不规则抗体筛选试验标准操作规程(sop)

不规则抗体筛检质控品标准操作程序（SOP）一、用途本试剂盒用于长春博迅生物技术有限责任生产的抗人球蛋白检测卡（12卡/盒）、不规则抗体检测试剂（人血红细胞）（4%，5ml/瓶）进行的不规则抗体筛检实验的室内质量控制。

二、准备工作1、将质控品从冰箱取出后平衡至室温。

2、观察检测卡外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡平衡至室温（18－25℃），再用专用离心机离心5分钟。

三、操作步骤1、将抗人球蛋白检测卡做好标记；2、将不规则抗体检测试剂（人血红细胞）用低离子强度盐溶液稀释到细胞浓度为0.8%；3、将0.8%的红细胞按照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ顺序加到抗人球蛋白检测卡1~3管和4~6管中，50μl/管。

4、分别在前3管加入样本1，后3管加入样本2，50μl/管。

5、将检测卡置37℃孵育器中15分钟。

6、即刻使用专用离心机离心5分钟（900 rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟），取出，肉眼判定结果。

结果判定：1、本产品为非定值质控品，格局表中所提供的结果仅为定性结果，因此建议各实验室对每批号的产品自行建立相应的参考值。

2、抗体筛检：室内质控品按阳性(样本2)、阴性(样本1)设计，阳性质控品含有已知其特异性的不规则抗体，阴性质控品不含有不规则抗体。

3、质控品检测结束后，用户可将检测结果与参考值进行比较，阳性质控结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。

失控后要分析查找原因，必要时重复实验，确认失控原因消除后开展正常检测工作。

质控品抗A 抗B 不规则抗体样本1 + + 0样本2 0 0 +“0”代表阴性，“+” 代表阳性。

特异性及效价：O血清：与A1、B型红细胞均发生凝集，与O型红细胞不发生凝集，与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阴性，无溶血及其他不易分辨现象；O血清与A1型红细胞反应，效价≥8，与B型红细胞反应，效价≥8。

AB血清(含IgG型抗D抗体)：与A1、B、O型红细胞均不发生凝集，与O型RhD(+)红细胞间接抗人球蛋白试验呈阳性，无溶血及其他不易分辨现象；试管抗人球法效价为2~8；微柱凝胶法效价为4~16。

不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。

(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。

2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。

无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。

3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。

4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。

(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。

(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。

(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。

不规则抗体筛选操作规程一．试剂和仪器1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白（IgG）单特异检测试剂卡。

2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液3.离心机和孵育器二．标本收集与处理1．血清或血浆都可以使用。

2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。

三．操作步骤1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。

2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进行下面操作。

3. 分别向反应柱内加入50 ul患者血清或血浆。

注意，加样时，吸头请勿触及微柱管壁。

4．再分别向反应柱内加入10ul 3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红细胞)。

5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。

6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。

7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。

8. 从微柱正反两面判读并记录结果。

四．结果判读阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。

阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。

溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。

如果发现溶血现象，则应先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，观察红细胞凝集现象。

4 + 反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。

3 + 反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。

2 + 反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量细胞。

1 + 反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的底部有少量红细胞。

阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整的红细胞聚集带。

五.注意事项1. 试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。

不规则抗体筛选（微柱凝胶法）1 原理基于游离红细胞和聚集红细胞是否通过具有分子筛作用的凝胶颗粒构成的胶体介质，从而使不同状态的红细胞得以分离，是一种在微柱管中进行的改良的血凝反应。

当抗原抗体反应时，红细胞发生凝集，离心时凝集块不能通过凝胶间隙而留在凝胶上层，呈阳性反应；未凝集红细胞离心时可通过凝胶间隙而沉积在凝胶底部，呈阴性反应。

2 范围适用对象为本院住院病人3 职责3.1 责任人血库当班工作人员3.2 完成时间 30分钟完成4 样本采集与处理静脉采血2ml，注入EDTA-K抗凝管送检，血液经充分离心后进行实验，以2防纤维蛋白的干扰。

5 试剂：微柱凝胶卡（长春博迅）；0.8%筛选红细胞（Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号），是上海血液生物公司产品。

6仪器FYQ型免疫微柱孵育器及TD-3A型微电脑控制离心机。

7步骤：7.1 每个受检者占用3个微柱，在卡上相应位置标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

7.2 在相应标记孔分别加入Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号1%筛选红细胞1滴（约50ul），然后3孔均加入待检血清1滴。

7.3 37℃孵育器孵育15min。

7.4 离心5分钟，判断结果。

8结果判断：⑴阳性反应：受检者血清中存在不规则抗体，在微柱中与筛选红细胞（抗原）发生反应使红细胞发生凝集，使红细胞在离心后浮在凝胶表面或胶中。

⑵阴性反应：受检者血清中不存在不规则抗体，离心后红细胞沉于微柱的底部。

9临床意义：红细胞不规则抗体是引起血型鉴定困难、疑难配型、免疫溶血性输血反应的主要原因。

应用抗体筛选技术事先对病人血清中的不规则抗体进行筛选并鉴定，使临床输血前的检查得以规范和完善，使交叉配血更具目的性，便于输血工作预先做好充分准备，使患者在需输血时及时、安全地输入同型交叉配血相合的血液。

10 注意事项：为确保规范操作，使用注意事项请参见ABO、Ｒｈ血型鉴定作业指导书之使用注意事项之1、2、3、5条11 参考文献11.1孙连明，胡诗学，陈耘．临床输血手册［M］．北京：科学出版社，1999．113-119．11.2 DiaMed血型配血微量定型系统操作技术手册12.相关表单《交叉配血原始记录表》。

不规则抗体筛选一、试验原理：利用不规则抗体筛选红细胞试剂对血清进行血型不规则抗体检测。

在任何介质中，只要任何单组或多组筛选红细胞产生凝集或溶血反应，则试验为阳性，表明血清中存在与筛选细胞中抗原相对应的抗体。

若抗筛试验为阳性，建议用谱细胞来检测抗体特异性。

一、注意事项：1. 建议在使用血型卡前重新离心后再应用。

2. 若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸或有气泡时，不可使用。

3. 撕开凝胶卡的封口膜时，不能用力过猛，以免造成凝胶微孔间的交叉污染。

4. 红细胞悬液的浓度为0.5~0.8%，浓度过高或过低会影响检测结果。

5. 血浆标本必须充分离心去除纤维蛋白，否则会在微柱凝胶中阻止红细胞沉淀，呈现假阳性反应。

6. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，一定要认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。

7. 某些药物、疾病可导致正定型结果弱阳性反应或正反定型不相符，应进一步检查以明确原因。

8. 溶血性疾病、巨球蛋白血症、输注大分子血浆扩容剂如右旋糖酐等可能会影响实验结果。

9. 人源血液样本存在潜在的传染性，凝胶卡使用后按医疗生物垃圾废弃物处理。

二、设备及材料试剂：1、LB-3000医用低速离心机2、LB-C02-1免疫微柱孵育器3、加样枪：10μl, 25μl, 50μl 和 1000μl4、广谱抗人球蛋白卡（抗-IgG+C3d）5、不规则抗体筛选红细胞试剂三、操作流程：1、取广谱抗人球蛋白卡（抗-IgG+C3d）一张，按规定检查符合要求后，进行标记（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，受检者姓名或编码）。

2、红细胞悬液配制：不规则抗体筛选红细胞悬液：取不规则抗体筛选红细胞试剂中的I号、II号、III号红细胞，稀释4倍（1份红细胞和3份生理盐水）。

3、加样：①第1,2,3及第6孔加入受检者红细胞悬液50μl。

②第4孔加入A1型反定型试剂红细胞悬液50μl③第5孔加入B型反定型试剂红细胞悬液50μl。

不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。

2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。

3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。

这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。

当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。

4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。

每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。

5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。

每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。

5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。

5.4.致敏红细胞（质控细胞）。

5.5.0.9%生理盐水。

5.6.Coombs微柱凝胶卡。

6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。

7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。

7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。

7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。

如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。

XXX医院不规则抗体筛查试验操作规程1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作，保证检查结果准确和临床输血安全、有效，依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。

2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。

3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定，但只对所筛选或鉴定的标本负责。

4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清（血浆）与筛选红细胞反应，检测受检者血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体，红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应，根据反应格局鉴定抗体特异性。

7.仪器设备和检测环境7.1.仪器设备等：玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

7.2. 检测环境：室温应控制在18~27℃，湿度应保持在30~70%。

8.试剂①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG,C3d），均为有合格证件的正品。

②市售O型筛选红细胞：为三支以上不同人份的3%筛选红细胞，均为有合格证件的正品。

或自制O型筛选红细胞：选择已确认ABO血型为O型的健康者，采集EDTAK抗凝血2标本离心，取少许红细胞置于试管中，用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟（1000g），每次离心1分钟，离心后将上清液全部倒出]，再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中，然后加入1ml生理盐水混匀，即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞；依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。

不规则抗体检测标准操作流程
不规则抗体检测标准操作流程(SOP)
目的:输血前进行检验查,可对有妊娠史,多次输血史,大量输血的病人进行不完全抗体的初选.
操作:
1、取3—5名“O”型正常人抗凝血(新鲜血常规抗凝血)进行等量混合。

2、用无菌生理盐水洗涤3—5次。

3、配制成2%红细胞悬液(上述离心沉淀红细胞1ml加生理盐水49mL混匀)待用。

4、取病人(受血者)血清或血浆100mL和2%红细胞悬液100mL等到量混合，然后离心，侄去上清液，混匀，倒在玻片上，显微镜观察是否凝集。

5、如有凝集，说明该受血者体内存在不规则抗体，毅然交叉配血不能进行。

6、如无凝集才能配血。

不规则抗体筛查试验（SOP）【产品名称】通用名称：不规则抗体检测试剂（人血红细胞）英文名称：Red Blood Cells Reagent for Irregular Antibody Test【包装规格】每盒有OⅠ、OⅡ、OⅢ红细胞各1瓶，5ml/瓶，浓度4%。

【生产企业】企业名称：长春博迅生物技术有限责任公司【预期用途】有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的红细胞或缩短其寿命，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；对于孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器及智力发育，严重者则会危及新生儿的生命。

对受血者和献血者进行不规则抗体检测，能够发现有临床意义的抗体，从而减少溶血性输血反应。

本品采用凝聚胺方法检测待检血浆（血清）是否存在不规则抗体，只用于临床检测，不用于血源筛查。

【检验原理】本实验原理为血凝试验。

红细胞上含有D、C、E、c、e、Jk a、Jk b、M、N、s、Fy a、Fy b、k、Le a、Le b、P1，该实验用已知抗原的红细胞与待检血浆（血清）孵育，以发现待检血浆（血清）中是否存在不规则抗体。

【主要组成成份】本品由3人份（单人份/瓶）直接抗人球蛋白试验阴性的O型健康成人红细胞组成，红细胞上含有能引起溶血性输血反应的抗原，抗原谱至少包括Rh系统的D、C、E、c、e抗原，Kidd系统的Jk a、Jk b抗原，MNS系统的M、N、s抗原，Kell系统的k抗原，Duffy系统的Fy a、Fy b抗原，Lewis系统的Le a、Le b抗原，P系统的P1抗原。

每套试剂红细胞中至少有2人份红细胞含有D、C、c、e、s、Fy a、k抗原，至少1人份红细胞含有E、Jk a、Jk b、M、N、Fy b、Le a、Le b、P1抗原。

OⅠ红细胞5ml×1OⅡ红细胞5ml×1OⅢ红细胞5ml×1不同批号的红细胞试剂不可以互换。

【储存条件及有效期】2~8℃保存。

红细胞不规则抗体检测操作规程1．0 目的规范红细胞血型抗体筛选、鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。

2．0 适用范围适用于输血科（血库）抗体筛选血标本、疑难血型标本及疑难配血标本。

3．0 材料抗球蛋白试剂、筛选细胞、患者血标本、生理盐水、小试管、滴管。

4．0 设备普通离心机、血型血清专用离心机、电热恒温水浴箱、显微镜。

5．0 抗体筛选操作步骤5．1 取试管3支，分别标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，各加入患者血清2滴，再分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞2滴。

5．2 混匀，37℃孵育1h。

5．3 1300g离心15s。

5．4 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。

若肉眼不见凝集，以显微镜检查。

5．5 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。

5．6 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。

5．7 按试剂说明书加最适释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。

5．8 1300g离心15s。

轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。

6．0 抗体鉴定步骤6．1 抗体筛选阳性，应作抗体鉴定试验以确定其特异性。

6．2 依据谱细胞数量的多少（一般由8～16个单人份的已知血型表型的O型红细胞组成）取相应数目的试管，分别标记序号，各加入患者血清2滴，再分别加入谱细胞2滴。

6．3 混匀，37℃孵育1h。

6．4 1300g离心15s。

6．5 轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集结果并记录。

若肉眼不见凝集，以显微镜检查。

6．6 对没有凝集的试管，用盐水充分洗涤3次。

6．7 最后一次洗涤后，离心去上清，将试管边缘盐水用滤纸吸干。

6．8 按试剂说明书加最适稀释度抗球蛋白试剂1滴，充分混合。

6．9 1300g离心15s。

轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。

7．0 注意事项7．1 按《临床输血技术规范》第十七条要求，必须对交叉配血不合时，对有输血史、妊娠史或短期内接受多次输血者进行抗体筛选试验。

7．2 抗体筛选有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，并可在配血前有足够的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的血液，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者不能及时输血。

红细胞不规则抗体筛选标准操作规程
1、目的
为规范输血科红细胞规则抗体筛选的技术操作，确保检测结果准确及临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.8条款的要求制定本规程。

2、适用范围
本文件适用于本院输血科红细胞规则抗体筛选的操作技术的规范化管理。

3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。

4、试验方法及原理：
不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，多数为免疫性抗体（IG性质），输血前受血者体内若发现此类抗体，应输入无对应抗原的红细胞，以避免抗原抗体反应，引起溶血性输血反应。

若产妇体内发现此类抗体，则应确定其效价并观察其效价变化，以避免其引起新生儿溶血病的发生。

目前不规则抗体筛查是采用已知抗原表型的O型试剂红细胞，在不同温度下、采用不同介质筛查被检血清中有无有临床意义的不规则抗体。

常用的方法有盐水凝集试验、聚凝胺试验、抗人球蛋白试验、酶试验等。

本科根据本科实际情况采用盐水凝集试验、聚凝胺试验、抗人球蛋白试验筛查不规则抗体。

其反应原理同配血试验。

不规则抗体检测标准操作规程1 目的规范不规则抗体检测过程，保证不规则抗体检测质量，保障临床输血安全。

2 职责输血科(血库)工作人员负责不规则抗体检测相关工作。

3 适用范围适用于输血科(血库)工作人员从事不规则抗体检测。

4 生物安全要求所有用于临床不规则抗体检测的标本，均视为存在潜在的生物安全危害,被血液污染的物品必须放入医疗专用垃圾袋，损伤性废弃物放入利器盒。

5 设备和材料5.1 标本: 血浆或血清。

5.2 试剂：标准Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号不规则抗体筛选红细胞、低离子强度溶液（LIM）等。

5.3设备：血型血清学专用离心机、标本离心机、移液器、试管架等。

5.4 耗材：清洁干燥一次性塑料吸嘴、速干手消毒液/消毒纸巾、污物桶、医疗废弃物专用袋、医疗废弃物处置标签、一次性橡胶手套等。

6 环境不规则抗体检测环境要求宽敞明亮、干燥通风、安全卫生、整洁有序。

7 操作步骤7.1 方法：凝胶柱法。

7.2 原理：由于输血或妊娠等外源性抗原的同种免疫作用，使机体对外源性抗原产生同种免疫抗体，当再次输入相应抗原时就会产生抗原抗体反应。

应用特定的抗体筛选红细胞（Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号），与受检者血清/血浆在二种介质（盐水、凝聚胺）中反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别(IgM、IgG)。

7.3 试剂及器材:特定的Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号2%～5%筛选红细胞；低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液；生理盐水。

试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。

7.4 操作步骤7.4.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。

7.4.2 检查标本的状态。

盐水法：7.4.3 取洁净试管3支，分别标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，用滴管分别加入受检者血清/血浆2滴。

7.4.4 再对应加入2%～5%Ⅰ号、Ⅱ号、Ⅲ号抗体筛选细胞1滴，混匀。

7.4.5 1000 ×g离心15秒或按试剂说明书操作，察看上清液有无溶血，轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集结果，记录盐水介质反应情况。

不规则抗体筛选1原理用已知抗原表型的试剂红细胞组，通过直接凝集试验和间接抗球蛋白试验，筛选标本中可能存在的血型同种免疫性抗体。

避免含有临床意义的血型同种抗体随血液、血液成分制品一同输入。

2试剂与材料用于筛选的试剂红细胞必须来自至少两名无关O型供者，要求一种细胞为R1R1，另一种为R2R2表型，且表达下列抗原：M，N，S，s，Mur，Di a，k，Fy a，Fy b，Jk a，Jk b和 Le a。

并尽可能多的包含Duffy, Kidd血型系统中主要抗原的纯合子以及低频率抗原。

不可通过混合来自不同供者的细胞获得需要的抗原表达范围。

3方法血型血清学盐水悬浮细胞凝集试验、间接抗球蛋白试验。

3.1盐水悬浮细胞凝集试验:在试管或微量板中将血浆(血清)与筛选细胞1:1混合。

室温立即离心和/或37℃孵育30分钟后离心判读结果。

3.2间接抗球蛋白试验:在试管或微量板中将血浆(血清)与筛选细胞1:1混合, 37℃孵育30分钟后，弃去上清，用生理盐水洗涤三次红细胞。

加抗人球蛋白试剂，离心判读结果。

3.3必须对筛选检测出的抗体进行鉴定，评估其临床意义。

不进行抗体鉴定的实验室需将抗体筛选阳性标本送至具有资质的参比实验室进行最后鉴定或确证。

4注意事项4.1有些抗体(如-Le a,-Jk a)在盐水悬浮细胞凝集试验中可溶解抗原不配合的红细胞。

4.2在进行间接抗球蛋白试验时，必须有IgG致敏的红细胞作为阳性对照。

同时需定期使用含临床意义的弱抗体附加对照试剂 (如抗Fy a或抗-Jk a) 以确保试验步骤的敏感性和试剂红细胞抗原表达的完整性。

4.3其它方法如果已经验证和证明其适用性，可作为间接抗球蛋白试验的补充 (而非替代)，如酶处理技术或聚凝胺方法。

但对某些临床重要性抗体，间接抗球蛋白试验优先于其它可选择技术。

4.4注意血清与红细胞的比率，特别是使用Liss和PEG等促凝剂时，适当增加血清比例，防止弱抗体的漏检。

4.5抗体筛选应能检出浓度不高于0.5 IU/mL的抗-D。

不规则抗体筛查实际操作作业指导1.目的用于检测血浆中是否存在抗体（IAT）2.原理血液中一些IgG类抗体或补体C3（主要是免疫性抗体）与红细胞表面相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见凝集反应，但在加入抗IgG或抗C3抗体后，以其搭桥则出现凝集反应，该实验称为抗人球蛋白试验（Coomb’s Test）。

包括直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）。

直接抗人球蛋白试验用于检测红细胞是否被抗体致敏，间接抗人球蛋白试验用于检测血浆中是否存在抗体。

3.样品3.1样品类型：血浆或血清3.2患者准备：应避免高脂食物或未知药物影响，可能的情况下，在大量用药前采集标本3.3容器和添加剂类型：EDTA-K2抗凝血3ml～5ml，在低速离心机1000g条件下离心5min，离心后应无溶血、无凝块、无明显乳糜。

紧急情况下可以使用抗凝动脉血，5ml～10ml全血分离得到的血清也可以4.环境和安全控制4.1实验环境（1）环境温度：18℃～30℃（2）环境相对湿度：15%～80%RH（无冷凝）（3）实验室的噪音、防震、防尘、防腐蚀、防磁与屏蔽等方面的环境条件应符合检验项目和检测仪器设备对环境条件的要求，室内采光良好。

4.2人员安全（1）操作人员二级防护（2）所有血液样本及与血液接触的材料均视为传染性物质（3）对设备进行清洁或清除污染、处理样本、处置废弃试剂卡、处理稀释样本管等遵照实验室生物危害注意事项。

5.方法学微柱凝胶法6.程序性步骤试剂卡做好标记（病人姓名、日期）→分离被检者血清（或血浆）→用低离子强度溶液将筛检红细胞或谱红细胞配成1%浓度（I/II/III）→分别加入50ul在标记好的三个微管中（仅暴露所需反应孔）→立即加入被检者血清（或血浆）50ul在三个微管内→ 37℃孵育15min →专用离心机900r2min 转1500r3min →取出判读结果7.结果判读红细胞层下沉阴性，红细胞层未下沉为阳性8、措施计划1.鉴定卡和病人编号一致2.样本溶血、脂血慎用3.抗筛细胞浓度为4%，所需1%抗筛细胞仅需75ul抗筛细胞加入25ul生理盐水混匀后即可使用。

输血科不规则抗体（红细胞血型抗体筛查）标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：①ABo血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；②供血者血清抗体筛检；③输血前受血者血清抗体检查；④输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；⑤孕妇血清的抗体检查；⑥新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；⑦直接抗人球蛋的试验阳性红细胞上抗体的检查。

［试剂］1、试剂红细胞由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到，筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混合红细胞提供较高的敏感性。

2、血清标本，虽然血清和血浆中都存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查，因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可以产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合来防止凝固，而Ca"对于补体的激活是必不可少的。

血清标本的采取时间应注意，例如：受血者血样一定要在48小时内采集。

为了检出由于最近红细胞刺激而产生的抗体，血样必须是新近的。

如果抗体筛查结果阴性，有时需要隔数天后重新采样复查，因为此时抗体的浓度可逐渐增强。

［操作］适用于红细胞抗体筛查及其特异性鉴定的方法很多，应根据不同情况采用。

1、凝聚胺法(I)取受检者血清2滴于标好的试管中；(2)取筛查红细胞悬液1滴于每个试管中；(3)各加低离子介质溶液O.6ml,混合均匀后，静置1分钟，再各加凝聚胺渗液2滴，混合均匀，静置15秒。

(4)3400转离心15秒，然后把上清液倒掉。

(5)轻摇试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集则必须重作。

(6)最后加入重悬液2滴，轻轻转动试管混匀并同时观察结果，结果判定：如果凝集在60秒内凝集散开，代表是由凝聚胺溶液引起的非特异性凝集，结果为阴性，如凝聚不散开结果为阳性，应进一步做抗体鉴定。

不规则抗体筛选试验标准操作规程一、目的为规范微柱凝胶抗球蛋白检测卡在红细胞不规则抗体筛选试验中的应用，保证实验结果的准确性和有效性。

二、适用范围输血科进行的微柱凝胶卡式不规则抗体试验。

三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。

四、步骤和方法1、取微柱凝胶抗球蛋白检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。

2、在标记为I、II、III的各反应腔中分别加入对应的I、II、III号筛选红细胞稀释液（1滴细胞+3滴lis液）50微升，再在标记为I，II，III的各反应腔中分别加入对应的受检者血清（血浆）20微升，加入后轻轻震荡3次使其充分混合。

3、将检测卡在微柱凝胶专用孵育器中37℃孵育15min后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后取出判断结果。

5、结果判读：I、II、III型红细胞任何一种出现阳性反应，表明该血清（血浆）不规则抗体筛选阳性。

五、质量控制微柱凝胶试剂卡，试剂筛选红细胞在有效期内使用。

六、注意事项1、检测卡若在冰箱储存，使用前须放置实验室5—10min平衡至室温。

2、撕开微柱凝胶卡锡纸膜时，注意避免各微柱间特异性抗体试剂的交叉污染。

3、细菌污染，纤维蛋白析出及抗凝不佳的血，可产生假阳性结果，建议使用血清。

4、严格遵循离心力，离心时间要求，离心速度过快，离心时间过长均易产生假阴性结果。

5、由于试剂生产厂家，批号不同等因素，红细胞浓度，吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异，以试剂说明书为准。