小鼠生殖细胞发育及遗传特性研究

雷公藤多甙对雄性小鼠生殖细胞毒性的研究杨建一;高宝珍;李莉;王文娟;郭红刚;边思成【摘要】背景与目的:研究雷公藤多甙对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性作用,为临床将雷公多甙藤作为抗牛育剂和治疗药的安全使用提供理论基础和依据.材料与方法:昆明种雄性小鼠共3o只,随机分成阴性、阳性对照组,雷公藤多甙抗生育剂量组[10 mg (ks·d)]、中间剂量组[20 mg (kg·d)]和治疗剂量组[30 mg (ks·d)],共5组,每组6只.分别采用骨髓微核实验、精子畸形实验、染色体畸变实验和联会复合体技术,研究雷公藤多甙对雄性小鼠牛殖细胞的遗传毒性.结果:雷公藤多甙20和30 mg (kg·d)剂量组可产生体细胞遗传毒性,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05).雷公藤多甙3个剂量组均可致精子畸形并对初级精母细胞产生损伤,以及具有生殖细胞联会复合体损伤,与阴性对照组比较差异均具存统计学意义(P均<0.05).结论:雷公藤多甙具有遗传毒性和生殖细胞毒性,生殖细胞对雷公藤多甙的敏感性高于体细胞,作为治疗药物忌大剂量长时间使用.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2008(020)005【总页数】5页(P393-397)【关键词】雷公藤多甙;骨髓微核;精子畸形;染色体畸变;联会复合体【作者】杨建一;高宝珍;李莉;王文娟;郭红刚;边思成【作者单位】山西医科大学细胞生物与遗传学教研窒,山西太原,030001;山西医科大学细胞生物与遗传学教研窒,山西太原,030001;山西医科大学细胞生物与遗传学教研窒,山西太原,030001;山西医科大学细胞生物与遗传学教研窒,山西太原,030001;山西医科大学细胞生物与遗传学教研窒,山西太原,030001;山西医科大学细胞生物与遗传学教研窒,山西太原,030001【正文语种】中文【中图分类】R992雷公藤（tripterygium wilfordii hook.f)系卫矛科雷公藤属的植物，其药用部分多采用去二层皮的根木质部，具有清热解毒、祛风通络、舒筋活血等功效。

— 435 —CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.42 No.5 2019 解剖学杂志 2019年第42卷第5期* 2018年甘肃省高校科研基金项目（2018A-144，2018A-146） 第1作者E-mail ：wmxie2014@△通信作者，E-mail ： 2531295072@收稿日期：2019-03- 27；修回日期：2019-06-26doi ： 10.3969/j.issn.1001-1633.2019.05.001·论 著·小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相识别*谢文美 周凤娟△ 王 强 赵小荣 朱春燕（甘肃医学院，1 遗传病研究室，2 基础医学院生物教研室，平凉 744000）摘要 目的：识别鉴定哺乳动物小鼠精巢生殖细胞减数分裂各时相细胞。

方法：结合减数分裂过程染色体变化及秋水仙素抑制纺锤体形成原理，分析观察改良制作小鼠精巢生殖细胞减数分裂染色体标本，比较各时期细胞及染色体形态变化。

结果：鉴定出小鼠减数分裂第1次分裂、第2次分裂及精子形成过程各细胞形态特征图谱，并详细解析了识别各时期细胞染色体构型变化要点，同时也简要阐述了秋水仙素的应用对识别细胞各时相染色体的影响。

结论：小鼠精巢生殖细胞减数分裂染色体变化复杂，建立完整的清晰图谱可为减数分裂课程教学及染色体异常研究提供参考。

关键词 减数分裂；秋水仙素；染色体；性泡；小鼠Identification of the meiotic events in mouse spermatogenesis *Xie Wenmei ，Zhou Fengjuan △，Wang Qiang ，Zhao Xiaorong ，Zhu Chunyan（1. Laboratory of Genetic Disease ，2. Department of Basic Medical Science ，Gansu Medical College ，Pingliang 744000，China ）Abstract Objective ：To identify the chromosomal behavior characteristics of meiotic events in mouse spermatogenesis. Methods ：The chromosome changes of the mouse germ cells in meiosis were systematically observed by modified methods of germ cells in mice based on the changes of chromosome in meiosis process and the inhibition of spindle formation by colchicine. Results ：All the morphological characteristics of cells in the first division ，second division and sperm formation of mice were established ，and the main changes of cell chromosome configuration were analyzed. The effects of colchicine on cells to identify the chromosome changes were briefly described. Conclusion ：The establishment of complete and clear cell map in meiosis in mouse spermatogenesis provides reference for the teaching of meiosis course and the study of chromosome abnormalities.Key words meiosis ；colchicine ；chromosome ；sex body ；mouse减数分裂过程中不同时相染色体变化复杂，染色体减数分裂异常也是许多人类遗传病发生的主要原因之一。

不同发育时期小鼠卵巢腔前卵泡的分布及形态学研究张耀君【摘要】通过石蜡切片-HE染色技术，系统研究小鼠生后不同发育时期即3，5，7，10，15，20，30，45 d卵巢的卵泡分布、形态结构及发育规律。

研究结果表明，随着小鼠卵巢的发育，由最初的无皮髓质之分到皮髓明显可见，卵泡从只见聚集呈条索状到发育成原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，直至有腔的形成。

从数量上看，原始卵泡逐渐减少，初次级卵泡逐渐增多，有腔卵泡数量也从无到有从少到多。

卵巢由最初的无卵泡发育到有许多大小不等、处于不同发育时期的卵泡、大部分有腔样结构。

在此发育过程中会伴有卵泡的闭锁。

小鼠卵巢中各级腔前卵泡的分布具有区域性。

%In this paper,we investigated follicledistribution,morphological structure and rule of development of ovary at postnatal 3,5,7,10,15,20,30,45 days of ages using by paraffin section-HE staining method. The results showed that with the development of mouse,ovary develops from non-cortex and medulla assigned in the initiato the situation that cortex can be seen apparently. Follicles developed from the streak were gathered so as to develop into primordialfollicles,primary follicles,secondary follicles,until cavity formation. Judging from the numbers, primordial follicles decreased in the initial stage follicles gradually,while primary follicles and secondary follicles increased gradually,and the number of antral follicles was from scratch to less than mature follicles relatively. Developing from the initial scratch to many non-sizes at different developmental stages of follicles,the majority of ovarianfollicle has cavity-like structure. The distribution of follicles in the ovaries is regional.【期刊名称】《河南科学》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】4页(P1432-1435)【关键词】小鼠;腔前卵泡;分布;形态学【作者】张耀君【作者单位】渭南职业技术学院护理系，陕西渭南 714000【正文语种】中文【中图分类】S814.1卵泡是卵巢的结构和功能单位，卵巢内卵泡的数目、发育、成熟和闭锁，是反映卵巢内分泌功能和生殖能力的重要标志.关于哺乳动物胚胎期卵巢的组织发生，国内外学者已做过大量研究，但对生后发育进行研究的报道很少，且缺乏系统性［1-2］.本文通过石蜡切片-HE染色技术，系统研究小鼠生后不同发育时期腔前卵泡在卵巢内的分布状况及发育规律，选择适龄小鼠，分离出高质量的腔前卵泡奠定基础，此外，腔前卵泡的组织学特征还可为体外培养过程中卵泡发育状况提供参考.1.1 卵巢来源实验所用昆明系小白鼠从第四军医大学动物实验中心购买，买回后饲养，自然光照，自由摄食饮水.实验所需卵巢从生后3，5，7，10，15，20，30，45 d的小鼠中摘取.1.2 卵巢组织切片的制作随机取上述8个不同时期的小鼠卵巢，颈椎脱臼处死，打开腹腔取出卵巢，观察卵巢的解剖学位置、形态.将卵巢用磷酸缓冲液冲洗1～2次，固定于10%中性甲醛溶液.24～48 h后，然后按照常规切片制作方法进行制片.进行石蜡连续切片的过程中，切片厚度6～8 μm，每隔8张切片留连续切片8～10张切片.1.3 试验方法试验分为8组，每组取4个卵巢，每个卵巢随机取不同切面的20片组织切片，在倒置显微镜下观察卵泡在卵巢中的分布情况，各级卵泡的形态特征，测量腔前卵泡的直径及对应卵母细胞的直径，颗粒细胞的层数和观察透明带出现情况.2.1 不同发育时期小鼠卵巢的一般形态结构不同发育时期的小鼠在卵巢的形状上有较大的变化.生后20 d之前的卵巢表面光滑，呈浅红色；20 d之后期表面凸凹不平，有成熟卵泡突于表面变得不光滑，呈粉红色；35 d之后即可排卵，成熟卵泡与黄体可突出于卵巢表面，有的则无.3 d小鼠的卵巢无皮质髓质之分，实质内卵母细胞聚集呈条索状或团状，细胞边界不清，周围有扁平的卵泡细胞环绕，未见卵泡（图1 A）；5 d小鼠的卵巢，周边部可见原始卵泡出现，且有的聚集成簇（图1 B）.7 d小鼠的卵巢原始卵泡明显可见，数量增多，且常成群分布.初级卵泡也可见到，但数量不多，位于卵泡的里层（图1 C）.10 d小鼠的卵巢初级卵泡明显可见，数量较多且分布均匀（图1 D）.15 d小鼠的卵巢次级卵泡明显可见，有皮质髓质之分，但不明显（图1 E），20 d的小鼠卵巢，小米粒样外观，次级卵泡明显变大，有腔样结构产生（图1 F）.30 d后皮髓区分明显，表面上皮为单层立方或单层扁平，可见不同发育阶段的卵泡，并有卵泡闭锁（图1 G）.45 d后皮髓质明显可见，皮质部较厚，占卵巢实质的大部分，为致密结缔组织、染色较深、内有许多大小不等、处于不同发育时期的卵泡，且大部分有腔样结构（图1 H）.发育不同程度的生长卵泡以不同深度分布在卵巢皮质（图1 I）.2.2 小鼠腔前卵泡直径、卵母细胞直径和颗粒细胞层厚度的测量从表1可见，在次级卵泡之前，卵泡和卵母细胞直径都相应地增加.次级卵泡发育后期，卵泡及卵母细胞直径急剧增加，颗粒细胞层厚度随卵母细胞直径的增加而增加.2.3 不同发育时期小鼠卵巢各级腔前卵泡形态2.3.1 原始卵泡一般来说由中央的卵母细胞和外包一层扁平卵泡细胞组成，卵泡细胞体积小，紧贴卵母细胞.原始卵泡单个或三五成群的不均匀的分布于皮质浅层（图1 J）.卵母细胞呈圆形或扁圆形，卵母细胞胞质染粉红色，均匀一致，卵母细胞中有一个较大的核（图1 K）.这个时期的卵黄膜还没有形成.原始卵泡的平均直径约为（28.53±2.53）μm.卵母细胞的平均直径为（19.83±2.54）μm.生后7 d 的卵巢卵泡主要以原始卵泡形式存在，且比较均匀地分布在卵巢的皮质表层（图1 C）.生后10 d的卵巢的原始卵泡开始减少，体积变大并逐渐发育为初级卵泡（图1 D）.生后15 d的卵巢的原始卵泡明显减少，卵泡主要以初级、次级卵泡的形式存在（图1 E）.2.3.2 初级卵泡初级卵泡，卵母细胞体积逐渐增大，卵泡细胞为单层扁平变为单层立方形或矮柱状，并开始增殖.一层颗粒细胞及基膜细胞包绕在卵母细胞周围，早期无卵泡膜结构.卵泡膜细胞和卵泡细胞之间为基膜（图1 L）.在初级卵泡中卵泡的层数不变，颗粒细胞以及卵母细胞会增长，但初级卵泡的大小差异不大.初级卵泡的直径为（44.06±1.93）μm.卵母细胞的直径为（29.83±2.35）μm.初级卵泡在生后10 d的卵巢数量增多（图1 D）.2.3.3 次级卵泡次级卵泡，卵母细胞迅速增大，颗粒细胞由单层扁平变为单层立方或单层柱状或复层（2～4层），次级卵泡逐渐移至皮质深层，基膜外形成明显的卵泡膜，卵泡膜逐渐加厚变得清晰，卵母细胞由卵泡细胞紧紧包围（图1 M）.随着卵泡细胞层增殖，卵泡细胞会排列疏松，靠近卵母细胞的卵泡细胞紧密地包围着卵母细胞，此时期，次级卵泡的直径约为（106.68±6.67）μm，卵母细胞的直径约为（49.84±6.71）μm，颗粒细胞增至4～6层.次级卵泡在15 d时期数量增多（图1 E）.2.4 小鼠腔前卵泡在不同发育时期卵巢中的分布小鼠的腔前卵泡分布在卵巢的皮质部，其中原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡的分布具有明显的区域性.在卵巢皮质的最外层分布有大量的原始卵泡，密度较高，有的成簇可见（图1 N）；7 d小鼠的原始卵泡较为密集，常集群分布，而30 d小鼠和45 d小鼠的原始卵泡则较为稀少，散布于皮质外层（图1 G、图1 H）.初级卵泡一般出现在原始卵泡层的下面，10 d小鼠的初级卵泡常有集群（图1 O）.次级卵泡则多数位于初级卵泡的里面，即最内层，在皮质部与髓质部的交界处分布相对较多，15 d小鼠的次级卵泡开始增多且大小相对一致（见图1 P），20 d小鼠可以观察到有腔卵泡分布在卵巢的边缘，而30 d小鼠和45 d小鼠的次级卵泡则大小差异较大，分布也不均匀（图1 Q、图1 H）.可见，从小鼠卵巢由表面往内部腔前卵泡逐渐增大，数量明显减少.颗粒细胞层逐渐增多（图1 R）.哺乳动物卵泡的发育是一个极为复杂的过程.动物的原始卵泡的形成时间因动物品种不同而异，家畜和人类等卵巢在胚胎时期形成原始卵泡库，比如：猪会在妊娠第56天猪胎儿时期形成原始卵泡［3］，啮齿类比如，兔则于新生儿的早期阶段［4］.本实验的研究结果是在观察生后3 d的小鼠卵巢时，还未见卵泡.第5天时周边部已经可见原始卵泡，第7天时原始卵泡数量增多，且常成群分布.原始卵泡的形成和发育直接影响到雌性整个生育阶段的可用卵泡数量.原始卵泡形成后基本停止发育，要到初情期后在促性腺激素的作用下才继续发育.本研究结果发现，10 d小鼠的卵巢初级卵泡明显可见，数量较多且分布均匀.15 d小鼠的卵巢次级卵泡明显可见，20 d的小鼠卵巢、次级卵泡明显变大，有腔样结构产生.据报道，猪原始卵泡发育到有腔阶段需要长达84 d［5］.这提示形成有腔卵泡的时间因物种会有所不同，但最早有报道小鼠部分原始卵泡发育到出生后第16天，开始形成腔体［6］.与本实验结果不一致，原因尚不清楚.哺乳动物卵泡的闭锁发生于整个的发育过程中.早在胎儿时期卵泡形成时即已开始，出生前达到高峰，到出生时丢失绝大部分卵泡.但本研究在第30天才见有卵泡闭锁，原因需进一步探讨.第45天后大部分有腔样结构，这也意味着卵巢已能分泌雌激素.发育不同程度的生长卵泡以不同深度分布在卵巢皮质的最外层，密度较高，没有血管；初级卵泡位于皮质的中层，血管稀少；而次级卵泡则位于血管丰富的皮质最内层，这一点与人的卵泡分布相似［7］，提示从次级卵泡开始需要大量的营养物质，这种现象可能是卵泡分泌了某些因子促使血管在其周围增生.这与其他研究结果相似［8］.研究发现，小鼠各级卵泡及卵母细胞直径与家畜类、人等同期相比要小，提示着可能是小鼠腔前卵泡比家畜、人等腔前卵泡容易培养的原因之一.本研究结果显示在次级卵泡之前，卵泡和卵母细胞直径都相应地增加.次级卵泡发育后期，卵泡及卵母细胞直径急剧增加，卵泡的直径增长远远大于卵母细胞，颗粒细胞层厚度也急剧增加.这提示颗粒细胞的维持对卵泡生长发育是至关重要的.但在整个牛腔前卵泡时期，卵泡和卵母细胞直径增长大体相等［9］，这可能是物种差异造成的.在颗粒细胞层增加的时候，发现颗粒细胞并不是在卵母细胞周围同时、同步生长增殖的，而是先从一侧生长并增殖为多层，将卵母细胞推向尚未增殖的一侧.这与冯贵雪［10］等研究结果一致，但生长模式的机理也不清楚，有待于进一步研究.在猪、双峰驼等原始卵泡和初级卵泡中可看到两个或两个以上的卵母细胞的多卵卵泡现象，但在小鼠中只能看到一个卵泡中一个初级卵母细胞的情况［11］.随着小鼠卵巢的发育，由最初的无皮髓质之分到皮髓明显可见，卵泡从只见聚集呈条索状到发育成原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡，直至有腔的形成.从数量上看，原始卵泡逐渐减少，初次级卵泡逐渐增多，有腔卵泡数量也从无到有从少到多.卵巢由最初的无卵泡发育到有许多大小不等、处于不同发育时期的卵泡、大部分有腔样结构.在此发育过程中会伴有卵泡的闭锁.小鼠卵巢中各级腔前卵泡的分布具有区域性：卵巢皮质的最外层分布有大量的原始卵泡，密度较高，有的成簇可见.初级卵泡出现在原始卵泡层的里面.次级卵泡则多数位于初级卵泡的里面，即最内层，在皮质部与髓质部的交界处分布相对较多.小鼠卵巢由表面往内部卵泡逐渐增大，数量明显减少，颗粒细胞层逐渐增多.【相关文献】［1］ Kerr J B，Duckett R，Myers M，et al.Quantification of healthy follicles in the neonatal and adultmouse ovary：evidence formaintenance of primordial follicle supply ［J］.Rep roduction，2006，132：95-109.［2］ Koji Takagi，Teruo Yamada，Yukari Miki，et al.Histological observation of the development of follicles and folicular atresia in immature rat ovaries［J］.Acta Med Okayama，2007，61（5）：283-298.［3］Bielan˜ska-OsuchowskaZ.Oogenesis in pig ovaries during the prenatal period：ultrastructure and morphometry［J］.Reproductive Biology，2006，6（2）：161-193. ［4］刘素娟.哺乳动物卵泡发生及发育调控［J］.黄牛杂志，1995，21：64-67.［5］成志军，陶勇，章孝荣.胎猪卵巢发生过程中的组织学变化［J］.四川动物，2009，28（5）：746-749.［6］ Sorensen R A，Wassarman P M.Relationship between growth and meiotic maturation of the mouse oocyte［J］.Dev Biol，1976，50：531-536.［7］施旭东.人类卵母细胞的体外发育与存活卵泡的形态学研究［D］.南京：南京农业大学，2001.［8］陈大元，孙青原，李光鹏，等.受精机制与生殖工程［M］//受精生物学.北京：科学出版社，2000：146-155.［9］高立云，高建明，吴学清，等.牛卵巢卵泡及卵母细胞生长发育的组织学研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2002（6）：5-6.［10］冯贵雪，杨素芳，石德顺.水牛腔前卵泡的分布及形态学研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2007（4）：11-13.［11］陈秋生，刘宗平，陈北享.双峰驼卵巢的组织学结构［J］.中国兽医学报，2002，22（4）：381-383.。

实验小鼠的种类范文实验小鼠是科学研究中常用的实验动物之一，因其生殖繁殖周期短、容易饲养、生活习性适应实验环境等特点而被广泛应用于多个领域的生物学和医学研究。

以下是一些常见的实验小鼠种类。

1.BALB/c小鼠：BALB/c小鼠是最常用的白色实验小鼠，具有良好的生育力和繁殖力，并且易于饲养。

BALB/c小鼠具有稳定的基因型和表型，广泛应用于多个领域的研究，如癌症、免疫学、肾脏疾病等。

2.C57BL/6小鼠：C57BL/6小鼠也是常见的实验小鼠。

它具有黑色的皮毛和较高的孕育力，常用于免疫学研究、代谢疾病研究以及神经科学研究等领域。

C57BL/6小鼠还被广泛应用于基因敲除和转基因实验。

3. Nude小鼠：Nude小鼠因其天生缺乏胸腺，免疫系统功能低下，而被广泛用于移植瘤的研究。

Nude小鼠在癌症研究中常用于瘤细胞移植、肿瘤生长和转移等研究。

4.SCID小鼠：SCID小鼠是严重联合免疫缺陷(SCID)的小鼠品系，它们完全缺乏B细胞和T细胞免疫功能。

因此，SCID小鼠被广泛用于人类免疫系统的研究，如人类免疫细胞的移植以及人类疾病的模拟。

5.CD1小鼠：CD1小鼠是一种白色小鼠，历史悠久，用于多个研究领域，如代谢疾病、癌症、药理学等。

CD1小鼠的繁殖能力强，易于饲养，适应不同的环境。

6.FVB小鼠：FVB小鼠是一种白色小鼠品系，被广泛应用于生殖生物学和胚胎学研究。

FVB小鼠的卵子受精能力强，易于获得大量的受精卵，适合进行体外受精和胚胎移植等研究。

7. Swiss小鼠：Swiss小鼠是一种杂交品系，将多种血统的小鼠杂交而成。

Swiss小鼠体型适中，适应环境能力强，常用于药理学、急性毒性研究等领域。

8.NIH小鼠：NIH小鼠是一种黑色小鼠品系，具有良好的健康状况、生殖力和繁殖力。

NIH小鼠常被用于胚胎学研究、发育生物学研究以及疾病模型的构建。

以上仅列举了一些常用的实验小鼠种类，实际上还有很多其他小鼠品系被用于特定的研究领域，如疾病模型的构建、药物研发等。

⼩⿏发情期卵泡发育动态影响2019-06-10⼩⿏因其繁殖率⾼、繁殖周期短等特点被常⽤于⽣物医学研究,尤其是胚胎⽣物学和胚胎⼯程研究(Brookeetal,2007;Dingetal,2007;Martín-Coelloetal,2008)。

超数排卵技术作为在同⼀时间段获得⾜够数量卵母细胞或胚胎的主要⼿段之⼀,是开展胚胎⽣物学和胚胎⼯程研究的基础(Chenetal,1991;Heetal,1999,2005)。

⼩⿏超排效果除受⼩⿏⽇龄和超排激素剂量影响之外(Cuietal,2012;Yang,2007),主要受超排注射促性腺激素时⼩⿏所处发情周期阶段的影响,但国内外对于⼩⿏超排的适合发情周期阶段所获得的研究结果并不⼀致，如Fuetal(2005)研究表明,发情前期ICR⼩⿏超排后,其见栓率、平均可⽤胚胎数均⾼于其他发情周期阶段的⼩⿏;Guoetal(2006)对昆⽩系⼩⿏的超排后,结论为在⼩⿏发情前期的初期和间情期后期超排效果较好且两者差异不显著;⽽Redianetal(1994)和Tarínetal(2002)在不同品系⼩⿏的超排中则证明,发情期超排⼩⿏效果最好,发情后期和间情期超排效果较差。

由于处于发情周期不同阶段的⼩⿏,其卵泡发育情况及体内激素分泌存在差异(Palermo,2007),根据⼩⿏发情周期的卵泡发育规律和⽣殖内分泌变化,可将⼩⿏发情周期分为发情前期、发情期、发情后期和间情期(Redianetal,1994),其外部表现为阴门状态的周期性变化(Nagyetal,2002)。

在⼩⿏超排研究中⼀般根据⼩⿏阴门状态的周期性变化对发情周期阶段进⾏判断,但由于⼩⿏的品系或个体差异,其发情周期各阶段长短、阴门状态变化存在差别,导致对其阴门状态的观察结果有所差异。

上述研究结果的差别,除了所⽤促性腺激素来源和⼩⿏品系的不同,各研究者所采⽤的判断发情周期阶段的⽅法和标准的不同可能是导致结果差异的主要原因。

生殖发育毒性作用生殖发育毒性是指化学物质对生殖系统发育过程产生的不利影响。

这种毒性作用可能导致生殖能力降低、性腺功能障碍、胚胎发育异常等一系列问题。

本文将探讨生殖发育毒性作用的原因、影响及相关研究进展。

首先，为了明确生殖发育毒性的作用机制，我们需要了解生殖系统的发育过程。

生殖系统的发育涉及到性腺的形成、性激素的合成与释放以及生殖细胞的生成和发育。

在这一过程中，存在着一系列复杂的细胞信号调控机制。

而生殖发育毒性作用则是这些机制发生障碍的结果。

化学物质对生殖发育的毒性作用主要有两个方面。

其一是内分泌干扰，即化学物质模仿或干扰内源性激素的功能。

例如，某些化学物质可能通过作用于雌激素受体，干扰激素信号传递，导致性腺发育异常。

其二是直接细胞毒性，即化学物质通过损害生殖细胞或细胞周围的支持细胞，对生殖系统产生直接的有害影响。

生殖发育毒性作用可能对生物个体、群体甚至种群水平产生长期的不良影响。

个体层面上，这种毒性作用可能导致生殖能力的降低，包括生殖器官发育异常、性激素水平异常等。

群体层面上，生殖发育毒性作用可能导致一代或多代的生殖能力下降，以及出生缺陷的频率增加。

种群水平上，生殖发育毒性作用可能导致物种数量减少，生物多样性降低，从而对生态系统平衡产生不利影响。

为了准确评估化学物质的生殖发育毒性作用，科学家们进行了大量的研究。

目前，常用的方法包括动物模型实验、体外细胞实验和流行病调查等。

动物模型实验通常使用小鼠、大鼠和斑马鱼等模型生物，通过观察其生殖发育过程中的变化，来评估化学物质的毒性作用。

体外细胞实验则使用体外培养的生殖细胞，通过检测其发育及功能等指标，来评估化学物质的影响。

流行病调查则是通过调查人群中暴露于某种化学物质的人数及其生殖发育异常的发生率，来评估化学物质的潜在危害。

然而，在评估生殖发育毒性的过程中，仍然存在一些挑战和争议。

一方面，生殖发育是一个复杂的过程，受到多个因素的调控，其中包括遗传因素、环境因素以及生活方式等。

转基因小鼠在生命科学中的研究进展毕业论文1 转基因小鼠技术概述自其诞生以来的30多年里，转基因动物技术经过世界各国生物学家们的不懈努力，已经成为一项非常成熟的技术手段，极大的促进了相关生命科学领域研究进展，至今已经取得了辉煌的成就并且在不断得到改进和发展[2]。

转基因技术运用于动物育种的研究始于70年代，经过近30多年的研究和不断发展，取得了突破性进展。

1974年Jaenish和MintzIZI[3]通过微注射法向移植前的小鼠注射SV40病毒DNA，后在实验小鼠部份细胞中检测到该病毒的DNA，首次成功获得转基因小鼠，虽然该转基因小鼠传代的几率小。

随着科学技术的不断进步，在1976年，Jaenish又通过反转录病毒感染小鼠的胚胎，将目标基因组整合到实验鼠中得到了能传代的转基因小鼠；1980年,Gordon等[1]首先用受精卵原核注射法,将疱疹病毒基因SV40DNA段和PBR32DNA段分别注射到小鼠原核期的胚胎中,获得了相应的转基因小鼠。

1982年美国科学家Palmiter将大鼠生长激素基因导人小鼠受精卵后，获得了首批被称为“硕鼠”的转基因动物[4]。

1985年，Hanahan等将SV40T抗原基因与大鼠胰岛素启动子(RIP)体外整合后导入小鼠早期胚胎细中，构建了SV40T抗原基因转基因小鼠，在小鼠体内检测到特异性T抗原，T抗原表达时间的早晚影响转基因小鼠对T抗原的免疫应答：胚胎早期表达T抗原的小鼠对SV40T抗原发生免疫耐受，胰腺组织正常；胚胎晚期表达T抗原的小鼠体内产生抗自身胰岛B细胞的抗体，出现自身免疫性糖尿病[5]。

近年来，随着现代分子生物学和转基因动物技术的日臻完善，转基因小鼠及其他转基因动物逐渐成为现代医学及其他学科研究中的一个十分重要的工具。

纵观此间发展历程，转基因动物带来的不仅仅是一种全新的药物生产模式，极大地降低生物药品的成本和投资风险，为人类社会带来了新的经济增长点，如今的动物乳腺反应器生产的药物占所有基因工程药物的95％，带来了巨大经济效益，潜藏巨大的市场价值，相信随着应用的不断革新，其必将逐渐形成具有高额利润的新兴产业。

ＴＢＰ相关凶ｒ３（ＴＲＦ３）在小鼠早期胚胎和细胞系中的表达及功能分析图１ＴＢＰ家族成员之间的进化关系㈣１．Ｚ．１ＴＲＦｌ第‘个ＴＢＰ相关因子ＴＲＦｌ首先在果蝇中发现，并且迄今为止也仅发现在果蝇中存在““。

ＴＲＦｌ的Ｃ末端与ＴＢＰＣ末端核心区域具有很高的同源性，可以与ＴＡＴＡ元件结合。

ＴＲＦｌ主要在胚胎、成体神经系统和雄性生殖细胞中表达。

ＴＲＦｌ也可以和ＴＦＩＩＡ和ＴＦＩＩＢ结合。

Ｈａｎｓｅｎ等（１９９７）“２１最初发现ＴＲＦｉ可能参与ＰｏｌＩＩ对部分组织特异性基因的转录，但同时他们也发现，多线染色体染色时，ＴＲＦＩ弓ＴＢＰ在染色体上具有不同的定位，ＴＦＲｌ集中在ＰｏｌＩＩＩ转录位点。

随后的生化分析表明，果蝇胚胎核抽提物中去除ＴＲＦｌ（而非ＴＢＰ）会导致ＰｏｌＩＩＩ的转录抑制”３，说明ＴＲＦｌ在ＰｏｌＩＩＩ的转录过程中起重要作用。

令人疑惑的是６图２不同物种ＴＲＦ３序列比较及与人ＴＢＰ序列比较…３黑色表示两个物种以上的ＴＲＦ３序列与ＴＢＰ保守，有变化的地方为灰色；蓝色表示３个物种以上的ＴＲＦ３序列保守。

ＴＢｐ序列中与ＴＡＴＡＴ元件（Ｉ）、ＴＦＩＩＡ（Ｖ）和ＴＦＩＩＢ（●）结合的位置分别在图中表示出。

２．早期胚胎的基因激活２．１卵母细胞和精子的成熟生长中的卵母细胞有一个很大的生发泡（有时也被称为生殖泡）（ｇｅｒｍｉｎａｌｙｅｓｉｅｌｅ，ＧＶ），相当于细胞的核，因此该阶段的卵母细胞也被称为ＧＶ期卵母细胞。

ＧＶ期卵母细胞存在活跃的转录，但随着卵母细胞的成熟，转录水平逐渐降低””。

充分生长的卵母细胞在激素的刺激下发生生发泡破裂（ＧＶｂｒｅａｋｄｏｗｎ），染色体浓缩，进行减数分裂，并最终停在第一次减数分裂的中期即ＭＩＩ期。

此时的染色体高度浓缩，转录沉默。

精子发生的最后一个阶段即拉长阶段，通过多步骤的蛋白交换过程，精子细胞核内的组蛋白最终被精子所特有的精蛋白代替。

成熟精子中ＤＮＡ与精蛋白并不形成核小体结构，而是形成晶体样结构，该结构比中期染色体的紧密程度还有高出６倍。