人部分正常与肿瘤细胞株中neuritin表达的检测

２００７年６月　第２９卷第３期　农垦医学　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＮｏｎｇｋｅｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｊｕｎ．２００７　ｖｏ１．２９　Ｎｏ．３　・论著・　人部分正常与肿瘤细胞株中ｎｅｕｒｉｔｉｎ表达的检测　徐　芬　巴鹏飞　张树军　罗　星２　黄　瑾２　（１．石河子大学２００４级生物化学与分子生物学硕士研究生；　２．石河子大学新疆地方与民族高发病重点实验室，新疆石河子，８３２００２）　【摘要】目的：筛选ｎｅｕｒｉｔｉｎ高表达及低表达细胞株，为进一步探讨ｎｅｕｒｉｔｉｎ在不同组织细胞生长发育过程中的作　用奠定基础。方法和结果：分别利用ＲＴ—ＰＣＲ与免疫组化技术在ｍＲＮＡ水平及蛋白水平，检测了１１种人类细胞株　中ｎｅｕｒｉｔｉｎ的表达情况，发现不仅在多种正常细胞中有表达，而且在部分肿瘤细胞中也有表达。结论：成功筛选出了　ｎｅｕ６ｔｉｎ高表达及低表达细胞株。　【关键词】ｎｅｕｒｉｔｉｎ表达；人细胞株；ＲＴ—ＰＣＲ；免疫组织化学　中图分类号：Ｒ３７３．２１　文献标识码：Ａ　１９９３年，ｎｅｕｒｉｔｉｎ作为与神经可塑性相关的候选　基因１５（Ｃａｎｄｉｄａｔｅ　Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ—ｒｅｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅ　１５，ＣＰＧ１５）　被发现…，随后的功能研究显示Ｎｅｕｒｉｔｉｎ与神经突起　的生长有关【０』：在胚胎发育期，Ｎｅｕｒｉｔｉｎ能促进神经　突起的生长及其分支和突触的发育成熟，调节突触　回路的形成；并可抑制凋亡，维持神经元的存　活ｌ３　；而成年后，与神经系统的可塑性密切相　关【　。近年来大量的研究显示，除了神经系统，　ｎｅｕｒｉｔｉｎ在肝、心、肺、骨骼肌¨卜１３ｊ等其他多个正常　组织器官都有表达，并在卡波氏肉瘤ｌ１４］等一些肿瘤　组织中也出现高表达。提示：ｎｅｕｒｉｔｉｎ可能与多种组　织细胞的生长发育，甚至肿瘤的发生有关。　因此，了解ｎｅｕｒｉｔｉｎ的表达情况，进一步探讨　ｎｅｕｆｉｔｉｎ在不同组织细胞生长发育过程中的作用，对　于全面阐述ｎｅｕｒｉｔｉｎ的功能，将其更好地应用于神经　再生领域具有十分重要的意义。本研究利用ＲＴ—　ＦＣＲ与免疫组织化学技术，在ｒｎＲＮＡ水平及蛋白水　平检测了１１种人类正常和肿瘤细胞中ｎｅｕｆｉｔｉｎ的表　达隋况，以期筛选出ｎｅｕｎｔｉｎ高表达及低表达细胞　株，为进一步探讨ｎｅｕｎｔｉｎ在不同组织细胞生长发育　过程中的作用奠定基础。　１材料与方法　１．１材料①细胞：本研究所需细胞均由本实验室　细胞库提供。②试剂：ＲＰＭＩ　１６４０培养液购自ｓｉｇｍａ公　司；胎牛血清购自ｈｙｃｌｏｎｅ公司；Ｔｒｉｚｏｌ购自ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ　公司；ＡＭＶ一步法ＲＴ—ＰＣＲ试剂盒购自大连宝生物　公司；兔抗人ｎｅｕｒｉｔｉｎ多克隆抗体购自ｓａｎｔａ　ｃｒｕｚ公司。　１．２方法　１．２．１　细胞培养　培养液：含有１０％胎牛血清的　ＲＰＭＩ１６４０培养基；培养条件：置于３７￣Ｃ，５％ｃｏ２，　１００％饱和湿度的恒温培养箱中培养。　１．２．２　ＲＴ—ＰＣＲ检测ｎｅｕｎｔｉｎ　ｍＲＮＡ的表达利用　Ｔｒｉｚｏｌ试剂分别提取１１株细胞的总ＲＮＡ。经１％琼　脂糖凝胶电泳鉴定及ＯＤ２６０／ＯＤ２８０测定分析后，取　上述细胞的总ＲＮＡ各ｌ　，用ＡＭＶ一步法ＲＴ—ＰＣＲ　试剂盒鉴定ｎｅｕｆｉｔｉｎ基因的表达。Ｎｅｕｒｉｔｉｎ基因引物　序列如下：Ｐ１：５’一ＣＣＧ　ＧＡＡｑＴＣＣＡＡＴＧＧＧＡＣＴＦ　ＡＡＧＴＩＧＡＡＣＧＧＣ：ＡＧＡＴＡＴ一３’；下游引物Ｐ２：５’一　ＣＧＣＧＧＡＴＣＣ　ＧＡＡ（　；Ａ　Ａ　ＡＧＣＣＡＧＧＴＣＧＣＴＡ　Ａ　ＡＧＣＴ一　３’。Ｊ３一ａｃｔｉｎ为内参照，引物序列如下：Ｐ３：５’一ｃｃ—　ＣＡＴＣＴＡＣＧＡＧＧＧＣＴＡＴ一３’，Ｐ４：５’一ＡＡＧＡＡＧＧＡＡ　ＧＧＣＴＧＧＡＡＡ一３’循环参数：ＲＴ反应：５０℃３０分钟；　９４℃１２０秒，１个循环。ＰＣＲ反应：９４℃４５秒、６４℃　４５秒，７２℃１２０秒，３０个循环。待反应完毕，取反应　产物５ｔａ，进行１．５％琼脂糖凝胶电泳鉴定。　１．２．３免疫组化检测ｎｅｕｆｉｔｉｎ蛋白的表达在６孔　培养板内放置无菌盖玻片２４ｍｍ×２４ｍｍ，将细胞悬　基金项目：国家自然科学基金资助项目３０２６（１０２９　＊通讯作者：黄瑾，分子生物学教授，从事蛋白质与细胞因子功能研究，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｕａｎｇｊｉｎ６２３＠１６３．ｃｏｒｎ　・　１６１　・

　维普资讯 http://www.cqvip.com 第３期　农垦医学　第２９卷　液接种于盖玻片上，待细胞长至９０％，取出盖玻片，　ＰＢＳ冲洗后，放入丙酮中固定３０ｍｉｎｓ。ＰＢＳ冲洗　２ｍｉｎｓ　Ｘ　，滴加３％Ｈ７　０７室温孵育１０ｍｉｎ。ＰＢＳ冲洗　２ｍｉｎ　Ｘ　３，滴加兔抗人ｎｅｕｒｉｔｉｎ多克隆抗体（１：５０），放　入湿盒内３７℃孵育ｌｈ。ＰＢＳ冲洗２ｍｉｎ　Ｘ　３，滴加羊　抗兔Ｉ　一ＨＲＰ，３７℃孵育３０ｍｉｎｓ。ＰＢＳ冲洗２ｍｉｎ　Ｘ　３，ＤＡＢ显色，显微镜下观察，待出现特异性染色后，　终止显色，进行复染、脱水、透明、封片。　２结果　２．１　ＲＴ—ＰＣＲ检测结果分别抽提１１株细胞的总　ＲＮＡ，电泳可见ＲＮＡ　２８Ｓ、１８Ｓ和５Ｓ三条带（图１）。　纯度测定ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值为１．９，证明ＲＮＡ抽提　完整、无降解、无蛋白质污染。分别以上述总ＲＮＡ　为模板，以Ｐ１／Ｐ２、Ｐ３／Ｐ４为引物进行ＲＴ—ＰＣＲ。结　果显示：２９３Ｔ（人胚肾细胞）、ＨＵＶＥＣ（人脐静脉内皮　细胞）、ＨＶＳＭＣ（人脐静脉平滑肌细胞）、Ｓｏａｓ一２（骨　肉瘤细胞）、ＬＯＶＯ（结肠癌细胞）与Ｌ一０２（肝细胞）　的ＲＴ—ＰＣＲ产物在４５０ｂｐ左右出现特异条带，与　ｎｅｕｒｉｔｉｎ片断大小相符，而Ｈｅｌａ（－￣Ｌ腺癌细胞）、ＥＣＶ一　３０４（膀胱癌细胞）、ＳＫ（胆管内皮癌细胞）、ＨｅｐＧ２（肝　细胞癌细胞）与ＱＧＹ（肝细胞癌细胞）的ＲＴ—ＰＣＲ产　物未出现此条带，见图２。　寄　§蓍　２８Ｓ　｛８Ｓ　５Ｓ　图ｌ总ＲＮＡ　０Ｄ２６０／０Ｄ２８０＝１．９～２．０　２．２免疫组化检测结果ｎｅｕｒｉｔｉｎ相关抗原免疫组　阳性；而Ｈｅｌａ、ＥＣＶ一３０４、ＳＫ、ＱＧＹ、ＨｅｐＧ２的胞浆内　化检测，显微镜下观察：ＨＵＶＥＣ、ＨＶＳＭＣ、２９３Ｔ、Ｓｏａｓ　未见着色。同ＲＴ—ＰＣＲ的检测结果一致，见图３。　一２、Ｌ一０２、ｌｏｖｏ的胞浆内可见大量棕黄色颗粒，呈　

・　ｌ６２・　２　５０ｂｐ　ＯＯｂｐ　滠　惫　

，　氇　ｆ　≮（：　饕巷ｇａｉｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏ　图２　ＲＴ—ＰｃＲ　Ｎｅｕｒｉｔｉｎ在２９３Ｔ、ＨＵＶＥＣ、ＨＶＳＭＣ、Ｓ０ａｓ一２、ＬＯＶＯ、与Ｌ—ｏ２中的表　达量较高，Ｈｅｌａ、ＥＣＶ一３０４、ＳＫ、ＨｅｐＧ２与ＱＧＹ中ｎｅｕｒｉｔｉ

ｎ无表达　维普资讯 http://www.cqvip.com ２００７年６月　第２９卷第３期　农垦医学　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｎｇｋｅｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｊｕｎ．２００７　Ｖ０１．２９　Ｎｏ．３　

糯　．嚣：　：　：　ｊ　簟瓣　｜　●　●　女　姆　誊　ｊ　；　赣　辩　幸　‘　警　・　：　自　｝　罐　酶　》　譬蚺　自　｜　女　图３　ｍｅｕｒｉｔｉｎ相关抗原检测　ＨＶＳＭＣ，ｓａａｓ２，Ｌ一０２，２９３Ｔ，ＨＵＶＥＣ，ｌｏｖｏ的胞浆内可见大量棕黄色颗粒，核周密集。ＱＧＹ，ＥＣＶ一３０４，Ｈｅｌａ，ｈ印　，Ｓｋ的胞浆内未见着色。　３讨论　篓　。月装　翥炙　Ｎｅｕｒｉｔｉｎ是一种新的与神经可塑性相关的神经　营养因子，具有广泛的生物学活性：可促进神经突起　的快速生长和分支，并参与调节神经元突触活动，因　而对多种因素引起的神经系统退行性变及损伤等疾　病具有潜在的治疗作用。最初，ｎｅｕｒｉｔｉｎ被认为是一　条高度限制在神经系统表达的基因，组织表达的　Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ和原位杂交显示：胚鼠发育过程中，在　皮质、海马、嗅球的分化层都发现了ｎｅｕｒｉｔｉｎ　ｍＲＮＡ，　在成年期，ｎｅｕｒｉｔｉｎ的表达被高度限制在那些其结构　的改变与神经活动密切相关的组织，如海马、嗅球、　蒲肯野氏细胞＿２　Ｊ。　然而，早在１９９９年我们用多组织杂交膜，对心　脏、脑、胎盘等８种正常人体组织进行了Ｎｏｒｔｈｅｍ　Ｂｌｏｔ杂交时，就发现ｎｅｕｒｉｔｉｎ除了在脑组织高度表达　常组织的ｎｅｕｒｉｔｉｎ表达作了进一步的研究。结果显　示：ｎｅｕｒｉｔｉｎ除了在神经系统（脑）表达外，在肝组织　中有中度的表达，在心、肺、卵巢也有一定的表达。　与Ｋｏｊｉｍａ等报道的结果类似ｌＩ　。同期，我们应用酵　母双杂交技术ｌ　Ｊ，以ｎｅｕｒｉｔｉｎ作诱饵，从胎脑ｅＤＮＡ　文库中筛选得到５９条与ｎｅｕｒｉｔｉｎ有相互作用的蛋白　质的基因，经初步分析发现，Ｎｅｕｒｉｔｉｎ除了与神经相　关的蛋白质有相互作用，主要与细胞增殖和分化、肿　瘤相关以及信号转导相关的蛋白质有相互作用。本　研究的结果同样显示：ｎｅｕｒｉｔｉｎ不仅在多种正常细胞　中有表达，而且在部分肿瘤细胞中也有表达。与此　同时，我们在部分正常组织及肿瘤组织中同样也检　测到了ｎｅｕｒｉｔｉｎ的表达（待发表资料）。表明ｎｅｕｒｉｔｉｎ　不仅与神经系统的发育和成熟相关，而且可能与多　・　１６３　・

　维普资讯 http://www.cqvip.com 第３期　农垦医学　第２９卷　种组织器官的生长发育，甚至肿瘤的发生有关。　自１９９３年被发现以来，Ｎｅｕｒｉｔｉｎ的相关研究主　要集中于其在神经再生中的作用，对其在非神经组　织细胞生长分化中的作用，特别是在肿瘤发生发展　中的作用还知之甚少。因此，检测筛选ｎｅｕｒｉｔｉｎ高表　达与低表达细胞株，并进一步利用过表达与ＲＮＭ　技术探讨Ｂｅｕｒｉｔｉｎ对细胞增殖、凋亡及迁移等方面的　影响，对于全面了解ｎｅｕｒｉｔｉｎ的功能，将其更好地应　用于神经再生领域具有十分重要的意义。　参考文献　ｌ　Ｎｅｄｉｖｉ　Ｅ．｝　ｖｒｏｎｉ　Ｄ，Ｎａｏｔ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｎｍｅ￣ｓ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ　Ｉｅ—　ｌａｔｅｄ　ｇｅｎｅｓ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｃＤＮＡ　ｃｌｏｎｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ，ｌ９９３，３６３（２４）　：７ｌ８～７２２　２　Ｎａｃｒｅ　ＧＳ，Ｒａｍ＇ａｋｒｉｓｈｎａｎ　Ｍ，Ｋｒａｎｌｅｒ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｎｅｕｒｉｔｉｎ：Ａ　ｇｅｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｎｅｕｒａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ　ｔｈａｔ　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｎｅｕｒｉｔｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ．１９９７．９４（３）：２６４８—２６５３　３　ＮＭｉｖｉ　Ｅ．ＷｕＧ．ＣＩｉｎｅＨ．Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ　ｏｆＤｅｎｄｒｉｔｉｃＧｒｏｗｔｈ　ｂｙ　ＣＰＧ１５，ａｎＡｃ—　ｔｉｖｉｔｙ一｜ｌｌｄｕｅｅｌｔ　ＳｉｇｎａｌｉｎｇＭｏｌｅｃｕｌｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８１（１８）：１８６３一ｌ８６６　４　Ｉｓ＇ａｂｅｌ　Ｃａｎｔａｌｔｏｐｓ，Ｋｕｒｔ　Ｈａａｓ，Ｈｏｌ［ｉｓ　Ｔ．Ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ　ＣＰＧＩ５　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｓｙｎａｐｔｉｃ　ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｅｓｙｎａｐｔｉｃ　ａｘｏｎ　ａｒｂｏｒ　ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．Ｎａｔｕｒｅ　Ｎｅｔｕ＇￣ｓｃｉｅｎｃｅ．２０００．３（１０）：１００４～１０１ｌ　５　Ｊａｖａｈｅｒｉａｎ　Ａ．Ｃｌｉｎｅ　ＨＴ．Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ　Ｍｏｔｏｒ　Ｎｅｕｒｏｎ　Ａｘａｎ　Ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　Ｎｅｕｍ—ｍｕｓｃｕｌａｒ　ＳｙｎａｐｔｏｇｅｎｅｓｉｓＡｒｅ　Ｐｒｏｍｏｔｅｄ　ｂｙ　ＣＰＧＩ５　Ｉｎ　Ｖｉｖｏ．Ｎｅｕ—　ｒｏｌｌ，２ｏ０５，４５：５Ｏ５～５１２　６　Ｐｕｔｚ　Ｕ．Ｈａｒｗｅｌｌ　Ｃ．Ｎｅｄｉ￣ｉ　Ｅ．Ｓｏｌｕｂｌｅ　ＣＰＧ１５ｅｘｐｒｅｓ．￣ｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅａｒｌｙ　ｄｅ—　ｖｅｌｏｐｍｅｎｔｒｅｓｃｕｅｓ　ｃｏｒｔｉａｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｆｒｏｍ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｎａｔ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００５，８　（３）：３２３～３３１　７　Ｒｏｄｅｒｉｅｋ　Ａ，Ｃｏｒｒｉｖｅａｕ，Ｃａｒｌａ　Ｊ，ｅ１．ａ１．Ｄｙｎａｍｉｃ　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｐｇｌ５　ｄｕｒｉｎｇ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ——Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　Ｓｙｎａｐｔｉｃ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｍａｍｍａｌｉａｎ　Ｖｉ—　ｓｕａｌ　Ｓｙｓｔｅｍ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，１９（１８）：７９９９～８００８　８　Ｗｅｉ—Ｃｈｕｎｇ，Ａｌｌｅｎ　Ｉｃｅ　ａｎｄ　Ｅｌｌｙ　Ｎｅｄｉｖｉ．Ｅｘｔｅｎｄｅｄ　Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ　ｏｆ　Ｖｉｓｕａｌ　Ｃｏｒｔｅｘ　ｉｎ　Ｄａｒｋ—Ｒｅａｒｅｄ　Ａｎｉｍａｌｓ　Ｍａｙ　Ｒｅｓｕｌｔ　ｆｒｏｍ　Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｐｇｌ５一Ｌｉｋｅ　Ｇｅｎｅｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２ＯＯ２，２２（５）：１８０７～１８１５　９　Ｆｕｊｉｎｏ　Ｔ，Ｉｃｅ　ＷＣ，Ｎｅｄｉｖｉ　Ｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｐｇｌ５　ｂｙ￣ａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｔｈａｔ　ｍｅｄｉａｔｅ　ｓｙｎｏｐｔｉｃ　ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，　２００３，２４：５３８～５５４　１０　Ｐａｈｎｋｅ　Ｊ，Ｍｉｘ　Ｅ，Ｋｎｏｂｌｉｃｈ　Ｒ，ｅｔａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｉａｌ　ｃｅｌｌｌｉｎｅ—　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒｉｎｄｕｃｅｓ　ｇｅｎｅｓ　ｒｅ　ａｔｉｎｇｍｉｇｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｅｒ—　ｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎ￣ｄｒｏｎａｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　２Ｏ０４，２９７：４８４—４９４　ｌｌ　Ｋｏｊｉｍａ　Ｎ，Ｓｈｉｏｊｉｒｉ　Ｎ，Ｓａｋａｉ　Ｙ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆｎｅｕｒｉｔｉｎ　ｄｕｒｉｎｇｌｉｖ—　ｅｒ　ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ，２００５，５７９（２１）：４５６２～４５６６　１２　Ｐａｔｒｉｃｋ　ｓｅａｌｅ，Ｊｅｆｆｌｓｈｉｂａｓｈｉ，Ｃｈｅｔ　Ｈｏｈｅｒｍａｎ。ｅｔ　ａ１．Ｍｕｓｃｌｅ　ｓａｔｅｌｌｉｔｅ　ｃｅｌｌ　——ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｅｎｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｏｆＭｙｏＤ——ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｙｏ—　ｇｅｎｉｅ　ｃｅｌ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ＯＯ４，２７５：２８７～３００　ｌ３黄瑾，杨磊，应康，等．ｎｅｕｒｉｔｉｎ　ｅＤＮＡ的克隆及表达．复旦　学报（自然版），２００１，４０（５）：５２１～５２４　１４　Ｐｕｔｚ　Ｕ，Ｈａｒｗｅｌｌ　Ｃ，Ｎｅｄｉｖｉ　Ｅ．Ｓｏｌｕｂｌｅ　ＣＰＧＩ５ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅａｒｌｙ　ｄｅ—　ｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｒｅｓｃｕ￣ｃｏｒｔｉａｌ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｆｒｏｍ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｎａｔ　Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，２００５，　８（３）：３２３～３３１　ｌ５罗星，张峪涵，于娜，等．神经突起因子Ｎｅｕｒｉｔｉｎ酵母双杂交　诱饵质粒的构建和转化．中国公共卫生，２００６，２２（４）：４４４～４４５　Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｉｔｉｎ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｏｍｅ　Ｈｕｍａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ａｎｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌ　Ｌｉｎｅｓ　Ｘｕ　Ｆｅｎ　，Ｂａ　Ｐｅｎｇｆｅｉ　，Ｚｈａｎｇ　Ｓｈｕｊｕｎ　，Ｌｕｏ　Ｘｉｎｇ２，Ｈｕａｎｇ　Ｊｉｎ２　（１．Ｐｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅ　Ｂｉｏｃｈｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　２００４　ｇｒａｄｅ　ｉｎ　Ｓｈｉｈｅｚｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；　２．Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ　ｔａｂ　ｏｆ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ　ＫｅＹ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　ＸｉｎｊｉａｎｇＥＭｅｍｉｃ　ａｎｄ　Ｅｌｈｎｉｃ　Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｘｉｎｇｉｉａｎｇ　Ｓｈｉｈｅｚｉ，８３２Ｏ０２）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｗｉｔｈ　ｎｅｕｒｉｔｉｎ　ｈｉｇｈ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｓｅｔ　ａ　ｂａｓｅ，ｆｏｒ　ｍａｋｉｎｇ　ａ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｂｏｕｔ　ｎｅｕ—　ｒｉｔｉｎ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ａｎｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ：ｕｓｉｎｇ　ＲＴ—ＰＣＲ　ａｎｄ　ｂｍｎｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｅｘａｍｉｎｅｄ　ｎｅｔｗｉｔｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｅｌｅｖｅｎ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ａｔ　ｍＲＮＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌｅｖｅｌ，ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄ　ｔｈａｔ　ｎｏｔ　ｏｎｌｙ　ｍａｎｙ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｂｕｔ　ｓｅｒｏｅ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｎｅｕｒｉｔｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅｓ　ｗｉｔｈ　ｎｅｕｒｉｔｉｎ　ｈｉｇｈ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｅｘｐｒｅｓｉｏｎ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】Ｎｅｎｒｉｔｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；Ｈｕｍａｎ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ；ＲＴ—ＰＣＲ；Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ