大黄多糖传统水提法最佳工艺优化研究
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重,以左右耳片重之差为肿胀度求出肿胀抑制率。
结果见表4。
新伤药膏对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有明显的抑制作用。
表4 新伤药膏对二甲苯所致小鼠耳部肿胀的影响( x ±s )组别肿胀度m /mg 肿胀抑制率(%)空白 3.68±0.99-新伤药膏小剂量 2.66±0.86327.72新伤药膏中剂量 2.35±0.64336.14新伤药膏大剂量 2.27±0.65338.32新伤药膏对照2.30±0.81337.50 与空白组比较,3P <0.05;n =103 讨论上述药理实验证明,新伤药软膏对二甲苯所致耳廓肿胀、蛋清致大鼠后足、醋酸诱发的小鼠扭体及热板法致痛实验具有抗炎、镇痛作用,这与新伤药膏里中药青木香、玄胡、红花、木通等的解毒、消肿、活血、止痛、散瘀、泻火、行水功效是一致的。
本实验为新伤药膏的临床及进一步研究提供了一定依据。
参考文献:[1] 陈 奇.中药药理研究方法学[M ].北京:人民卫生出版社,1993:356.[2] 连其深.花椒毒酚抗炎作用的实验研究[J ].中草药,1998,29(2):102.收稿日期:2009205231; 修订日期:2009208210基金项目:吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目(No .[2008]434)作者简介:纪耀华(19612),女(汉族),吉林长春人,现任长春医学高等专科学校副教授,学士学位,主要从事天然药物化学成分的提取分离和纯化工艺研究工作.大黄多糖传统水提法最佳工艺优化研究纪耀华,马爱民,孙 莹,刘晓茵(长春医学高等专科学校,吉林长春 130031)摘要:目的确定大黄多糖的最佳提取条件。
方法以大黄多糖的含量为指标,以提取温度、提取时间、提取次数、料液比为因素,利用单因素实验确定因素水平,正交实验法进行实验设计,对水提取法提取大黄多糖的工艺进行系统研究。
结果大黄多糖的最佳工艺条件为:提取时间3h,提取温度95℃,料液比1∶20。
结论该方法实验结果可作为提取大黄多糖的工艺制定的依据。
关键词:大黄; 多糖; 提取工艺; 正交实验中图分类号:R283.3 文献标识码:B 文章编号:100820805(2010)0320634202 大黄为廖科植物掌叶大黄Rheum pal m atum L.,唐古特大黄R heum tanguticum Maxi m .ex Balf 或药用大黄Rheum officinale Baill 的干燥根及根茎,具有泻下、健胃、清热解毒等功效。
近年来,经大量实验证实大黄多糖不仅具有抗衰延年[1]、降血糖[2]、治疗胃溃疡性结肠炎[3]、改善血脂[4]、抗保护神经[5]等作用,并且还可以通过提高机体免疫力达到抗肿瘤的作用[6]。
因此,大黄多糖作为中药和生物药物的重要成分,毒性低,性质稳定,营养价值高,同时具有多方面的生理活性,无论是进行保健食品还是药品的开发和利用,均具有广阔的应用前景。
目前对大黄多糖的药理研究较多,而对其提取工艺研究较少,特别是大黄多糖的提取工艺优化研究笔者未见国内外文献报道。
本实验以大黄多糖的含量为指标,采用单因素考察和正交实验法进行实验设计,对传统的水提取法提取大黄多糖的工艺进行系统研究,为大规模工业生产大黄多糖提供可靠依据。
1 仪器与试药1.1 仪器U1901双光束紫外可见分光光度计(北京普西通用仪器责任有限公司),电子天平BS224S (赛多利斯科学仪器北京有限公司)。
1.2 药品大黄(购于长春药材公司)、苯酚、葡萄糖、浓硫酸、乙醇、乙醚、丙酮等,均为分析纯试剂。
2 方法2.1 大黄多糖样品液的制备精密称取干燥至恒重的大黄2.5g,加水提取,提取液浓缩后定容于100m l 的容量瓶,室温冷却后,吸取5m l 提取液,加入5倍体积95%的乙醇,静置过夜,离心(3000r/m in ),所得沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤,得粗多糖,加蒸馏水定容于100m l 容量瓶中得大黄多糖样品液供测定用。
2.2 多糖的测定方法大黄多糖的测定以葡萄糖为标准品,采用硫酸-苯酚比色法。
2.2.1 标准样品溶液的配制精密称取14.71mg 干燥至恒重的无水葡萄糖,加入100m l 容量瓶中,用水溶解至刻度,使成147.1μg/m l 即得。
2.2.2 标准曲线的制备[7]分别精密吸取上述标准样品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0m l 至10m l 容量瓶中,然后依次加入1.8,1.6,1.4,1.2,1.0m l 蒸馏水,再各加1.0m l 6%苯酚试剂,混匀,精密加入5m l 浓硫酸,振摇后放置5m in,置沸水浴中加热15m in,立即转入冷水浴中冷却至室温,以蒸馏水为空白,在490n m 波长处测定吸收度,即得标准曲线,以浓度C 对吸收度A 回归方程:A =0.3818C +0.0174,r =0.9952。
2.2.3 大黄多糖样品液的测定精密吸取大黄样品液1.0m l,按“2.2.2”标准曲线的制备项下的方法操作。
3 结果与分析3.1 单因素实验结果3.1.1 提取次数对多糖得率的影响见图1。
图1 提取次数对多糖得率的影响由图1可知,提取次数2次与3次、4次、5次相比,样品多糖的得率相差不大,所以考虑节省时间和能源,选择2次较为合适。
・436・时珍国医国药2010年第21卷第3期L I SH I ZHEN MED I C I N E AND MATER I A MED I CA RESEARCH 2010VOL.21NO.33.1.2 提取时间对多糖得率的影响由图2可知,多糖得率开始时随着提取时间的延长上升较大,当达到3h 以后,再延长时间,多糖得率则变化不大。
图2 提取时间对多糖得率的影响图3 提取温度对多糖得率的影响3.1.3 提取温度对多糖得率的影响由图3可知,多糖得率开始时随着提取温度上升提高显著,当达到95℃以后,温度提高对多糖得率的影响显著性不是很明显。
3.1.4 料液比对多糖得率的影响由图4可知,多糖得率开始时随着料液比的增大而变大,料液比为1∶20时,多糖得率达到最高点,而后,随着料液比增大,多糖得率反而下降。
图4 料液比对多糖得率的影响3.2 大黄多糖提取条件的优化在单因素考察的基础上,以提取时间、提取温度和料液比为因素,作如下3因素水平的正交实验。
选择正交表L 9(34),因素-水平设计如表1。
表1 因素水平水平A提取时间t /hB提取温度T /℃C料液比(倍)11751∶1022851∶2033951∶303.3 实验结果结果见表2～3。
4 结论极差R 反映了各因素对指标的影响大小,由R C<R A<RB知,影响大黄多糖得率从主到次的因素排序为B,A,C,即浸提温表2 正交实验结果试验号A 浸提时间B 浸提温度C 料液比多糖得率x i6ix i 21110.18952120.37993130.74664210.21455220.60976230.70537310.73018320.32979331.5968K 1K 1A =1.316K 1B =1.1341K 1C =1.2245K =5.5021K =4.8444K 2K 2A =1.5295K 1B =1.3193K 1C =2.1912K 3K 3A =2.6566K 1B =3.0487K 1C=2.0864k 1k 1A =0.4387k 1B =0.4082k 2k 2A =0.5083k 2B =0.7304k 3k 3A =0.8855k 3B =0.6955R 0.44680.63820.3222U U A =3.7096U B =4.1071U C =3.5513P =3.3637QQ A =0.3459Q B =0.7434Q C =0.1876表3 正交实验方差分析因素离差平方和自由度平均离差平方和F 值显著性A Q A =0.3459f A =2S A 2=0.1730F A =1.6977不显著B Q B =0.7434f B =2S B 2=0.3717F B =3.6477不显著C Q C =0.1876f C =2S C 2=0.0938F C =0.9205不显著e (误差)Q e =0.2038f e =2S e 2=0.1019总和Q T =1.4807f T =8度,浸提时间,料液比;均值K 因素i反映了该因素水平i 对指标的影响,指标值越大越好,由k 1A <k 2A <k 3A 知因素A 的水平3比其它两个水平好,同样由k 1B <k 2B <k 3B ,k 1C <k 1C <k 3C <k 2C 可知,最佳工艺条件是A 3B 3C 2,即提取时间3h,提取温度95℃,料液比1∶20;在水平α=0.05下,F 0.05(2,2)=19,由于F A ,F B ,F C 均小于F 0.05(2,2)=19故A,B,C 3因素对大黄多糖的多糖得率影响均不显著。
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