【CN110093451A】用于测定重组人生长激素融合蛋白生物学活性的新方法【专利】

注射用重组人生长激素稳定性试验方案

一、研究目的

本试验旨在评估注射用重组人生长激素的稳定性，以确定其在一定条件下的质量保持期限。

二、试验方法

1.试验样品

-收集符合规定的注射用重组人生长激素样品，确保其符合药品质量标准。

-样品应避免暴露在光线和高温等有害因素下，同时在试验过程中避免反复冻融。

2.试验条件

-温度：在25°C±2°C的条件下进行试验。

-湿度：相对湿度控制在60%±5%。

-光照条件：采用黑暗遮光的环境，避免光照影响。

-储存容器：试验样品储存在由玻璃或塑料制成的密封容器中。

3.试验项目

-化学稳定性：包括药物活性、纯度、杂质含量、溶解度等方面的评估内容。

-物理稳定性：包括药物的颜色、外观、稠度等方面的评估内容。

-微生物稳定性：包括细菌、真菌等微生物污染的评估。 4.试验过程

-样品储存在不同时间点下，在试验结束时进行检测。

-化学稳定性：使用适当的化学分析方法，对样品进行相关化学指标的测定。

-物理稳定性：通过观察样品的外观、颜色、气味等特征判断其稳定性。

-微生物稳定性：使用适当的微生物检测方法，对样品进行微生物污染的评估。

5.数据分析

-根据试验结果，综合分析药物在不同条件下的稳定性表现。

-结合药物质量标准，确定药物的质量保持期限。

三、质量控制

2.试验操作：试验过程中严格按照标准操作规程进行，保证数据的准确性和可靠性。

3.试剂和仪器设备：选择合适的试剂和仪器设备，保证试验结果的准确性和可靠性。

4.数据分析：对试验结果进行统计分析和合理解释。

四、安全防范措施

1.安全操作：试验过程中保持良好的个人卫生，严格遵循实验室的操作规程。 2.废弃物处理：将试验所产生的废弃物进行分类和正确处理，遵循相关的废弃物处理规范。

通过以上试验方案，可以对注射用重组人生长激素的稳定性进行评估，并确定其质量保持期限，以保证药物在使用过程中的有效性和安全性。同时，该方案还包括了质量控制和安全防范措施，以确保试验过程的可靠性和安全性。

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日

(21)申请号 201910282012.0

(22)申请日 2019.04.09

(66)本国优先权数据201811566087.3 2018.12.20 CN

(71)申请人 中国食品药品检定研究院地址 100050 北京市东城区天坛西里2号

(72)发明人 饶春明　王军志　姚文荣　范文红　于雷　秦玺　史新昌　刘兰　

(74)专利代理机构 北京中知法苑知识产权代理事务所(普通合伙) 11226代理人 常玉明　张兰海

(51)Int.Cl.C12Q 1/6897(2018.01)C12Q 1/02(2006.01)C12N 15/85(2006.01)

(54)发明名称用于测定重组人生长激素融合蛋白生物学活性的新方法(57)摘要本发明涉及荧光素酶报告基因法测定重组人生长激素Fc融合蛋白的生物学活性。所述方法利用STAT5反应元件(SGG1)和GHR质粒，转染HEK293细胞后获得稳定表达SGG1荧光素酶报告基因和GHR的细胞株，加入生长激素Fc融合蛋白刺激后，激活SGG1反应元件下游荧光素酶报告基因表达，根据荧光信号值拟合四参数曲线确定生长激素Fc融合蛋白的生物学活性。本发明针对生长激素Fc融合蛋白的生物学活性测定建立了易于操作、灵敏度高、变异系数小和准确性高的检测方法，对于生长激素Fc融合蛋白的研发和生产

中的质量控制具有重要的指导作用。

权利要求书1页 说明书5页 附图4页CN 110093451 A2019.08.06

CN 110093451

A1.一种应用荧光素酶报告基因法来快速评价生长激素Fc融合蛋白(GH-Fc)生物学活性

的方法，其所述方法基于GH及其受体结合后激活JAK2-STATs信号途径，进而结合STAT5反应

元件后激活其下游荧光素酶基因的转录。

2.构建的荧光素酶报告基因细胞株包括获得稳定表达STAT5反应元件和GHR的细胞株，

2008年7月July2008色谱ChineseJournalofChromatographyVol.26No.4437～443

收稿日期:2008201205通讯联系人:郭　磊,博士,副研究员.Tel:(010)66930621,E2mail:guoleibmi@.基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:20705039).促红细胞生成素和人生长激素兴奋剂检测方法的研究进展

郭　磊,　张朝阳,　唐吉军,　谢剑炜

(军事医学科学院毒物药物研究所,北京100850)

摘要:在2008年世界反兴奋剂组织颁布的兴奋剂目录中,S2项肽类激素及相关品种均属于内源性生物大分子物质,如何区分所检测物质属于外界摄入还是机体分泌是此项检测的重点与难点。本文针对其中应用最为普遍、研究较为深入的促红细胞生成素(EPO)和人生长激素(hGH)的检测,从间接血液指标检测、直接检测途径等方面进行了分类评述,侧重于从理化分析方法、免疫分析方法角度阐述识别及区分重组蛋白与内源性蛋白的新途径。关键词:内源性物质;促红细胞生成素;人生长激素;兴奋剂检测方法;进展中图分类号:O658 文献标识码:A 文章编号:100028713(2008)0420437207 栏目类别:兴奋剂检测方法专栏

Recentadvancesinthedetectionofhumanerythropoietin

andhumangrowthhormonedoping

GUOLei,ZHANGZhaoyang,TANGJijun,XIEJianwei(BeijingInstituteofToxicologyandPharmacology,Beijing100850,China)

Abstract:IntheWorldAnti2dopingAgency2008ProhibitedList,theprohibitedsubstancesof

S2itemarehormonesandrelatedsubstances,whicharebelongingtotheendogenousbiomac2

重组人Era蛋白的可溶性表达、 纯化及生物学活性测定

吴元明, 张晓楠, 邢小红, 张俊杰, 陈南春, 陈苏民

【摘要】 目的: 为了取得可溶性表达的人Era（hEra）蛋白,

并检测其生物学活性。方式: 把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMALp2x中。pMALhEra转化大肠杆菌TB1, 用异丙基硫代βD半乳糖苷（IPTG）诱导表达。 结果: pMALhEra载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在, 表达量占菌体总蛋白的%。再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化, 接着用因子X将融合部份切除, 但切除后的hEra蛋白不稳固, 随着时刻的延长而被降解。活性测定结果说明人Era蛋白能与GTP结合, 并具有GTP酶的活性。结论: 可溶性表达了人Era蛋白, 并用体外实验证明人Era蛋白是一种G蛋白, 这对人era基因的功能研究具有重要意义。

【关键词】 人Era 可溶性表达 生物活性测定

[Abstract] AIM: To prepare a soluble human Era(hEra)

protein and to measure its bioactivity. METHODS: Human era cDNA

gene from pUC19 plasmid was subcloned into the expression

plasmid pMALp2x. pMALhEra was transducted to TB1 and the

strain was induced by isopropyl βDthiogalactopyranoside (IPTG). RESULTS: The expressed MBPfused protein existed in

a soluble form. The fused protein made up % of the total cell