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酸性染料比色法测定痹痛消膏中乌头生物碱的含量
蔡大可;李耿;彭绍忠;何耀慧;林忠泽;古挺威;苏子仁
【期刊名称】《中药新药与临床药理》
【年(卷),期】2007(18)1
【摘要】目的测定痹痛消膏中乌头类生物碱的含量,对该剂型的乌头生物碱进行限量控制。
方法采用酸性染料比色法测定,并对线性范围、加样回收率、精密度、专属性、稳定性等项目进行了方法学考察。
结果测定方法线性范围0.119～0.714mg,相关系数为0.9993,平均回收率97.4%,具有良好的精密度、专属性和稳定性。
结论该法准确可靠、简便易行,可用于测定痹痛消膏中乌头酯型生物碱的含量。
【总页数】3页(P57-59)
【关键词】离子对萃取-分光光度法;乌头酯型生物碱;含量测定
【作者】蔡大可;李耿;彭绍忠;何耀慧;林忠泽;古挺威;苏子仁
【作者单位】广州中医药大学
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.酸性染料比色法测定川乌、草乌中总乌头生物碱的含量 [J], 李云霞;孙照;郭艳玲
2.酸性染料比色法测定百部养肺膏中总生物碱的含量 [J], 徐玲玲;王凌
3.酸性染料比色法测定燕麦中总生物碱含量条件优化 [J], 王晶晶;孙敏;宋诗清;冯涛;姚凌云
4.酸性染料比色法测定妇科洗剂中总生物碱含量 [J], 蒋洁君;陆杰霖;汪怡
5.酸性染料比色法测定乌头属不同药材中乌头生物碱含量 [J], 张敏敏;蔡晓丹;李耿;肖日平;阮永队;马春玲;陈长青;赖小平
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聚焦微波辅助提取-酸性染料分光光度法测定农吉利中总生物碱樊轻亚;游国叶【摘要】采用聚焦微波辅助提取(FMAE)结合溴麝香草酚蓝分光光度法测定农吉利中总生物碱.粒径为0.180 mm的样品,以甲醇为溶剂,料液比为1比25,在微波功率中火条件下提取50 min.在pH7.2的磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液中,提取得到的生物碱与溴麝香草酚蓝酸性染料形成缔合物,用三氯甲烷萃取后,在最大吸收波长417 nm处测量其吸光度.总生物碱的质量浓度在0.25～250mg· L-1范围内呈线性,方法的检出限(3S/N)为1.5 mg· L-1.应用该方法测定农吉利药材中总生物碱,加标回收率为105％,测定值的相对标准偏差(n=6)小于3.0％.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2015(051)003【总页数】4页(P289-292)【关键词】分光光度法;酸性染料;聚焦微波辅助提取;农吉利;生物碱【作者】樊轻亚;游国叶【作者单位】信阳职业技术学院药学院,信阳464000;信阳职业技术学院药学院,信阳464000【正文语种】中文【中图分类】O657.32农吉利为豆科猪屎豆属多年生直立小草木，具有清热解毒，除湿消积的功效，用于治疗痢疾、疮疖、小儿疳积，近年来，在临床上用作抗癌药［13］。
农吉利含有黄酮类化合物及多种生物碱，其中含量较多的生物碱为农吉利乙素、农吉利丙素及农吉利甲素［4－8］。
微波辅助提取（MAE）根据装置的不同可分为聚焦微波辅助提取（FMAE）和密闭微波辅助提取（PMAE）两种［9－11］。
MAE技术具有选择性高、操作时间短、溶剂消耗量少、不产生噪声、适合用热不稳定成分等优点，进一步拓展了MAE技术在天然药物有效成分提取中的应用前景。
本工作以农吉利全草为研究对象，将FMAE技术应用于农吉利中总生物碱的提取，结合有机溶剂萃取法，采用正交试验方法对FMAE提取试验条件进行了优化，采用酸性染料分光光度法法测定农吉利总生物碱的含量，得出FMAE提取农吉利总生物碱的最佳工艺条件。
酸性染料比色法测定乌头属不同药材中乌头生物碱含量
张敏敏;蔡晓丹;李耿;肖日平;阮永队;马春玲;陈长青;赖小平
【期刊名称】《中医药导报》
【年(卷),期】2012(18)8
【摘要】目的:测定毒性中药附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿的乌头生物碱含量,对这4种药材的临床用量进行控制。
方法:用酸性染料比色法,测定制附子、川乌、草乌中雪上一枝蒿的乌头生物碱含量。
结果:附子中生物碱含量为0.2403 mg/g,川乌为1.0412 mg/g,草乌为2.1149 mg/g,雪上一枝蒿为0.6702 mg/g。
结论:本实验中建立的酸性染料比色法测定乌头生物碱含量,可作为评价毒性药材质量的根据。
【总页数】3页(P78-79)
【关键词】酸性染料比色法;乌头属;生物碱;附子;川乌;草乌;雪上一枝蒿
【作者】张敏敏;蔡晓丹;李耿;肖日平;阮永队;马春玲;陈长青;赖小平
【作者单位】广州中医药大学;塘厦医院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.酸性染料比色法测定呼和嘎日迪-9总乌头碱含量 [J], 萨仁格日乐;陈红梅
2.酸性染料比色法测定川乌、草乌中总乌头生物碱的含量 [J], 李云霞;孙照;郭艳玲
3.液相色谱/质谱/质谱联用法测定乌头属药材及中成药中乌头类生物硷含量 [J], 王兆基;何绍基;徐树棋
4.酸性染料比色法测定痛血康胶囊总乌头碱含量 [J], 陈美川
5.酸性染料比色法测定痹痛消膏中乌头生物碱的含量 [J], 蔡大可;李耿;彭绍忠;何耀慧;林忠泽;古挺威;苏子仁
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酸性染料比色法测定斜脉暗罗茎、叶和皮中总生物碱含量刘冰晶;曾靖;李超;杜兵;曾发挥;曾雪亮
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2014(42)1
【摘要】以小檗碱为对照品，在pH值为4．5的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，以溴甲酚绿指示液为显色剂，利用分光光度法在628 nm测定斜脉暗罗中总生物碱含量，结果表明，小檗碱对照品在2．0～12．0 mg/L范围内浓度（C）与吸光度（D）呈线性关系，回归方程为 D＝0．0082C＋0．1671，r＝0．9991；斜脉暗罗茎、叶和皮中的总生物碱含量分别为0．2671％、1．4737％和0．7908％。
分光光度比色法测定总生物碱含量操作简便，结果可靠，重复性好，可用于斜脉暗罗总生物碱含量的测定。
【总页数】2页(P263-264)
【作者】刘冰晶;曾靖;李超;杜兵;曾发挥;曾雪亮
【作者单位】赣南医学院药学院，江西赣州341000; 江西省脑血管药理重点实验室，江西赣州341000;赣南医学院药学院，江西赣州341000; 江西省脑血管药理重点实验室，江西赣州341000;赣南医学院药学院，江西赣州341000;赣南医学院药学院，江西赣州341000;赣南医学院药学院，江西赣州341000;赣南医学院药学院，江西赣州341000
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.酸性染料比色法测定苦马豆中总生物碱含量
2.酸性染料比色法测定炮制前后吴茱萸中总生物碱含量
3.酸性染料比色法测定燕麦中总生物碱含量条件优化
4.酸性染料比色法测定红茂草中总生物碱含量
5.酸性染料比色法测定妇科洗剂中总生物碱含量
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酸性染料比色法测定蒙成药道古勒额布斯—7汤中苦参总生物
碱的含量
王青虎;乌日图巴雅尔
【期刊名称】《内蒙古民族大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2002(017)001
【摘要】采用酸性染料比色法测定道古勒@额布斯-7汤中苦参总生物碱的含量,结果平均回收率为98.3%,RSD=0.70%,线性范围为3.33～16.67μg/ml.
【总页数】2页(P82-83)
【作者】王青虎;乌日图巴雅尔
【作者单位】内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古,通辽,028041;内蒙古通辽市扎鲁特旗阿日昆都乐卫生院,内蒙古,扎鲁特,029100
【正文语种】中文
【中图分类】R917
【相关文献】
1.酸性染料比色法测定蒙成药呼和嘎日迪-9的总乌头碱含量 [J], 萨仁格日乐;陈红梅
2.薄层扫描法测定蒙药道古勒·额布斯-7汤中苦参碱的含量 [J], 矫秀环;刘春妮;刘春华
3.酸性染料比色法测定蒙药合日呼——5汤中总生物碱的含量 [J], 白玉霞
4.酸性染料比色法测定黄连解毒汤中总生物碱的含量 [J], 汪怡
5.酸性染料比色法测定苦参药材中总生物碱的含量 [J], 李建伟
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第Ｊ７卷第１期 ２００２年２月 内蒙古民族大学学报（自然科学版） ｊ０岍Ｉａ１ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ 、 ｝＿１７ Ｎｏ １
Ｆ＿ｅｂ．２ｏ０２
酸性染料比色法测定蒙成药道古勒・ 额布斯一７汤中苦参总生物碱的含量
王青虎 ，乌日图巴雅尔 （】．内蒙古民旌大学蒙医药学院．内蒙古通辽０２８，０４１；２内蒙古通辽市扎鲁特旗阿日昆都乐卫生院．内蒙古扎鲁特０２９１００） 攘要：采用酸性染料比色法测定道古勒・额布斯一７汤中苦参总生物碱的含量，结果平均回收率为９８ ３％， ＲＳＤ＝０．７０％，线性范围为３．３３－－１６．６７ｇｇ／ｍｌ 关键词：酸性染料比色法；道古勒－额布斯一７汤；苦参总生物碱；含量测定 中围分类号：Ｒ９１７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１－９１８５｛０３）０２｝０１—００８２—０２
Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＡＲＳＦ ｉｎ Ｄａｏｇｕｌｅ’ｅｂｕｓｉ一７ Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ｂｙ Ａｃｉｄ Ｄｙｅｓ Ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｒｙ
ＷＡＮＧ Ｑｉｎｇ—ｈｕ ，ＷｒｉｕｂａｙａＹ （Ｌ．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｏｎａ］Ｍｏｎｇ￣ｏｌｉｅｍ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｉｎｎｅｒ．Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｆｏｒ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｍ，Ｔｏｎｇｌｉａｏ ０２８０４１，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｔｏｎｇｌｉａｏ ａｔｙ Ｚｈａ］ｕｔｅ Ｃｏｕｎｔｙ Ａｒｉｋｕｎｄｕｌｅ Ｃｌｉｎｉｃ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏ１ｉａ，Ｔｏｎｇｌｉａｏ ０２９１００．Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｒａｄｉｘ ｓｏｐｈｏｒａｅ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｔｉｓ（ＴＡｉＲＳＦ）ｉｎ Ｄａｏｇｕｌｅｅｂｕｓｉ 一２ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ａｃｉｄ ｄｙｅｓ ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｗ Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅＤ，ｗａｓ ９８ ３％．ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ０ ７％．ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ ３ ３３～ｌ６ ６７￣ｇ／ｍ１． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ａｃｉｄ ｄｙｅｓ ｃｈｒｏｍｏｍｅｔｒｙ；Ｄａｏｇｕｅｅｂｕｓｉ～７ ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；Ｔｏｔａｌ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｒａｄｉｘ ｓｏｐｈｏｍｅ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｔｉｓ；Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
那鲁注射液中草乌总碱的酸性染料比色测定法
邹恩济
【期刊名称】《中草药》
【年(卷),期】1986(0)12
【摘要】本文对离子对萃取酸性染料比色法测定那鲁注射液中草乌总碱的条件进行研究,拟定了那鲁注射液中草乌总碱的含量测定方法。
【总页数】2页(P10-10)
【关键词】那鲁注射液;草乌总碱;含量测定
【作者】邹恩济
【作者单位】内蒙古中蒙医研究所
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3;R286.0
【相关文献】
1.酸性染料比色法测定川乌、草乌中总乌头生物碱的含量 [J], 李云霞;孙照;郭艳玲
2.酸性染料比色法测定苦木注射液总生物碱含量 [J], 郝盛源;宋立敏;刘燕;许卉
3.酸性染料比色法测定燕麦中总生物碱含量条件优化 [J], 王晶晶;孙敏;宋诗清;冯涛;姚凌云
4.基于溴甲酚绿酸性染料比色的玛咖酒中总生物碱的检测方法构建 [J], 王丹;袁强;张琴;刘小刚;郑若欣;马康;陈涛;吉喆;吴卫宇;李芳芳;兰余;曹晓念
5.中成药中乌头总碱的酸性染料比色测定法 [J], 陈其华;范丽霞
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酸性染料比色法测定痛血康胶囊总乌头碱含量
陈美川
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2012(024)010
【摘要】目的建立酸性染料法测定痛血康胶囊总乌头碱含量的方法.方法以总乌头碱为指标,采用酸性染料比色法测定总乌头碱含量,检测波长为416nm.结果总乌头碱含量为0.59%,RSD为1.1%;加样平均回收率为99.1%,RSD为0.4%.结论本方法操作简便,结果准确,为痛血康胶囊含量测定方法的改进提供实验依据.
【总页数】2页(P106-107)
【作者】陈美川
【作者单位】福建省三明市药品检验所,三明,365000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.酸性染料比色法测定蒙成药呼和嘎日迪-9的总乌头碱含量 [J], 萨仁格日乐;陈红梅
2.酸性染料比色法测定呼和嘎日迪-9总乌头碱含量 [J], 萨仁格日乐;陈红梅
3.酸性染料比色法测定燕麦中总生物碱含量条件优化 [J], 王晶晶;孙敏;宋诗清;冯涛;姚凌云
4.酸性染料比色法测定妇科洗剂中总生物碱含量 [J], 蒋洁君;陆杰霖;汪怡
5.酸性染料比色法测定乌头属不同药材中乌头生物碱含量 [J], 张敏敏;蔡晓丹;李耿;肖日平;阮永队;马春玲;陈长青;赖小平
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㊀ә基金项目:贵州ＧＮＹＬ(２０１７)００８ꎬ黔苗医药Ｋ字[２０１７]０３６㊀作者简介:杨雅欣(１９９０－)ꎬ女ꎬ从事中药民族药有效成分分离分析研究ꎮ㊀∗通讯作者:张敬杰(１９７１－)ꎬ女ꎬ教授ꎬ从事民族药资源及活性成分的研究ꎮ苗药紫金龙中生物碱含量的酸性染料比色法测定ә杨雅欣１㊀徐仕娟１㊀冯小翠１㊀罗国勇１㊀张敬杰２∗(１.贵阳中医学院贵州省苗医药重点实验室ꎬ贵州㊀贵阳㊀５５００２５ꎻ㊀２.贵阳中医学院第二附属医院ꎬ贵州㊀贵阳㊀５５０００２)摘㊀要㊀目的:测定苗药紫金龙中总生物碱的含量ꎬ为其质量控制提供实验依据ꎮ方法:以乌头碱为标准品ꎬ采用酸性染料比色法测定紫金龙总生物碱的含量ꎮ结果:乌头碱在０.１ｍｇ/ｍＬ~０.３ｍｇ/ｍＬ范围内ꎬ回归方程为Ｙ＝２.７６Ｘ＋０.０３８６(ｒ＝０.９９９)ꎬ吸光度与浓度具有良好的线性关系ꎬ平均回收率为９３.１５％ꎬＲＳＤ＝０.０２％ꎮ结论:该方法准确度好ꎬ具有一定的专属性ꎬ为紫金龙质量的控制提供实验基础ꎮ关键词㊀紫金龙ꎻ总生物碱ꎻ酸性染料比色法中图分类号:Ｒ２９１.６㊀文献标识码:Ｂ㊀文章编号:１００６－６８１０(２０１８)１０－００４１－０２㊀㊀紫金龙为毛茛科乌头属植物深裂黄草乌(Ａｃｏｎｉｔｕｍｖｉｌ￣ｍｏｒｉｎｉａｎｕｍｖａｒ.ａｌｔｉｆｉｄｕｍＷ.Ｔ.Ｗａｎｇ)的根及根茎ꎮ收载于«贵州省中药材㊁民族药材质量标准»(２００３版)ꎮ是苗族习用药材ꎬ具有祛风除湿ꎬ温经止痛的功效ꎬ用于治疗风湿性关节炎等病症[１]ꎮ据文献报道ꎬ该属植物中的化学成分包括生物碱㊁黄酮㊁甾体及糖苷类等ꎬ其中有效成分及特征成分主要为二萜生物碱类[２－４]ꎮ因二萜生物碱类化合物广泛的生物活性ꎬ一直是药物学家寻找新药的一个重要来源[５]ꎮ目前ꎬ未见紫金龙总生物碱含量测定的文献报道ꎮ酸性染料比色法是测定中药总生物碱含量的一种经典方法[６－７]ꎬ本文拟通过紫外－可见分光光度计ꎬ利用酸性染料比色法测定苗药紫金龙中总生物碱的含量ꎮ旨在建立紫金龙提取物中总生物碱含量测定的方法ꎬ为其质量评价提供科学依据ꎮ１㊀仪器与试药１.１㊀仪器㊀紫外可见分光光度计(ＵＶ－５００ꎬ上海元析仪器有限公司)ꎬ超声波清洗器(ＳＫ８２１０ＨＰꎬ上海科导超声仪器有限公司)ꎬ恒温水浴锅(ＤＲＨＨꎬ上海双捷实验设备有限公司)ꎬ分析天平(ＡＲ２１４０ꎬ上海奥豪斯有限公司)ꎮ１.２㊀试药㊀乌头碱对照品(３０２－２７－２ꎬ贵州迪大科技有限责任公司ꎬ纯度ȡ９８％)ꎻ无水乙醇(分析纯ꎬ天津市富宇精细化工有限公司)ꎬ石油醚(分析纯ꎬ天津市凯信化学工业有限公司)ꎬ正丁醇(分析纯ꎬ天津市富宇精细化工有限公司)ꎬ氯仿(分析纯ꎬ西陇化工股份有限公司)ꎬ甲醇ꎬ氢氧化钠等均为分析纯ꎻ溴甲酚绿(指示剂ꎬ天津市科密欧化学试剂有限公司)ꎬ实验用水为蒸馏水ꎮ１.３㊀药材㊀药材购自贵阳市万东桥中药市场ꎬ经贵阳中医学院孙庆文教授鉴定为毛茛科乌头属植物深裂黄草乌Ａｃ￣ｏｎｉｔｕｍｖｉｌｍｏｒｉｎｉａｎｕｍｖａｒ.ａｌｔｉｆｉｄｕｍＷ.Ｔ.Ｗａｎｇ的根茎ꎮ２㊀方法与结果２.１㊀试液溶液的制备２.１.１㊀供试品溶液的制备㊀精密称取紫金龙药材粉末(过６０目筛)２.０ｇ于２５ｍＬ的圆底烧瓶中ꎬ按紫金龙最佳提取方案[８]ꎬ加入固液比１:８的６５％乙醇溶液１６ｍＬꎬ８５ħ水浴回流提取２.５ｈꎬ冷却ꎬ过滤ꎬ７０ħ蒸干溶剂ꎬ浸膏加入７５％乙醇１５ｍＬ使之溶解ꎬ转入分液漏斗中ꎬ分别用等体积的石油醚㊁氯仿㊁正丁醇依次萃取３次ꎬ合并萃取液ꎬ取氯仿萃取液所得浸膏用７５％乙醇５ｍＬ溶解至完全ꎬ精密量取０.３ｍＬ于５ｍｌ容量瓶中ꎬ７５％乙醇定容至刻度ꎬ即得供试品溶液ꎮ２.１.２㊀对照品溶液的制备㊀精密称取乌头碱对照品５.０ｍｇꎬ甲醇定容至５ｍＬꎬ制得１.０ｍｇ/ｍＬ对照品贮备液ꎬ逐级稀释ꎬ得到０.１㊁０.１５㊁０.２㊁０.２５㊁０.３ｍｇ/ｍＬ的乌头碱对照品溶液ꎮ２.１.３㊀酸料染料的制备[９]㊀０.０５ｍｏｌ/Ｌ氢氧化钠溶液的配制:精密称取氢氧化钠０.２ｇ于１００ｍＬ锥形瓶中ꎬ加入蒸馏水使之溶解并稀释至刻度ꎬ即得ꎮ溴甲酚绿缓冲液的配制:精密称取溴甲酚绿０.１ｇꎬ加入０.０５ｍｏｌ/Ｌ氢氧化钠２.８ｍＬ使之溶解ꎬ再加水稀释至２００ｍＬꎬ即得ꎮ２.２㊀测定条件的选择２.２.１㊀酸性染料的显色方法㊀精密吸取乌头碱对照品或供试品溶液１.２ｍＬ置６０ｍＬ的分液漏斗中ꎬ分别加入溴甲酚绿溶液２４ｍＬ和氯仿１２ｍＬꎬ密塞剧烈振摇２０ｍｉｎꎬ静置分层１０ｍｉｎꎬ取氯仿层进行紫外－可见光检测ꎮ２.２.２㊀测定波长的选择㊀以２.１.１ꎬ２.１.２的方法分别制备供试品及对照品溶液ꎬ并按照２.２.１的显色方法显色ꎬ在１９０~８００ｎｍ波长范围内进行光谱扫描ꎬ考察吸收波长ꎮ结果表明ꎬ供试品在４１０~４２０ｎｍ处有最大吸收ꎬ乌头碱对照品在４１０~４１５ｎｍ处有最大吸收峰ꎬ综合考虑ꎬ最终选择４１５ｎｍ作为实验检测波长ꎮ２.３㊀酸性染料比色法的方法学考察２.３.１㊀标准曲线的制备㊀精密称取乌头碱对照品５.０ｍｇꎬ１４中国民族医药杂志㊀２０１８年１０月㊀第２４卷㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀甲醇定容至５ｍＬꎬ制得１.０ｍｇ/ｍＬ对照品贮备液ꎬ逐级稀释ꎬ得到０.１㊁０.１５㊁０.２㊁０.２５㊁０.３ｍｇ/ｍＬ的乌头碱对照品溶液ꎮ分别精密吸取１.２ｍＬ置６０ｍＬ的分液漏斗中ꎬ加入溴甲酚绿溶液２４ｍＬ和氯仿１２ｍＬꎬ密塞剧烈振摇２０ｍｉｎꎬ静置分层１０ｍｉｎꎬ取氯仿层于４１５ｎｍ波长处测定吸光度值ꎮ以对照品浓度为横坐标ꎬ吸光度值为纵坐标绘制曲线ꎬ得回归方程为Ｙ＝２.７６Ｘ＋０.０３８６(ｒ＝０.９９９ꎬｎ＝５)ꎮ结果表明ꎬ乌头碱的浓度在０.１ｍｇ/ｍＬ－０.３ｍｇ/ｍＬ范围内与吸光度值呈良好的线性关系ꎮ图1标准曲线的绘制２.３.２㊀精密度试验㊀精密吸取浓度为０.２ｍｇ/ｍＬ的乌头碱对照品置于分液漏斗中ꎬ按 ２.２.１ 项下的操作方法ꎬ取氯仿层于４１５ｎｍ波长处测定吸光度ꎬ连续测定６次ꎬ测得ＲＳＤ＝０.７４％ꎬ说明仪器所测得数据准确可靠ꎮ２.３.３㊀重现性试验㊀取同一批紫金龙药材细粉６份ꎬ每份２.０ｇꎬ按照 ２.１.１ 项下方法制备供试品溶液ꎬ精密吸取供试品溶液６份ꎬ每份１.２ｍＬꎬ依 ２.２.１ 项下方法处理显色后ꎬ于４１５ｎｍ波长处测定吸光度ꎬ结果紫金龙中总生物碱平均含量为７.８２ｍｇ/ｇꎬＲＳＤ＝１.４３％ꎬ表明实验方法重现性良好ꎮ２.３.４㊀稳定性试验㊀精密吸取同一供试品溶液１.２ｍＬꎬ依 ２.２.１ 项下方法处理显色后ꎬ分别在０ꎬ２０ꎬ４０ꎬ６０ꎬ８０ꎬ１００ｍｉｎ于４１５ｎｍ波长处测定吸光度ꎬ结果ＲＳＤ＝０.８０％ꎬ表明供试品溶液在１００ｍｉｎ内基本稳定ꎮ２.３.５㊀加样回收率试验㊀精密称取已知含量的紫金龙药材粉末６份ꎬ分别加入等量乌头碱对照品ꎬ按 ２.１.１ 项下方法制备供试品溶液ꎬ依 ２.２.１ 项下方法处理显色后ꎬ于４１５ｎｍ波长处测定吸光度ꎬ根据回归方程计算回收率ꎮ结果见表１ꎮ表１㊀紫金龙总生物碱加样回收率测定结果样品量(ｍｇ)对照品量(ｍｇ)吸光度回收率(％)平均回收率(％)ＲＳＤ(％)５００.０４.８９６０.６５８９０.９２５００.１４.８９７０.６６１９１.８２９３.１５０.０２５００.１４.８９７０.６６５９３.０６５００.２４.８９８０.６７４９５.８１５００.２４.８９８０.６６４９２.７３５００.３４.８９９０.６７０９４.５６２.３㊀样品的含量测定㊀取４个批次的紫金龙提取物ꎬ每个批次平行测定３次ꎬ每次精密量取１.２ｍＬꎬ依 ２.２.１ 项下进行酸性染料比色ꎬ取氯仿层于４１５ｎｍ波长处测定吸光度ꎬ根据标准曲线计算紫金龙总生物碱的含量ꎬ得出紫金龙中总生物碱平均含量为７.２７ｍｇ/ｇꎮ表２㊀紫金龙提取物中总生物碱含量测定结果(ｎ＝３)序号紫金龙提取物批次总生物碱含量(ｍｇ/ｇ)平均含量(ｍｇ/ｇ)１２０１６１００１９.７９２２０１６０１０５８.２３３２０１６０３０７４.６１４２０１６０９０９６.４５７.２７３㊀讨论酸性染料比色法是生物碱类化合物与氢离子生产阳离子ꎬ酸性染料比色与其定量结合成有色络合物ꎬ被有机溶剂提取ꎬ在一定波长处测定其吸光度ꎬ即可计算总生物碱的含量[６]ꎮ酸性染料比色法所测定的结果较准确ꎬ应用较多ꎮ本实验采用酸性染料比色法ꎬ通过紫外－可见分光光度计检测对苗药紫金龙药材总生物碱进行定量分析ꎬ建立其中总生物碱含量测定的方案ꎮ测得紫金龙提取物中总生物碱的含量平均为７.２７ｍｇ/ｇꎮ该方法具有一定的专属性和准确度ꎬ灵敏度高ꎬ简便易行ꎬ适宜紫金龙药材中总生物碱含量测定ꎮ参考文献[１]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材㊁民族药材质量标准[Ｍ].贵阳:贵州科技出版社ꎬ２００３:３６８. [２]李谦ꎬ过立农ꎬ郑健ꎬ等.乌头属药用植物的研究进展[Ｊ].药物分析杂志ꎬ２０１６ꎬ３６(７):１１２９－１１４９. [３]安婧娴ꎬ刘芳ꎬ曾光尧ꎬ等.近年来乌头属植物二萜生物碱化学成分及其镇痛活性研究进展[Ｊ].中南药学ꎬ２０１６ꎬ１４(５):５２１－５２５.[４]薛姣ꎬ杨春华ꎬ刘静涵ꎬ等.乌头属植物二萜生物碱研究进展[Ｊ].海峡药学ꎬ２００９ꎬ２１(２):１－１０.[５]杨雅欣ꎬ刘俊宏ꎬ李勇军ꎬ等.紫金龙低极性部位的生物碱成分研究[Ｊ].天然产物研究与开发ꎬ２０１５ꎬ２７(１):６１３－６１６.[６]姜华ꎬ李军ꎬ徐强ꎬ等.白屈菜中总生物碱含量的酸性染料比色法测定[Ｊ].时珍国医国药ꎬ２０１７ꎬ２８(４):８５４－８５６.[７]姚德中ꎬ闵会ꎬ何厚洪ꎬ等.不同产地浙贝母总生物碱含量测定与比较[Ｊ].中国现代应用药学ꎬ２０１４ꎬ１０(３１):１２４９－１２５１.[８]张琴ꎬ徐斌ꎬ贾琦ꎬ等.Ｃ１８型二萜生物碱化学成分及药理活性研究进展[Ｊ].中成药ꎬ２００９ꎬ３８(５):１１０９－１１１４. [９]卢馨ꎬ刘文虎ꎬ曾里ꎬ等.酸性染料比色法测定玛咖总生物碱含量的方法研究[Ｊ].食品工业ꎬ２０１４ꎬ３５(１):２４１－２４４.２０１８年５月７日收稿２４㊀㊀㊀㊀㊀ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＰｈａｒｍａｃｖｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｉｎｏｒｉｔｉｅｓ㊀Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１８ꎬＶｏｌ.２４Ｎｏ.１０。
酸性染料比色法测定玛咖总生物碱含量的方法研究卢馨1，刘文虎1，曾里1，黄张君2，易彬2，曾凡骏1*1. 四川大学食品科学与工程系（成都 610065）；2. 泸州老窖集团养生酒业有限责任公司（泸州 646000）摘要以苦参碱为对照品, 采用酸性染料比色法测定玛咖总生物碱的含量, 研究并建立玛咖总生物碱的测定方法。
对检测方法使用的最大吸收波长、缓冲液pH、缓冲液用量、0.05%溴甲酚绿显色剂用量、溶液振摇时间、氯仿萃取时间进行了优化研究。
结果显示, 此方法精密度RSD=0.95%, 回收率为108.03%, RSD=0.79%, 表明该方法具有较好的精密度和稳定性; 且操作简单, 具有良好的可重复性。
此方法测得云南丽江玛咖总生物碱含量为0.7%, 苦参碱最低检测限为0.86 μg。
关键词酸性染料比色法; 玛咖; 总生物碱Determination of Total Alkaloids in Maca by Acid Dye Colorimetry Lu Xin1, Liu Wen-hu1, Zeng Li1, Huang Zhang-jun2, Yi Bin2, Zeng Fan-jun1*1. Department of Food Science, Sichuan University (Chengdu 610065);2. Luzhou Laojiao Group Health Wine Industry Co., Ltd. (Luzhou 646000)Abstract With the matrine as reference, establish a method for the determination of total alkaloids in Maca by acid dye colorimetry, and research and establish the determination methods of total alkaloids in Maca. The detection method of the maximum absorption wavelength, buffer pH, the dosage of buffer solution, 0.05% of bromocresol green coloration agent dosage, solution of shaking time, chloroform extraction time were studied. The results showed that the RSD=0.95% of precision, the recovery was 108.03%, RSD=0.79%, showed that the method had good precision and stability; And the operation is simple, with good repeatability. This method measured the content of alkaloids was 0.7% of Maca, the lowest detection limit of matrine was 0.86 μg.Keywords acid dye colorimetry; Maca; total alkaloids玛咖（Lepidium meyenii Walp），十字花科独行菜，属一年生或2年生草本植物，原产于秘鲁安第斯山区[1]，其块根可以药食兼用，具有悠久历史，近十多年来更逐渐成为开发的热点之一。
生物碱是含负氧化态氮原子的环状化合物[2]，广泛存在于生物有机体中。
适量的总生物碱对人体具有镇痛、消炎、降压、抑菌、抗氧化及抗癌等多种生理活性[3]，因此研究玛咖中总生物碱的测定方法具有非常重要的意义。
总生物碱含量定量分析方法常用方法有滴定法和酸性染料比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和气相色谱法等[4]。
本研究对玛咖总生物碱的酸性染料比色法进行了研究和探索。
1 材料与方法1.1 材料与设备原料与试剂：玛咖粉：产地为云南丽江，由丽江百岁坊生物科技开发有限公司提供；95%乙醇；2%HCl；1mol/L NaOH溶液；pH 3.6盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液；0.05%溴甲酚绿指示液（溴甲酚绿显色剂）；苦参碱标品溶液：8.6 mg/100 mL；氯仿；蒸馏水。
主要仪器：DSY-1-4 型电热恒温水浴锅：北京爱琦霞商贸中心；AR2130 型电子天平：奥豪斯Adver-turerTM；UV-1100 型紫外-可见光分光光度计：上海美谱达仪器有限公司；低速离心机：LD5-2B 型最大转速5 000 r/min：北京雷博尔离心机有限公司；PHS-3C 型精密pH计：上海雷磁仪器厂；KQ-100DE 型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；125 ml 分液漏斗、三角瓶、漏斗、容量瓶、比色管、蒸发皿等。
1.2 试验方法1.2.1 玛咖总生物碱提取液的制备取玛咖粉末5.0 g于250 mL三角烧瓶中，加入200 mL 95%乙醇，置于功率为100 W的超声波清洗器中，温度60 ℃下超声提取40 min，过滤，残渣重复提取2次，合并滤液，浓缩得浸膏。
10 mL 2%的HCl溶解，过滤，残渣用10 mL 2% HCl洗涤2次，合并滤液。
用浓氨水调节滤液pH 2~3，等体积氯仿萃取3次。
将酸提取液用5 mol/L NaOH调节pH 9~10，等体积氯仿萃取3次。
合并萃取液，蒸发浓缩至10 mL，即得玛咖总生物碱的供试品溶液。
1.2.2 苦参碱对照品溶液的配置取苦参碱对照品8.6 mg，精密称量，溶于氯仿溶液中，并定容至100 mL，得到质量浓度为8.6 mg/100 mL的对照品溶液。
1.2.3 溴甲酚绿显色剂的制备*通讯作者241按中国药典配制，取溴甲酚绿0.1 g，加0.05 mol/L NaOH溶液2.8 mL使溶解，再加水稀释至200 mL即得，在pH 3.6~5.2区间内，颜色变化范围为：黄色~蓝色。
1.2.4 酸性染料比色法试验条件的确定1.2.4.1 酸性染料比色法最大吸收波长扫描精密吸取供试品及苦参碱对照品溶液各1.0 mL，置于25 mL 比色管中。
依次加入氯仿5.0 mL、0.05%溴甲酚绿显色剂2.0 mL、pH 4.00缓冲溶液5.0 mL，密塞振摇1 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置1 h，取氯仿层，在氯仿层中加入无水硫酸钠0.200 g，摇匀，放置10 min。
采用全波长扫描方法，在300~700 nm波长范围内进行扫描。
1.2.4.2 缓冲液pH的选择精密吸取样品溶液1.0 mL，加入氯仿5.0 mL，分别加入pH 2.0，2.5，3.0，3.6，4.0，4.8的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲液或氢氧化钠-邻苯二甲酸氢钾缓冲液5 mL 及配0.05%溴甲酚绿溶液2.0 mL，密塞振摇1 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置1 h，取氯仿层，在氯仿层中加入无水硫酸钠0.200 g，摇匀，放置10 min，于最大吸收波长处测吸光度。
1.2.4.3 缓冲液用量的选择精密吸取样品溶液1.0 mL，加入氯仿5.0 mL，分别加入pH 3.6的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲液 3 mL，4 mL，5 mL，6 mL，7 mL，8 mL及0.05%溴甲酚绿溶液2.0 mL，密塞振摇1 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置1 h，取氯仿层，在氯仿层中加入无水硫酸钠0.200 g，摇匀，放置10 min，于最大吸收波长处测吸光度。
1.2.4.4 0.05%溴甲酚绿显色剂用量的选择精密吸取样品溶液1.0 mL，加入氯仿5.0 mL，加入pH 3.6的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲液4 mL及0.05%溴甲酚绿显色剂2 mL，3 mL，4 mL，5 mL，6 mL，7 mL，密塞振摇1 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置1 h，取氯仿层，在氯仿层中加入无水硫酸钠0.200 g，摇匀，放置10 min，于最大吸收波长处测吸光度。
1.2.4.5 溶液振摇时间的选择精密吸取样品溶液1.0 mL，加入氯仿5.0 mL，加入pH 3.6的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲液4 mL及0.05%溴甲酚绿显色剂5 mL，密塞振摇0.5 min，1 min，1.5 min，2.0 min，2.5 min，3.0 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置1 h，取氯仿层，在氯仿层中加入无水硫酸钠0.200 g，摇匀，放置10 min，于做大吸收波长处测吸光度。
1.2.4.6 氯仿萃取时间的选择精密吸取样品溶液1.0 mL，加入氯仿5.0 mL，加入pH 3.6的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲液4 mL及0.05%溴甲酚绿显色剂5 mL，密塞振摇1 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h，取氯仿层，在氯仿层中加入无水硫酸钠0.200 g，摇匀，放置10 min，于最大吸收波长处测吸光度。
1.2.5 标准曲线的绘制准确吸取苦参碱对照品溶液0.0 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL，氯仿定容至1.0 mL。
依次加入氯仿5 mL、pH 3.6的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲液4 mL、0.05%溴甲酚绿显色剂5 mL，密塞振1 min，倒入125 mL分液漏斗中，静置1 h，使水层和氯仿层分清后，在分出的氯仿层加入无水硫酸钠0.200 g，在414 nm波长处测定吸光度。
以测得的吸光度为纵坐标，生物碱含量为横坐标，作标准曲线，得出线性回归方程。
1.2.6 精密度试验取同一比色样品，采用同样方法连续测定6次，记录吸光度。
1.2.7 稳定性试验采用加样回收法，精密吸取4份测试样品0.4 mL，分别加入苦参碱对照品0.3 mL，0.4 mL，0.5 mL，0.6 mL，按照标准曲线项下规定的方法测定，记录吸光度。
2 结果与分析2.1 酸性染料比色法测定条件的确定2.1.1 酸性染料比色法最大吸收波长的确定根据1.2.4.1的试验方法确定最大吸收波长，试验结果如图1所示。
结果表明，供试品在408 nm~414 nm 处有最大吸收峰，苦参碱对照品在412 nm~420 nm处有最大吸收峰，故选414 nm为其检测波长。
图1 苦参碱对照品和样品显色后波长扫描2.1.2 缓冲液pH的确定根据1.2.4.2的试验方法确定缓冲液pH，试验结果如图2所示。
结果表明，供试品在pH 3.5~3.6处有最大吸收峰，因pH 3.6的盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液有配置方法，因此选pH 3.6为缓冲溶液的pH。
