畜肉中氟喹诺酮类药物残留操作指南

磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究1. 本文概述在当前食品安全和公共卫生领域，对动物源性食品中的化学药物残留进行有效监控是确保消费者健康的关键环节。

磺胺类药物和氟喹诺酮类药物作为广泛使用的抗菌剂，在畜牧业中的应用尤其普遍。

这些药物的不当使用或过量残留可能对人类健康产生严重威胁。

开发一种高效、灵敏的检测技术以监测和控制这些药物的残留水平显得尤为重要。

本文旨在研究并制备针对磺胺类和氟喹诺酮类药物的兔单克隆抗体，并通过这些抗体建立一种多残留检测技术。

通过使用现代生物技术手段，我们成功地制备了一系列高特异性和高亲和力的单克隆抗体。

这些抗体能够准确识别目标药物，并在后续的检测实验中显示出优异的性能。

本研究首先涉及了抗原的设计和合成，随后通过免疫学方法在兔体内产生相应的抗体。

通过筛选和优化，我们获得了一组性能最佳的单克隆抗体。

本文还将介绍基于这些抗体的多种检测平台，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫分析和免疫层析条带（Lateral FlowAssay, LFAS）等，以实现对磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的快速、准确检测。

通过本研究，我们期望为食品安全监管机构和相关行业提供一种新的技术手段，以更有效地控制和管理动物源性食品中的药物残留问题，从而保护公众健康并促进行业的可持续发展。

2. 材料与方法化学试剂：弗氏完全和不完全佐剂、辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗、蛋白质AG亲和层析柱等。

偶联载体蛋白：将合成多肽与载体蛋白（如BSA或KLH）偶联，制备免疫抗原。

免疫程序：描述免疫新西兰大白兔的具体步骤，包括免疫原的注射剂量、频率和途径。

杂交瘤细胞的筛选与克隆化：通过HAT选择性培养基筛选，有限稀释法进行克隆化。

单克隆抗体的生产与纯化：采用体外培养或小鼠腹腔注射的方法生产单克隆抗体，并通过亲和层析法纯化。

亲和力常数测定：利用表面等离子共振（SPR）等技术测定抗体与抗原的亲和力。

ELISA方法：建立磺胺类和氟喹诺酮类药物的多残留ELISA检测方法。

超 高效 液相 色谱一 串联质谱 法 同时测定 畜禽 肉中 ２ ７种磺胺及 喹诺酮 类药物 的残 留
华 孝成 杨 飞 萍 邵 歆 虞 贺 新 金 叶 舟
（ 温 州市农 产 品检 验、 ？ 贝 ４ 试 中心 ，温 州 ３ ２ ５ ０ １ ４ ）
摘 要 ：本 文建 立 了 超 高 效 液 相 色 谱 一 串联 质 谱 仪 同时 分 析 畜 禽 肉 中磺 胺 及 喹 诺 酮 类 共 ２ ７种 抗 菌 素 残 留 的 检 测 方 法
用 乙腈 提 取 样 品 中待 测 组 分 ，经 旋 转 蒸 发 浓缩 至 干 ，用 ｌ ｍ Ｌ１ ０ ％ 乙腈 一 ０ ． １ ％ 甲酸 水 溶 解 ，正 己烷 冷冻 离 心脱 脂 ．应 用Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ— ＭＳ ／ Ｍ Ｓ采 用 梯 度 洗 脱 进 行 色 谱 分 离及 多 反 应 监 测 质 谱 分 析 模 式 １ ０ ａｉ ｒ ｎ内 同 时 对 畜 禽 肉 中 ２ ７种 磺 胺 及 喹 诺 酮 用 外 标 法 进 行 定 性 和 定 量 测 定 。 分 别 对 鸡 肉 空 白基 质 进 行 ３个 水 平 （ ２ ． ０￣ ｇ ／ ｋ ｇ ，１ ０ ． ０￣ ｇ ／ ｋ ｇ ，２ ０ ． ０￣ ｇ ／ ｋ ｇ ） 的加 标 回收 试 验 ，其 回 收 率 为 ７ ０ ． Ｏ ％～１ ２ ２ ． ７ ％。３ 个 浓 度 的 添 加 回收 方 法 的相 对 标 准 偏 差 低 于 １ ７ ％ 。２ ７种 待 测组 分 以 最 低 统 计 检 出 限均 为 ０ ． ２ ｇ ／ ｋ ｇ ，定 量 限为 ０ ． ５￣ ｇ ／ ｋ ｇ 。该 方 法 样 品前 处 理 简 单 、快 速 、准 确 性 、重 复 性 好 。可 用 于 畜 禽 肉 中 ｌ ６种 磺 胺 及 ｌ １ 种 喹 诺 酮 类 药 物 残 留 的 日常 分 析测 定 关 键 词 ：超 高效 液 相 串联 质 谱 ；冷 冻 除 脂 ；磺 胺 ；喹 诺 酮 ；残 留

水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法的研究摘要：氟哇诺酮类药物因其具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便等特点，被广泛应用于兽药临床和水产养殖中。

水产品中氟喹诺酮类药物残留不仅会给动物性食品安全带来潜在隐患，也会对人类的健康及生存环境造成危害。

提供准确的水产品氟哇诺酮类药物多残留检测方法成为食品安全监测一项刻不容缓的任务。

本文对该类药物在水产品中的残留分析方法进行综述和合理的展望，旨在为进一步开展水产品中氟哇诺酮类药物残留研究和监测提供借鉴。

关键词：氟喹诺酮类药物残留；水产品；检测方法氟哇诺酮类（Fluoroquinofones，FFQs）是一类人工合成的广谱抗菌药，是第三代喹诺酮类药物，药物通过抑制细菌的DNA回旋酶，影响拓扑异构酶Ⅳ，干扰细菌的DNA复制而阻碍细菌DNA 合成，最终导致细菌死亡而抗菌。

此类药物属吡酮酸衍生物，喹啉环的C-6位上有氟原子，C-7位上连接哌嗪基或吡咯基，加入氟原子后增加了其脂溶性，增强了对组织细胞的穿透力，因而吸收好，组织中药物浓度高，半衰期长，大大增加了抗菌谱和杀菌效果。

FQs药物具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便、不良反应小，以及价格低廉等特点，20余年来已成为发展最快的化学合成抗菌药物，在临床上广泛用于人类和动物的各种感染性疾病的治疗[1]，其主要有诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、单诺沙星和达氟沙星等。

随着氟喹诺酮类药在兽医临床和水产养殖中的应用，其残留问题已引起了广泛的关注[2]。

本文就水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法简要综述。

1、水产品氟哇诺酮类使用现状随着我国水产养殖业的不断发展，抗生素在水产养殖业的应用越来越广泛，抗生素的应用有效地预防和控制了许多水产感染性疾病的发生、促进动物生长和提高饲料的利用率极大地促进了水产养殖业的发展。

氟哇诺酮类因抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便等特点近年来在水产养殖中大量使用。

而违规使用兽用抗生素、不执行休药期规定等，最终导致氟哇诺酮类在水产品体内残留超标。

兽药残留试验指导原则（征求意见稿）一、概述（一）定义与目的兽药在动物性食品中残留（简称兽药残留），是指兽药的原形或其代谢物在动物细胞、组织、器官或可食性产品（如奶、蛋）中的蓄积和贮存。

兽药残留对消费者可能产生毒害作用，从而影响人类的健康和消费安全。

为保障动物性食品安全，特制定本指导原则。

（二）适用范围凡申请在食品动物（如牛、羊、猪、禽、水产养殖动物等）使用的兽药均需进行残留试验，兽药残留试验必须在靶动物进行。

（三）兽药残留试验的主要内容1. 用于确定兽药在靶动物体内残留物的性质和量的代谢试验。

2. 用于建立兽药产品的休药期的残留标示物的消除规律试验。

3. 用于兽药残留消除规律研究的残留标示物检测方法的验证试验。

二、试验设计（一）用于确定兽药在靶动物体内残留物的性质和量的代谢试验1．概述首次用作兽药或改变靶动物且没有相关代谢研究资料的兽药需要进行此项试验。

一般使用放射性标记的兽药进行代谢试验。

如果有其他试验手段可以科学开展总残留测定试验，也可以不采用放射性标记的兽药。

所有试验必须遵守兽药非临床试验质量管理规范（GLP），所有涉及到放射性标记的兽药和其他基质材料必须遵守国家相关法规要求。

代谢试验提供的数据和资料包括：（1）总残留的消除试验，即给药后不同时间点采样的动物可食性组织中毒性作用的残留(Residues of toxicological concern)的消除数据；（2）主要代谢物的确定；（3）残留标示物的确定；（4）残留靶组织的确定。

2．总残留的消除试验一般在主要品种的靶动物体内进行，获得的试验数据有时候可以外推到次要品种的动物。

（1）放射性标记兽药一般选择使用14C标记，也可以使用3H、32P、15N或35S标记。

必须提供标记的位点，可以标记一个或多个位点。

标记物的化学纯度必须达到95％。

（2）动物及饲养处置必须是具有代表性的商业品种和靶动物群，要提供动物来源、体重、健康状况、年龄和性别等数据。

我国已开始重视动物性食品中的兽药残留问题,制订了各 种兽药残留的法律和法规,修订了《动物性食品中兽药残 留最高限量标准》,并开始建立了全国范围的兽药残留监 控体系。
第六章 兽药残留检测技术
第二节 样品前处理
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行 提取、净化、浓缩的过程。
样品前处理的目的是消除基质干扰、保护仪器、提高检 测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。
一、常见兽药
按用途分类
抗微生物药
抗寄生虫药 激素类药物
抗生素：青霉素、链霉素、氯霉素 抗菌药：磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类 抗病毒药：干扰素 抗蠕虫药 抗原虫药 杀虫药
生长促进剂
1、抗微生物药
抗微生物药是指对病原微生物(细菌、真 菌、支原体、病毒等)具抑制或杀灭作用, 主要有用于全身感染的抗生素、磺胺药及 其他化学合成抗菌药。
3. 硝基呋喃类药物
主用于抗菌消炎, 如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。
4. 抗寄生虫类药物
主要用于驱虫或杀虫, 如苯并咪唑、左旋咪 唑、克球酚、吡喹酮等。
而常用的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙硫 苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、 丁苯咪唑等。
5. 激素类药物
主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育 速度, 使用于动物的激素有性激素和皮质激 素。而以性激素(包括多种内源性性激素、 人工合成的类似性激素的类固醇化合物、 人工合成的具有性激素某些特性的非类固 醇化合物) 最常用, 如孕酮、睾酮、雌二醇、 甲基睾酮, 丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯 孕酮等。
兽药的危害
引起过敏、致畸、致突变及致癌等不良反 应。
立法
为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健 康,1984年在CAC的倡导下由联合国粮农组织(FAO)和世 界卫生组织(WHO)联合发起组织了食品中兽药残留立法 委员会(CCRVDF)。

畜产品药残检测中加标量的计算方法以农业部1025号公告—14—2008《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》为例说明。

标线线性范围：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液5ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，300ng/mL，500ng/mL；达氟沙星标准工作液1ng/mL，2ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，60ng/mL，100ng/mL。

V/mV1=2C均值(μg/kg)残留量计算公式：X=C均值1、选择加标点加标以选择标线上的点（不限）较方便计算，以恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液50ng/mL（达氟沙星标准工作液10ng/mL）来加标。

把加标点代入公式计算出加标后的残留量：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星残留量X=2C均值(μg/kg)=2×50(μg/kg)=100(μg/kg)达氟沙星残留量X=2C均值(μg/kg)=2×10(μg/kg)=20(μg/kg)2、加标量的计算（根据加标残留量加标）恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星100μg/kg=0.1μg/g，称取样品2g，总添加量为2g×0.1μg/g=0.2μg，需要2.0μg/ mL恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准液：0.2μg÷2.0μg/mL=0.1mL=100 uL；达氟沙星20μg/kg=0.02μg/g，称取样品2g，总添加量为2g×0.02μg/g=0.04μg，需要0.4μg/ mL达氟沙星标准液：0.04μg÷0.4μg/mL=0.1mL=100 uL。

3、实际加标后残留量的验算恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星2.0μg/ mL×0.1mL÷2g=0.1μg/g=100(μg/kg)达氟沙星0.4μg/ mL×0.1mL÷2g=0.02μg/g=20(μg/kg)4、回收率计算公式R=（C均值—C空白）÷Cs×100%C均值：阳性添加检测平均浓度(ng/mL)；C空白：加标基样检测平均浓度(ng/mL)；Cs：对照品加标点上机浓度(ng/mL)。

氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展张运尚，杜加茹，王伟东，樊剑鸣*（郑州大学公共卫生学院，河南郑州 450001）摘 要：氟喹诺酮类药物（FQS）是第3代喹诺酮类抗生素，具有良好的生物利用度和耐受性，不仅对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌作用，还具有抗真菌和抗病毒活性，因此被广泛应用于治疗畜牧动物养殖过程中的细菌性感染。

但当人类过多食用含有FQS残留的食品后，将会损害身体多个系统并引起细菌耐药性，因此建立灵敏度高、简便的检测方法十分必要。

本文综述了FQS残留的检测标准和常用的检测方法及优缺点，酶联免疫分析法（ELISA）具有灵敏度高、操作简便等优势，预测ELISA法在今后FQS残留检测中发挥重要作用。

关键词：氟喹诺酮类药物；药物残留限量；残留检测技术；酶联免疫分析法中图分类号：S816.7 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200516-05氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones，FQS）是第3代喹诺酮药物，其化学结构是在喹啉环的6位上加入了氟原子，7位上连有哌嗪基的一类衍生物，此特点使得原本亲脂性的吡酮类药物增加了适度的亲水性，同时降低了蛋白结合率，提高生物利用度[1-2]。

该类药物通过抑制细菌的DNA和RNA合成从而达到抑菌作用[3]。

相比第1代及第2代喹诺酮药物，FQS的抗菌活性明显增加，抗菌谱显著扩大，对革兰氏阳性菌（金葡球菌、链球菌、肺炎球菌）和革兰氏阴性菌（肠杆菌科、流感杆菌和奈瑟菌属）[4]以及一些衣原体、支原体和螺旋体均有抗菌作用[5]，因此被广泛应用在临床上治疗细菌感染性疾病。

FQS代表药物主要包括恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）、诺氟沙星（Norfloxacin，NOR）、达氟沙星（Danofloxacin，DAN）、氟罗沙星（Flero xacin，FLE）、沙拉沙星（Saraflaxacin，SFX）、依诺沙星（Enoxacin，EX）等。

2017年第11期喹诺酮类药物广泛应用于动物疾病的防治中，尤其在各种密集舍饲的大型养殖场中应用广泛。

在使用喹诺酮类药物养殖的过程中需要严格遵守投药量、投药期、休药期的相关规定。

只有经过严格的休药期，才可以使得暂时残留在动物体内的药物被代谢至完全消除或者降低到对人身体健康无害的浓度，保证人们的安全食用。

喹诺酮类药物残留的药物会对人体健康造成潜在的危害，为此世界各国都制定了相对严格的兽药残留标准。

目前，欧盟、中国及其他等国家制定的喹诺酮类药物在动物源性食品中的残留标准是地于100ng/mL 。

1样品的来源肉鸡鸡肉样品采集于不同的鸡肉食品加工厂，共41份。

2试剂与试剂盒喹诺酮类药物残留检测试剂盒，其主要包括：①预包被偶联抗原的酶标版（96孔）；②标准液：0ppb 、0.5ppb 、1.5ppb 、4.5ppb 、13.5ppb （各1mL ）、40.5ppb ；③高标准液：1ppm （1mL ）；④酶标记物（5.5mL ）；⑤抗体工作液（5.5mL ）；⑥底物液A （6mL ）；⑦底物液B （6mL ）；⑧终止液（6mL ）；⑨20×浓缩洗涤液（40mL ）以上各试剂在2～8℃保存NaH 2PO 4·12H 2O 、NaH 2PO 4·2H 2O 去离子水。

3样品的处理步骤实验器具必须洁净，使用一次性吸头，避免污染干扰实验结果。

配液1：0.02M PB 缓冲液称取0.44g NaH 2PO 4·2H 2O 和2.58gNaH 2PO 4·12H 2O 加500mL 去离子水溶解。

配液2：复溶液将2×复溶液用去离子水进行2倍稀释，用于样本的复溶。

（复溶液在4℃环境可保存一个月）。

取处理的鸡肉的上清，加入3mL 0.02M PB 缓冲液混合，混合30s ，取50μL 用于分析，将样本稀释倍数：4,检测下限：2ppb 。

4样品的ELSIA 检测步骤将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，室温放置30min 以上。

（三）达氟沙星
• 1、药动学 • 其特点是在肺组织的药物浓度可达血浆的5~7倍。内
服、肌注和皮下注射的吸收迅速，生物利用度高。 • 2、抗菌作用 • 本药的抗菌作用与恩诺沙星相似，尤其对动物的呼吸
道致病有良好的抗菌活性。
（三）达氟沙星
• 3、应用
• 本药适用于牛、猪、禽的敏感细菌和支原体所致各 种呼吸道感染性疾病，如牛的巴氏杆菌病、支原体 病；猪传染性胸膜肺炎、气喘病；禽败血支原体病、 大肠杆菌病、禽霍乱等。
癫痫患犬慎用。 • 3、肾功能不良患畜慎用。 • 4、喹诺酮类兽药内服适口性差，大多数动物减食，混
饲给药猪大多拒食。
八、主要喹诺酮类兽药物的应用
（一）恩诺沙星
• 1、药动学
• 大多数单胃动物内服给药后吸收迅速和较完全，成年反刍兽内服 给药的生物利用度很低，需采用注射给药。肌注吸收完全，除了 中枢神经系统外，几乎所有组织的药物浓度高于血液，这种分布 有利于全身感染和深部组织感染的治疗。本药通过肾和非肾代谢 方式进行清除，15%~50%的药物以原形通过尿排泄。恩诺沙星 在动物体内的代谢，主要是脱乙基成为环丙沙星。
二、喹诺酮类兽药种类
• 钙、镁、铁、铝等多价金属离子能与喹诺酮类药物 螯合，内服合用影响吸收。氟诺酮类药物能抑制咖 啡因、茶碱的代谢，可使后者的血药浓度异常，甚 至出现中毒的症状。
三、喹诺酮类药物抗菌作用
• 氟喹诺酮类为广谱杀菌性抗菌药，对革兰氏阳性菌、革兰氏 阴性菌、支原体、某些厌氧菌有效，如对大肠杆菌、沙门氏 菌、巴氏杆菌、克雷白杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌，嗜血杆 菌、波氏杆菌、丹毒杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、化脓 棒状杆菌和支原体等均敏感。对耐甲氧西林的金黄色葡萄球 菌、耐磺胺+TMP的细菌、耐庆大霉素的绿脓杆菌、耐泰乐 菌素或泰妙菌素的支原体也有效。

（四）分析步骤
2.试料的保存 -20℃以下保存。 3.测定步骤 （1）提取 称取试样5 ±0.05g，于50mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20mL，涡动2min， 4000r/min离心5min，取上清液于100mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20mL，重复提取一 次，合并两次提取液。
（四）分析步骤
硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变。国际食品法 典委员会(CAC)、中国和欧美等大多数国家规定禁止使用此类兽药，在动物性农产品 和饲料中不得检出。硝基呋喃类药物残留检验方法有HPLC法、液质联用法、酶联免 疫法等。酶联免疫法可检测多种硝基呋喃类药物，常用于硝基呋喃类药物残留快速 筛选检验。现以SN/T 3380-2012出口动物源食品中硝基呋喃代谢物残留量的测定为 例介绍酶联免疫法。
2. 乙酸乙酯：色谱纯。 3. 乙腈：色谱纯。 4. 甲醇：色谱纯。
（二）试剂和材料
5. 盐酸。 6. 正已烷。 7. 甲酸：色谱纯。 8. 氨水。 9. MCX柱：60mg/3mL或者相当。 10. 0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL 。 11.0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。
一、原理
试料中残留的磺胺类药物，用乙酸乙酯提取，0.1mol/L盐酸溶液转换溶剂， 正已烷除脂，MCX柱净化，高效液相色谱-紫外检测法测定，外标法定量。
（二）试剂和材料
除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一 级水。
1.磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、苯酰磺胺、磺胺间甲氧嘧啶、磺 胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺异恶唑、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺吡唑对照品：含 量≥99%；磺胺恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶：含量≥98%。

附件3兽药残留检测方法及残留限量 表1 畜禽动物及其产品残留检测方法及残留限量MetronidazolePig/Muscle（1025号公告-2-2008修订版）ND地塞米松Dexamethasone猪/肉Pig/Muscle液相色谱质谱法LC-MS-MS（1031号公告-2-2008）液相色谱质谱法LC-MS-MS（GB-T 21981-2008）0.5（定量限）0.75磺胺类高效液相色谱法HPLC（GB 29694-2013）Sulphonamides液相色谱质谱法LC-MS-MS（1025号公告-23-2008）四环素类高效液相色谱法HPLC；Tetracyclines液相色谱质谱法LC-MS-MS（1025号公告-12-2008）头孢噻呋Ceftiofur氟喹诺酮类Fluoroquinolones硝基呋喃类代谢物Nitrofuran Metabolites （AOZ、AMOZ、AHD、SEM）1不得检出ND液相色谱质谱法LC-MS-MS（1025号公告-2-2008修订版）猪/肉Pig/Muscle猪/肉Pig/Muscle猪/肉Pig/Muscle猪/肉Pig/Muscle不得检出ND 猪/肉Pig/Muscle猪/肉Pig/Muscle猪/肉Pig/Muscle100液相色谱质谱法LC-MS-MS（781号公告-4-2006）0.5地美硝唑/甲硝唑Dimetridazole/Metronidazole100(定量限)1000高效液相色谱法HPLC （1025号公告-14-2008）20100 20100 15100替米考星Tilmicosin高效液相色谱法HPLC（1025号公告-10-2008）10高效液相色谱法HPLC（1025号公告-13-2008）。

GB 31658.17中问题
GB 31658.17-2021食品安全国家标准动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱－串联质谱法。

本文件规定了动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于牛、羊、猪和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中四环素类(四环素、金霉素、土霉素、多西环素)、磺胺类(乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、酞磺胺噻唑)和喹诺酮类(诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星、喹酸、氟甲喹)药物残留量的测定。

GB 31658.17-2021《动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物多残留量的测定》，采用同一方法，可在9分钟内完成4种四环素、19种磺胺、13种喹诺酮，共计36个目标物的检测。

快速高效，推动了多兽残检测标准的进展，可谓是36个新标准中的一大亮点。

喹诺酮类药物的极性也偏大,否则提取效果不理想。

离心速率较一些老标准有大幅提高。

食品中兽药残留的检测技术（常用版）(可以直接使用，可编辑完整版资料，欢迎下载）一、食品中兽药残留的检测技术我国食品安全检测主要应用技术的研究及现状食品工业科技VOL24，（12），2003张志洁林清玉现状分析随着集约化畜牧业的发展，兽药的作用范围也在扩大，有的药物如抗生素、磺胺药、激素等已广泛用于促进畜禽的生长、减少发病率和提高饲料利用率、促进同期发情。

在饲料添加剂中，抗生素用量占有相当大的比重。

兽药的广泛应用使畜牧业在增产的同时，也带来了兽药残留的问题。

八十年代，欧美等国已开始建立了兽药残留检测体系，并制定了较为完善的兽药用量、休药期及有关法律法规。

我国兽药残留检测体系尚不够完备，时常发生因畜产品中药物残留超标而被外国拒绝进口的事件，给我国农产品出口造成很大的经济损失。

“十五”期间，我国将重点加强兽药监察体系和兽药残留检测体系的建设。

农业部每年投入1755 万元用于兽药残留监控，发展了近75 种单个兽药在饲料监控和动物源食品中残留的测定方法。

国家质检总局每年也投入大量资金，针对出口和欧盟监控的需要，建立一些兽药残留的检测方法。

但对于某些禁用兽药（主要是")兴奋剂和激素），其分析方法的灵敏度尚不能满足需要，或大量监控的成本难以承受。

克伦特罗（瘦肉精）的检测方法欧盟和美国FDA立法禁止克伦特罗在肉用畜禽中的使用;规定牛和马肝中的最大残留限量必须小于0.5µg/kg。

我国2001年也实施了鲜冻禽产品不准检出克伦特罗的标准。

对于克伦特罗，农业部已经颁布了采用高效液相色谱筛选和气)质联机验证的饲料测定方法（NY428-2001），但未使用国际认可的确证方法（稳定性同位素稀释技术）。

卫生部组织了肉中克伦特罗中毒控制方法的探索研究，营养与食品安全所和北京市疾病控制中心分别建立了HPLC-紫外与电化学检测方法和GC-MS 方法，正在探索HPLC-MS/MS串联检测方法。

营养与食品安全所、南京农大、华中农大和河南农科院均进行了ELISA试剂盒国产化的研究。

兽药知识恩诺沙星使用注意事项
恩诺沙星属于氟喹诺酮类化学合成抑菌剂，可作为动物用药品，在动物体内半衰期长，有良好的组织分布性，属于广谱杀菌药，对支原体有特效。

对大肠杆菌、克雷白杆菌、沙门氏菌、变形杆菌、绿脓杆菌、嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、溶血性巴氏杆菌、金葡菌、链球菌等都有杀菌效用。

常见兽药剂型有恩诺沙星片、恩诺沙星可溶粉、恩诺沙星注射液、恩诺沙星溶液、恩诺沙星混悬液等。

2017年，农业部组织开展了十二批假兽药查处活动，通报了486批假兽药相关信息。

其中，恩诺沙星、氟苯尼考等常用药被假冒最多，曾被2016年畜禽及全年蜂产品兽药残留监控计划检测结果通报，且2016年全年在鸡蛋中检出7批。

请养殖朋友们谨遵休药期及兽药禁用规定，在使用恩诺沙星时还应注意以下事项：
（1）禁用于8周龄以下幼犬，也慎用于供繁殖用幼龄种畜及马驹。

（2）孕畜及授乳母畜禁用。

（3）肉食动物及肾功能不全动物慎用。

对有严重肾病或肝病的动物需调节用量以免体内药物蓄积。

（4）休药期：恩诺沙星片，鸡8日，蛋鸡产蛋期禁用；恩诺沙星可溶性粉，鸡8日，蛋鸡产蛋期禁用；恩诺沙星注射液，牛、羊14日，猪10日，兔14日；恩诺沙星溶液，禽8日，蛋鸡产蛋期禁用。

鸡蛋中兽药残留的检测方法及防控方法-养鸡技术鸡蛋是生活中最常见的质优价廉的营养食品．深受人们的喜爱。

在蛋鸡集中化饲养过程中，兽药不仅能够用于防治疾病，部分还可作为饲料添加剂使用，促使机体生长或者产蛋率提高，但同时又容易在机体或者鸡蛋中残留，即使经过加热也依旧具有活性，从而间接导致耐药性传递及过敏、中毒、致癌或者致畸等。

现介绍鸡蛋中兽药残留规律、检测方法以及防治措施！1、兽药残留种类合成抗菌药物残留。

磺胺类药物，是一类药物的总称，主要特征是具有氨基苯磺酰胺结构，因其具有价格便宜、效果良好而在畜牧业中普遍应用。

尽管有关规定要求产蛋鸡不能够使用磺胺类药物，但在实际生产过程中依旧存在非常严重的误用和滥用现象，从而使其在鸡蛋中残留。

在我国，要求磺胺类药物的总残留量控制在每千克含有100 μg以下，同时还要求其中磺胺二甲基嘧啶的残留量控制在每千克含有25 μg以下。

喹诺酮类药物，主要使用的有恩诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、氟甲喹、达氟沙星，但要求处于产蛋高峰期的蛋鸡禁止使用。

在我国，农业部还明确规定鸡蛋中噢啉酸的残留量要控制在50 μg以下，且休药期应控制在6天。

硝基咪唑类药物，主要是作为驱虫药使用，通常以在饲料中添加的形式给药，从而使其残留在动物源性食品中。

国际上规定，所有食品动物可食性组织中硝唑眯唑类药物的残留量要求达到O，也就是说使用最先进的检测设备的定量限规定每千克含有1 μg。

抗生素类药物残留。

四环素类，是一种广谱抗生素，是由链菌霉生成，目前广泛使用的有四环素、多西环素、金霉素、土霉素等，相对来说鸡蛋中较少残留该类药物。

大环内酯类药物，主要作为饲料添加剂以及治疗药物使用，能够加速畜禽生长，促使饲料利用率提高，可作为治疗性兽药使用于无公害食品蛋鸡饲养中，但如果用药不规范就会导致残留现象的发生。

目前，主要使用的有泰乐菌素和红霉素，要求残留量分别控制在每千克含有100 μg和150 μg以下，休药期要控制在7天。

养殖与饲料2018年第1期的血浆淀粉酶活性最高，其次为七彩山鸡，黑凤鸡最低。

张志等[6]认为淀粉酶活性的高低与机体的化学反应速率有关，而杨华等[7]认为淀粉酶的活性具有较高的遗传力，由此表明珍珠鸡属于代谢水平较高的一种禽类，也是其特有的生物学属性。

而碱性磷酸酶是一种底物特异性不高的酶类，广泛存在于血液和细胞中，其含量大小与成骨细胞的活跃度[6，8]和生产性能与蛋品质有关[9]。

黑凤鸡的碱性磷酸酶活性显著高于野鸡和珍珠鸡的活性（＜0.01），表明本次选定的黑凤鸡处于一个生长快、产蛋旺盛的时期，酯酶作为一种水解低级脂肪酸酯的脂肪酶，在3种鸡血浆中的活性差异不显著（＞0.05），说明酯酶活性没有品种间差异。

参考文献[1]李立，朱开明.野生环颈难与美国七彩山鸡杂交繁殖技术研究[J].湖南林业科技，1996，23（4）：39-42.[2]唐继高，吴松成，黄波.七彩山鸡常规营养成分及氨基酸含量测定与分析[J].黑龙江畜牧兽医，2014（1）：60-62.[3]陈铁桥，欧兰香，谭运华，等.七彩山鸡肌肉及肝脏中12种矿物元素测定分析[J].经济动物学报，2004，8（1）：36-38.[4]陈玉琴，俞诗源.红腹锦鸡、石鸡和雉鸡的部分血液生理生化指标[J].动物学报，2007，53（4）：674-681.[5]崔福生.医学生化检验手册[M].天津：天津科学技术出版社，1982：314-315.[6]张志，谢塔，王润莲，等.隐性白鸡快慢羽系和地方鸡种部分血液酶活力的测定比较[C]//第十一次全国家禽学术讨论会论文集，2003：174-177.[7]杨华，傅衍.猪血液生化指标与生产性能的关系[J].国外畜牧科技，2001，28（1）：34-37.[8]陈彬，陆曼姝，俞渭江.家鸡种内血清同工酶活性的研究[J].山地农业生物学报，1992，11（2）：95-100.[9]王雪燕.蓝孔雀血液生理生化指标及蛋品质特性研究[D].兰州：甘肃农业大学，2009.摘要采集屠宰场65头生猪里脊肉，采用高效液相色谱法进行抗生素检测，测定猪肉中沙星类抗生素残留量。