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利用聚焦离子束双束扫描电镜制备透射样品的主要流程聚焦离子束双束扫描电镜（Focused Ion Beam Dual Beam Scanning Electron Microscope，简称FIB-SEM）是一种高分辨率的表面形貌和微结构分析技术，可以实现对样品进行原位观察和制备。
利用FIB-SEM可以制备透射电镜（Transmission Electron Microscopy，简称TEM）样品，即通过FIB切割和修整样品，使其达到适合TEM观察的薄片形态。
本文将详细介绍利用FIB-SEM制备透射样品的主要流程。
1. 样品准备首先需要准备待制备的样品。
这些样品可以是固体材料、生物组织或其他需要进行透射电镜观察的材料。
为了便于FIB切割和修整，样品应具有一定的硬度和稳定性。
2. 样品固定将待制备的样品固定在一个小型支撑台上，并使用导电胶或其他导电材料将其牢固地粘附在支撑台上。
导电胶能够提供良好的导电性，以便在后续的FIB切割和修整过程中排除电荷积累的干扰。
3. FIB切割将固定在支撑台上的样品放入FIB-SEM设备中，调整好样品位置。
然后使用离子束对样品进行切割。
离子束由高能离子组成，可以精确地切割样品表面。
通过控制离子束的扫描速度和电流密度，可以实现不同形状和尺寸的切割区域。
4. FIB修整在完成初始切割后，需要对样品进行进一步的修整以达到透射电镜观察的要求。
使用较低能量和较小电流密度的离子束，在已经切割好的区域上进行精细修整。
通过逐渐去除样品表面的材料，可以获得更加平坦、光滑且薄片形态良好的透射样品。
5. 清洗和抛光经过FIB修整后，样品表面可能存在一些污染物或残留物。
为了获得更好的透射图像质量，需要对样品进行清洗和抛光处理。
这可以通过离子束轰击、溅射或化学腐蚀等方法来实现。
清洗和抛光的目的是去除样品表面的污染物，并使其更加平整和透明。
6. TEM观察完成清洗和抛光后，将样品转移到透射电镜中进行观察。
扫描电镜是一种强大的工具，能够帮助科学家们观察和研究微观颗粒和结构。
而水凝胶样品薄层制备技术是一种常用的样品制备方法，可以让我们在扫描电镜下观察到更为清晰的图像。
本文将从水凝胶样品薄层制备技术的原理、步骤以及在扫描电镜观察中的应用等方面进行深入探讨。
一、水凝胶样品薄层制备技术的原理水凝胶是一种具有三维网状结构的高分子材料，在制备薄层样品时，我们需要将其固定在特定的载玻片上，并通过一系列的处理步骤使其呈现出透明、均匀且不变形的薄层。
这样才能保证在扫描电镜下获得清晰的观察效果。
水凝胶样品薄层制备技术的原理即在于将三维水凝胶结构变为二维薄片，使得其结构和形貌能够被扫描电镜所观察和分析。
二、水凝胶样品薄层制备技术的步骤1. 样品准备：首先需要将待观察的水凝胶样品做好必要的处理和固定，以保证其结构的完整性和稳定性。
2. 切割和制备：将处理好的水凝胶样品切割成所需大小，并放置在特制的载玻片上。
3. 固定和染色：使用适当的固定剂和染色剂，对水凝胶样品进行处理，以增强其在扫描电镜下的对比度和清晰度。
4. 镀金或碳膜处理：对已固定和染色的水凝胶样品进行镀金或碳膜处理，以增强其导电性和稳定性，为扫描电镜观察做好准备。
5. 加工和清洁：最后对样品进行加工和清洁，确保其表面光滑干净，避免在观察过程中出现杂质或污渍影响观察效果。
三、水凝胶样品薄层制备技术在扫描电镜观察中的应用经过上述步骤处理后的水凝胶样品可以被放置到扫描电镜的样品台上进行观察。
通过扫描电镜，我们可以清晰地观察到水凝胶样品的微观结构、表面形貌和分布情况，从而了解其性质和特征。
扫描电镜观察可以帮助我们深入了解水凝胶的微观结构和组成，从而为材料科学和纳米技术等领域的研究提供重要的参考和依据。
尤其是在纳米颗粒的研究和纳米材料的制备过程中，水凝胶样品薄层制备技术的应用具有重要意义。
四、个人观点和总结水凝胶样品薄层制备技术的应用对于扫描电镜观察来说至关重要。
通过精细的制备和处理步骤，我们可以获得清晰、高质量的扫描电镜图像，从而更好地理解样品的微观结构和特性。
扫描电镜细胞样品制备步骤嘿，咱今儿就来讲讲扫描电镜细胞样品制备那些事儿哈！
你想想看，细胞那么小的玩意儿，咱要想好好观察研究它们，可得下一番功夫呢！就像咱要给一个小娃娃打扮得漂漂亮亮去参加重要活动一样。
首先呢，得把细胞好好地收集起来。
这就好比去果园摘果子，得小心翼翼地把果子从树上摘下来，不能弄伤了它们。
咱得用合适的方法把细胞从它们生长的地方轻轻地取出来，可不能太粗鲁啦！
然后呢，就是给细胞洗个澡啦！把它们身上那些不需要的杂质啥的都洗掉，让它们干干净净的。
这就像是咱自己洗澡一样，把身上的脏东西都洗掉，清清爽爽的。
接下来，就是固定啦！这可重要得很呢！就好像给细胞穿上了一件坚固的铠甲，让它们能保持住自己的形态，不会东倒西歪的。
不然等会儿咱观察的时候，它们都变形了，那可咋整呀！
再之后，就是脱水啦！把细胞里面多余的水分都去掉，就像咱把湿漉漉的衣服晾干一样。
这一步可得仔细着点儿，不能让细胞受损哦！
接着呢，是干燥啦！让细胞处在一个干燥舒适的环境里，这样它们才能好好地被我们观察呀！
再往下，就是镀膜啦！这就好像给细胞披上了一层神秘的外衣，让它们在电镜下能更好地显现出来。
最后，就可以把制备好的细胞样品放到扫描电镜里面去观察啦！哇塞，你能想象到吗，通过电镜看到细胞的那一刻，就好像打开了一个微观世界的大门，里面有着无数的奥秘等着我们去探索呢！
你说这是不是很神奇呀？咱通过这一步步的操作，就能看到细胞的各种奇妙之处啦！所以呀，可别小瞧了这扫描电镜细胞样品制备的步骤哦，每一步都马虎不得呢！咱得像对待宝贝一样精心地去处理这些细胞，这样才能得到最准确、最有价值的观察结果呀！这可不是闹着玩的事儿呢！大家可得认真对待哟！。
纳米材料扫描电镜样品制备方法
1. 嘿，你知道吗，纳米材料扫描电镜样品制备方法之一就是要精心挑选样品呀！就好比给小公主选漂亮衣服一样，得细致着呢！比如我们要选表面光滑没有瑕疵的纳米材料。
不然，怎么能让电镜看清它的美妙之处呢？
2. 哇塞，切片也是很关键的一步哦！这就像是给蛋糕切出均匀的一片片，得小心谨慎呀！像把纳米材料切成薄薄的一片，这样才能更好地观察呀！你说是不是？
3. 还有啊，固定样品可不能马虎哟！这就好像是让调皮的小朋友乖乖站好，不能乱动呢！只有把纳米材料稳稳地固定住，才能在电镜下呈现出清晰的模样呀！
4. 清洗也很重要呢！好比给脏兮兮的小狗洗个干净的澡，要把杂质都去掉呀！仔细地清洗纳米材料，让它干干净净地去见扫描电镜，多好呀！
5. 干燥这一步可不能小瞧呀！就如同让湿哒哒的头发吹干一样，得处理好呢！把清洗后的纳米材料好好干燥，这样才能以最佳状态进入电镜观察呀，对不对？
6. 最后，别忘了给样品镀膜呀！像是给一件精美的物品披上一层华丽的外衣，让它更加闪亮！给纳米材料镀上合适的膜，能让观察效果更佳呢！
我的观点结论就是：这些纳米材料扫描电镜样品制备方法都很重要呀，每一个步骤都要认真对待，才能得到满意的结果呢！。
扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法扫描电镜是一种常用的高分辨率显微镜，广泛应用于科研、医学、材料科学等领域。
要想获得清晰的成像结果，除了设备本身的性能外，样品的处理和成像参数的设置也十分关键。
下面将介绍扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法。
一、样品处理技巧1. 表面清洁：在进行扫描电镜观察之前，首先要保证样品表面的干净和整洁。
可以使用超声波清洗仪或一些特定的溶液进行清洗，去除可能存在的灰尘、油脂等污染物。
2. 干燥处理：为了避免样品表面的水分干扰成像结果，可以通过空气吹干、真空干燥或冷冻干燥等方法进行处理。
不同的材质和尺寸可能需要不同的干燥处理方法，要根据具体情况选择合适的方式。
3. 导电涂层：扫描电镜通常对导电性要求较高，因此对于非导电性的样品，需要进行导电涂层处理。
常用的导电涂层材料有金、铂、铜等，可以使用溅射、喷镀等方式进行涂层。
涂层的厚度应该适中，过厚会影响成像的清晰度。
4. 极性处理：对于有生物学样品，如细胞、组织等，常常需要进行极性处理。
极性处理可以通过化学固定、盐水处理等方式进行，使样品保持其原有的形态和结构。
5. 切片制备：对于一些需要进行截面观察的样品，如材料样品或生物样品的超薄切片等，需要使用显微切片机进行切割。
切片的厚度和质量直接影响到成像结果的清晰度和分辨率。
二、成像参数设置方法1. 加速电压：扫描电镜的成像主要依靠电子束与样品表面的相互作用。
电子束的加速电压是成像参数中的重要参数，不同的样品需要不同的电压。
一般来说，低电压会使成像清晰度增加，但是对于一些厚度较大的样品，需要较高的电压穿透进而成像。
2. 样品离子束扫描电流：样品受到离子束扫描电流的刺激时，会发生荧光反应或散射，产生成像信号。
这个参数需要根据具体样品的离子束离散化程度进行调整，影响着样品的信号强度和噪声水平。
3. 探测器设置：扫描电镜中常用的探测器有二次电子探测器和透射电子探测器。
二次电子探测器对于表面形貌的观察很有帮助，而透射电子探测器可以获得材料内部的结构信息。
扫描电镜实验报告一、背景介绍扫描电镜（Scanning Electron Microscope，SEM）是一种常用于观察材料表面形貌的高分辨率显微镜。
与光学显微镜不同，SEM使用电子束来对样品进行扫描，从而获得样品表面的高清晰度图像。
本文将对扫描电镜实验进行详细描述和分析。
二、实验目的本次实验的目的是研究和观察不同样品的表面形貌及其微观结构。
通过使用扫描电镜，我们可以进一步了解材料的性质和特征，并为后续的研究工作提供有力的支持。
三、实验步骤1. 样品制备：将待观察的样品进行必要的处理，例如切割、研磨、涂覆导电剂等，以保证样品的表面光滑且导电性良好。
2. 装备样品：将处理完成的样品放置在SEM样品台上，固定好并调整角度，确保样品表面垂直于电子束的入射方向。
3. 调整参数：根据不同样品的特性和需求，调整加速电压、放大倍数、探头电流等参数，以获得最佳的图像质量。
4. 扫描观察：打开SEM仪器，开始对样品进行扫描观察。
电子束在样品表面扫描时，与样品表面相互作用，产生二次电子信号，这些信号被探测器接收并转换成图像。
四、实验结果与分析在本次实验中，我们观察了不同样品的表面结构，并获得了一系列高分辨率的SEM图像。
以一块常见的金属材料——铝为例，通过SEM观察，我们可以清晰地看到铝表面的微观结构。
观察结果显示，铝表面呈现出许多沟槽和凸起的特征，这些特征是铝晶粒的显著标记。
SEM图像还揭示了铝表面的晶粒大小和分布情况，有助于我们进一步研究金属的力学性质和形变行为。
同样，我们还观察了纳米颗粒的表面形貌。
SEM图像显示，纳米颗粒具有较大的表面积和丰富的形态结构，这使得纳米颗粒在催化剂、材料科学等领域有着广泛的应用价值。
通过SEM观察，我们可以研究纳米颗粒的大小分布、形状特征以及粒子间的相互作用，为相关研究提供了重要的依据。
五、实验的意义与应用前景扫描电镜作为一种重要的表征工具，在材料科学、生物学、纳米技术等领域具有广泛的应用和重要意义。
扫描电镜样品制备方法一、取材组织块小于3立方毫米（单细胞培养或收集展片于盖玻片或滤膜上）。
二、固定前固定：2.5%戊二醛（磷酸缓冲液配制）固定2小时或更长时间。
用0.1M pH7.4磷酸盐缓冲液漂洗三次，每次10分钟。
三、脱水＊脱水在4度冰箱内进行，所有脱水步骤建议在专用的冷冻干燥杯中进行，冷冻干燥杯请于实验前一天到电镜室领取。
＊整个过程，样品不要暴露于空气。
1.乙醇脱水，每一级10-20分钟：30%乙醇—50%乙醇—70%乙醇—90%乙醇—95%乙醇—100%乙醇；2.然后从乙醇逐步过渡到叔丁醇，纯叔丁醇每次10分钟，3次以上；此系列操作均在25度环境中进行；3.纯叔丁醇4度冰箱过夜，样品结晶。
四、冷冻干燥＊需事先预约冷冻干燥时间；第二天上午八点半讲冷冻结冰的样品用冰盒送至电镜室进行冷冻干燥。
五、喷金附件1：细菌类样品的前处理方法1.盖玻片泡酸，清洗，烘干。
用剪刀剪碎，挑出5mm*5mm大小玻片备用。
玻片过大或者过厚影响观察效果。
2.菌液或样品悬液离心，需要可进行清洗，加入固定液，吹散固定，于4度冰箱固定2小时左右。
3.固定结束后，去固定液，加入PBS浸泡清洗，10分钟。
离心去PBS，固体沉淀根据量多少，加入适量PBS，制成浓度较高的悬液（目测较混浊）。
样品浓度对后期吸附有较大影响，浓度过低可能吸附量会很少。
4.取鸡蛋清，稀释3-5倍（一定要稀释！蛋清过浓会包裹样品），之前准备好的玻片放入液体内蘸一下，取出晾干至触摸感觉有点黏的状态（快干的状态）。
将第3步取得的悬液滴在玻片上，吸附30秒到1分钟，用滤纸吸去多余液体。
（样品悬液在玻片上停留时间过长将导致样品被蛋清完全包裹而无法观察）。
5.在玻片上滴加固定液，固定10分钟，固定后用PBS浸泡清洗10分钟，放入干燥杯开始进行脱水。
磷酸盐缓冲液(PBS)a.磷酸盐缓冲液（0.2M）甲液：0.2M的磷酸氢二钠溶液乙液：0.2M的磷酸二氢钠溶液Na2HPO42H2O 35.61g (Na2HPO47H2O) 53.65g (Na2HPO412H2O) 71.64g NaH2PO4H2O 27.60g ( NaH2PO42H2O) 31.21g加蒸馏水溶解成1000ml 加蒸馏水溶解成1000ml按下表混合甲、乙两液既得所需pH的0.2M缓冲液0.2M磷酸盐缓冲液的配制将溶液用蒸馏水1：1稀释，则配得0.1M的缓冲液。
扫描电镜样品制备 扫描电子显微镜生物样品制备技术
无论是透射电镜或是扫描电镜，样品均处于电镜镜筒的真空之中。而大多数的生物样品都是柔软而且含大量水分的。因此，也和透射电镜的样品一样，在进行扫描电镜观察前，必须对生物样品作相应的处理。
扫描电镜的功能很多，不同的功能对样品的要求不同。例如二次电子像与背散射电子像和吸收电子像对样品的要求基本相同，而与X射线微区分析对样品的要求相差较远。我们首先介绍二次电子像的生物样品制备技术。此外，由于样品的性质不同，其处理方法和程序也有不同。主要分两大类，一类为含水量少的硬组织，如毛发、牙齿及植物的花粉、孢子、种子等。此类样品一般含硅质、钙质，角质，砝琅质和纤维素等成份，所以通常只经过表面清洁、装台(粘胶)、导电处理等简单过程即可进行观察。如要观察其断面或内部结构时，经断裂、解剖或酶消化、蚀刻等再装台、镀膜处理，即可进行观察拍照。另-类为含水分较多的软组织，如大多数的动植物器官、组织及细菌等均属此类。对于此类样品，在金属镀膜前，一般都需经过固定、脱水、干燥等处理，如不经处理或处理不当，就会造成样品损伤和变形，出现各种假像，因此对每一处理步骤都应给予重视。
但是，不管是那一类样品的制备，都应达到以下要求： 尽可能保持样品活体时的形貌和结构，以便如实地反映样品本来面目。
在样品的干燥过程尽可能减少样品变形。
样品表面应有良好导电性能和二次电子发射率，以防止和减少样品的荷电效应。
样品的前期处理
扫描电镜样品的前期处理主要包括表面清洁、固定、漂洗和脱水等过程。而每一过程的处理方法基本上都是沿用透射电镜样品的处理方法的，所以，这里不一一再作详述。但是，由于两种电镜观察的要求不同，因此，在处理中也有不同之处：
1. 透射电镜主要研究样品的内部结构要求内部结构保存好，因而样品宜尽可能小使固定液能迅时渗入固定。扫描电镜观察表面形貌，而且为了操作方便选取较大样品。一般在8～10mm2左右，高度可达5mm。 2. 扫描电镜要求完整且清洁表面，但是在许多样品的表面常附有粘液、血液、组织液及灰尘等杂物，妨碍着观察，以致造成对图像的错误解释，所以，在固定前都必须特别做好表面的清洁工作。 以下简介前期处理方法： 清洁'：对样品的清洁可根据不同的样品采用不同的方法，其中常用的方法有: 表面正常干燥的样品如叶、花瓣、茎等蜡叶标本，可用吹气球或用除尘器吹净，也可用软毛
笔轻扫等方法除去表面的灰尘和其它杂物，但需注意不要损伤样品，吹风和清扫的力量取决于样品的硬度和污染的程度。 一般动植物组织，可用蒸馏水、生理盐水或缓冲液漂洗或冲洗。至于采用何种清洁液清洗，
要视组织本身对清洗液渗透压变化的敏感程度而定，如用缓冲液清洗时，应与配制固定液的缓冲液一致，否则会因性质不同而产生化学反应从而影响固定效果。 对有油脂分泌物和蜡质覆盖层的样品如毛发、蚧虫等，应采用有机溶剂反复浸洗。
对一些附有粘液的组织可采用酶解法或其它试剂处理来清洗，如一般组织可用木瓜蛋白酶和
淀粉酶清洗；肠粘膜可用糜蛋白酶清洗；用胰蛋白酶可分离和清洗胃粘膜的细胞。有些组织也可用试剂进行清洗，如要分离神经细胞可用稀释的乙二胺四醋酸处理，用甘油和稀释的乙醇延长浸渍时间可以从分泌乳腺中除去乳汁等。 对微小的样品要用离心法或放在用镍过滤网制的小容器中清洗。
对于特殊的样品还须用特殊的方法进行清洗。
固定: 样品的固定、漂洗和脱水等处理所用的试剂和方法基本上与透射电镜的样品相同，但由于扫描电镜观察的是样品的表面，主要是要求保持样品表面的原貌，因此，在固定、漂洗和脱水过程也与透射电镜样品处理有不同之处。
除采用戊二醛、四氧化锇、高锰酸钾等固定液进行固定外，还可采用下列几种固定液： Sjodstrand固定液：
A液：氯化钠40.3g+氯化钾2.1g+钙0.9g+双蒸镏水500ml B液：醋酸钠9.714g+凡罗那钠(Veronal)14.74g+双蒸馏水500m1 使用时吸取A液10ml，B液3.4ml，再加0/1mol/L盐酸11ml和锇酸05g+50ml蒸馏水 Dalton氏固定液： 此种固定液为4％重铬酸钾(pH7.2)与3.4％氯化钠等量混和后，再与2％四氧化锇等量混使即得。 这种固定液无沉渣，对样品损伤少。 在能保持样品不变形的前提下，不少样品(特别是植物样品)采用戊二醛单固定即可。 为了加强固定效果，还可将几种不同的固定液配合使用，进行双固定或多次固定(尤其是动物样品)；如用用戊二醛作前固定，用锇酸作后固定。 脱水：脱水剂常用乙醇和丙酮。丙酮能使組织块变硬，是它的优点。 样品的干燥 生物样品的制备中，干燥是最关键的步骤。干燥过程除引起样品收缩之外，水的表面张力会使样品表面形貌发生很大的变化，这对扫描电镜的表面形貌观察特别有害。在透射电镜的样品制备中用乙醇脱水，是为了包埋剂的渗透(因水不与包埋剂互溶，而乙醇则能互溶)。而在扫描电镜的样品制备中，脱水是用表面张力小的乙醇取代表面张力很大的水，从而使干燥过程对样品表面产生的影响较少。然后就是如何设法使样品表面不受或少受表面张力影响的条件下除去乙醇，这就是干燥。目前常用的干燥方法主要有空气干燥法、临界点干燥法、冰冻干燥法、真空干燥法和莰烯干燥法等。
空气干燥法 空气干燥法又称自然干燥法，就是将经过脱水的样品，让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。此法的最大优点是简单易行和节省时间，它的致命缺点是在干燥过程中，组织会因脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。因此，此种方法一般只适用于外壳(表面)较为坚硬的样品。
在采用空气干燥时，为了减少样品的收缩变形，除使用易挥发和表面张力小的脱水剂如乙醇、丙酮等外，还应使样品得到充分固定，特别是须经四氧化锇固定效果才较好。因为它会使组织变得较为坚硬，使收缩变形减少。
然而，空气干燥引起的收缩并非完全不利，有时可以通过收缩使细胞之间相互剥离，从而能清楚地观察到一个个单独存在的细胞及其表面结构。此外，还可通过细胞成份在干燥时的收缩，观察到细胞内的线粒体、细胞核等成份的存在。但这种机会很少，而且因收缩带来的不利是主要的，所以，目前很少采用。
临界点干燥法 临界点干燥法是一种消除了物相界面(液相／气相)，也就是消除了表面张力来源的干燥方法。这种方法由于没有表面张力的影响，所以样品不易收缩和损伤，此法所用的仪器结构不甚复杂，操作较为方便，所用的时间也不算长，一般约2h左右即可完成，所以，是最为常用的方法。
物质的临界点是1822年由Charles cagridde La Tour发现的。他将不同的液体分别装进玻璃试管并密封起来，然后一边转动一边加热，这时，他发现随着温度的升高，试管内的液相和气相之间的弯月面开始变得模糊起来，只有在试管冷却之后，弯月面才又重新出现。每种液体都存在某一温度，在这一温度时，液相的弯月面完全消失。 那么，弯月面的消失意味着什么呢?它意味着液相和气相之间的界面没有了，之所以出现这种现象，是因为在密封的容器里，液体受热膨胀，而气体本身被压缩，最后在某一特定的温度和压力下，液体由于膨胀，气体由于被压缩而使两者的密度相同，因而相互混合成一种均一的流体，原先存在它们之间的弯月面(即液面)就消失了，表面张力也自然消失了。因此，所谓临界点，就是指使物质的气态和液态两相之间达到相同密度，成为均一流体状态时的温度和压力的总称。此时的温度称临界温度；此时的压力称临界压力。
不同的物质都有其特定的临界点，一般用于扫描电镜样品临界点干燥的置换剂的临界温度和压力见表10-1。如果在临介点进行干燥，由于表面张力消失就不会造成样品表面的损伤。但进行临界点干燥，需用专用的临界点干燥器。具体处理步骤如下：
1. 固定脱水 按透射电镜常规制样方法进行。 2. 纯丙酮置换乙醇 如样品是用乙醇脱水的，在脱水至100％后，用纯丙酮置换15～20min。 3. 中间液处理 即在用丙酮置换乙醇后,用醋酸异戊酯(乙酸异戊B8)处理15-80min(也可以过夜)置换丙酶。由于醋酸异戊酯与液态二氧化碳能互溶，使液态二氧化碳容易渗入样品中。 4. 装样 将样品从醋酸异戊酯中挑入(或倒入)样品笼中，用滤纸吸去样品笼外围的醋酸异戊酯，然后连笼移入仪器的样品杯(高压容器)内，盖上盖并拧紧以防漏气。(注：在装样前，应先打开仪器电源，将温度调节设定在0℃处预冷10～15min，以保证液态二氧化碳有足够量进入样品杯中)。 5. 注入液体二氧化碳 依次打开二氧化碳钢瓶排气阀和仪器的进气阀在0～10℃下，向样品杯注入液体二氧化碳。 6. 漂洗 当液体二氧化碳充至样品杯容积的50％(通过刻度尺观察，以液面超过样品笼为度)时，关闭仪器进气阀，静置15～20min，让醋酸异戊酯向液态二氧化碳中充分扩散，然后，打开仪器排气流量计阀门和进气阀门，让其边排气边充液10min左右，(让含有醋酸异戊酯的二氧化碳排出和充入新鲜的液态二氧化碳)再关闭排气阀；继续充入液体二氧化碳至样品杯的80％左右，关闭进液阀，停止充液。 7. 加温置换 将温度调节设定在20℃处经15～20min后，由于温度升高，杯内液体二氧化碳逐渐气化，因此，压力也随之上升至7000Pa左右，样品中的醋酸异戊酯将与二氧化碳充分置换。 8. 气化 将温度旋钮调至临界温度以上(35～40℃)，此时随着温度升高，样品杯内的压力也逐渐增加，达到二氧化碳的临介点，界面也随之消失。当压力达到7134Pa时，经5min后，即可排气。 9. 排气 在保持温度不变的条件下(即不关电源)，打开流量计的排气阀门，以1.0～1.51／min的速度排气(速度慢些更好)。约经45～60min后，排气完毕，样品杯的压力下降到零，将温度调节至室温约5rain后，即可取出样品装台镀膜(若不能立即装台，应置于干燥器内保存)。
临界点干燥的成败如何；与每一步的操作有很大关系，因此，操作时应注意以下事项： 1. 在样品放进样品杯前，样品杯应预先冷却至0～10℃，因为温度过高，充入的液体二氧化碳会立即气化膨胀，压力增加，妨碍二氧化碳液体继续进入样品杯。
