胡索其他研究由于延胡索广泛的药理作用ꎬ临床应用十分广泛ꎬ药材产量不能满足用药需要ꎬ所以在部分地区将多种同属植物的块茎作延胡索使用或掺杂零余子等伪品[40]ꎮ因正品与伪品在有效成分含量方面具有很大的差异ꎬ使用非正品会对临床疗效产生巨大的影响ꎬ因此在鉴别方面需要十分注意ꎬ可以通过简单的性状鉴定㊁显微鉴定或是实验室条件下进行薄层色谱等鉴定加以鉴别ꎮ延胡索商品块茎越大ꎬ等级越高ꎮ研究表明ꎬ醇溶性浸出物㊁㊁延胡索乙素㊁延胡索甲素含量具有随块茎增加而减少的趋势ꎬ因此以直径大小划分延胡索等级的方法还有待商榷[41]ꎮ陈微娜等[42]通过对延胡索酸㊁碱水提物中生物碱含量比较ꎬ发现延胡索不同酸㊁碱提取物生物碱含量有较大差异ꎬ酸性提取物生物碱含量均高于碱性提取物ꎮ张智强等[43]采用CTAB法㊁改良CTAB法㊁SDS法㊁改良SDS法4种方法ꎬ对延胡索叶片及块茎进行了DNA提取ꎬ结果发现ꎬ改良的CTAB法适合延胡索叶片的DNA提取ꎬ而SDS法适合延胡索块茎的DNA提取ꎮLiao等[44]通过IlluminamRNA-测序ꎬ建立了延胡索的第一个转录组数据库ꎬ组装47ꎬ081个unigenesꎬ平均长度为489bpꎬ其中30ꎬ868个unigenes(65.56%)在四个蛋白质数据库中注释ꎬ在涉及各种生物碱生物合成的526个假定的unigenes中ꎬ共有187个被确定为参与生物合成苄基异喹啉生物碱(目前为止在延胡索中报道的唯一生物碱类型)的候选基因ꎮ延胡索遗传多样性分析结果表明ꎬ在居群水平上延胡索的遗传多样性低ꎬ在物种水平上遗传变异丰富ꎬ延胡索居群之间的遗传距离与其相应的地理距离呈显著的正相关关系ꎬ说明地理隔离在延胡索的目前居群的遗传分化中起重要作用[45]ꎮ6㊀总结对于影响延胡索产量和质量的外因研究较多ꎬ而内因研究较少ꎮ延胡索作为块茎繁殖的中药材ꎬ容易积累大量的病毒影响质量和产量ꎬ但是对延胡索所含病毒的研究基本空白ꎮ因此需要加强此方面的研究ꎬ提高栽培延胡索的产量和质量ꎬ以期缓解延胡索所面临的资源压力ꎮ延胡索不同炮制品的生物碱含量和种类存在差异导致临床药效的不同ꎬ但是具体的药理学作用机理还不甚了解ꎮ由于技术和延胡索自身的原因ꎬ延胡索的全基因组测序并没有完成ꎬ并且对于延胡索有效成分相关合成基因的研究也较少ꎬ希望未来加强生物技术方面的研究ꎮ随着延胡索药理药效研究的深入ꎬ延胡索的需求量会进一步加大ꎬ其相关研究也会受到更多学者的关注ꎮ本文只对延胡索的繁育技术㊁栽培管理㊁炮制以及药理等方面进行了综述ꎬ未对延胡索的种质基源㊁化学成分等方面进行综述ꎬ希望未来可以进一步加深学习ꎬ大量阅读相关文献ꎬ使对于延胡索的综述可以更加完善ꎮ参考文献:[1]㊀中华人民共和国药典委员会.中国药典(一部) 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快速溶剂萃取元胡中总生物碱的提取工艺
实验采用快速溶剂萃取仪研究元胡中总碱的快速溶剂萃取技术,通过正交试验优化提取
条件,以生物碱的含量为指标,考察了不同浸提液浓度、浸提温度、浸提时间、浸提次数、
液料比等因素,对元胡中生物碱的提取进行了系统研究。
一.实验器材
材料:元胡1.5kg。
试剂:甲醇(色谱纯),氯仿、乙醚、乙醇、冰醋酸(分析纯);实验用水为超纯水;
盐酸小檗碱(作生物碱标准对照品)
仪器: 高效液相色谱仪,加速溶剂萃取仪 烧杯5/100ml,50ml容量瓶5等
二.实验方法
1元胡预处理:
将元胡样品洗净、60℃烘干、粉碎过20目筛,储存备用。
副本:
不同萃取剂选择:甲醇,乙醇。0.1%HCL水溶液(硫酸、乙酸)。乙醚、氯仿。
2.1 元胡中总生物碱的定量方法
2.1.1 色谱条件[1]
色谱柱:HiQ sil C18W (4. 6 mm x 250mm, 5 μm)柱;流动相为甲醇—水—乙酸(28:70:
2),流速为1.0ml/min,柱温为35℃,检测波长280nm,检测时间110min。
2.1.2 HPLC工作曲线的制作[2]
精密称取3.7 mg盐酸小檗碱标准品,用乙醚定容至10 mL。精密量取对照品贮备液适
量,加水稀释为5个不同浓度的标准溶液,进样5 μl,以盐酸小檗碱峰面积对质量进行线性
回归。
2.2提取工艺设计
2.2.1 萃取剂浓度的选择[3]
用不同浓度的乙醚溶液为浸提液,分别按表1的条件进行浸提实验,水沉降处理后直
接进样,测得总生物碱含量。
表一
乙醚浓度(%) 总生物碱提取率(%)
30
40
50
60
70
2.2.2 正交实验分析[4]
在确定浸提液的基础上考察浸提温度、时间 ,次数以及液料比 ,各个因素对浸提效果
的影响,每个因素设立3个水平,见表2 。
以生物碱总含量为考察指标,采用L9( 34 )正交表安排实验,见表3 。
表2
水平
温度 (A) 次数 (B) 时间/min (C) 样品质量/g
(D)
1 60 2 5 1
2 70 3 10 3
3 80 4 15 5
表3
实验号
A B C D
总生物碱提
取率(%)
1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
提取
率
(%)
K1
K2
K3
R
K1,K2,K3 为平均值,R为极值。根据结果数值得出结论