间接免疫荧光法检测抗核抗体的结果评价作者：黄丽樊英俊来源：《健康必读·下旬刊》2018年第12期【摘要】：目的：探讨抗核抗体实施间接免疫荧光法检测的结果。
方法：对本院120例疑似自身免疫性疾病患者（2017年1月到2018年5月间）实施研究观察，对所有患者进行间接免疫荧光法检测抗核抗体，用免疫印迹法检测抗核抗体谱，分析总结两种检查方式的效果。
结果：以抗核抗体滴度≥1：100为阳性标准，实施间接免疫荧光法检测时漏诊1例，误诊6例，实施免疫印迹法检测是漏诊28例，误诊0例。
自身免疫性疾病实施间接免疫荧光法诊断的灵敏度99.1%显著高于免疫印迹法90.9%，实施间接免疫荧光法检测的特异度22.2%显著低于免疫印迹法100.0%（P【关键词】：抗核抗体；间接免疫荧光法；自身免疫性疾病；免疫印迹法【中图分类号】R392 11 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2018）12-03--02自身免疫性疾病是因机体对自身抗原发生免疫反应而导致的自身组织损害疾病，目前临床常见的自身免疫性疾病较多，包括系统性红斑狼疮、硬皮病、甲状腺自身免疫病、系统性血管炎、类风湿性关节炎、皮肌炎等，自身免疫性疾病常引起多系统损伤，且患者受个体差异影响临床表现差异性较大，诊断难度较大。
自身抗体是自身免疫性疾病患者诊断中的重要标志物。
目前抗核抗体检测在自身免疫性疾病患者诊治中运用较为广泛，为明确间接免疫荧光法检测抗核抗体在自身免疫性疾病中的应用价值，本研究对120例疑似自身免疫性疾病患者的间接免疫荧光法检测抗核抗体检测效果与免疫印迹法检测抗核抗体谱效果实施了对比。
现行报道：1 资料与方法1.1 一般资料在2017年1月到2018年5月间进行病例筛选，选期间内本院120例疑似自身免疫性疾病患者作为研究对象。
患者年龄12～73岁，平均年龄45.6岁（s=12.5）；性别分布：男/女为57/63；患者病理检查结果为：系统性红斑狼疮14例，类风湿性关节炎52例，硬皮病5例，干燥综合征21例，皮肌炎5例，甲状腺自身免疫病14例，非自身免疫性疾病9例。
实验三、间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体一、实验目的：1、掌握免疫荧光法的原理。
2、掌握免疫荧光法检测过程中避免非特异荧光干扰的方法。
二、实验原理：间接免疫荧光技术是利用荧光抗体标记第二抗体检测未知抗原或未知抗体（第一抗体）的方法。
以检测人血清抗核抗体（ANA）为例。
病人血清中ANA（Ab）能与各种系细胞核成分（Ag）特异性结合，此种结合的Ab（IgG型）能与荧光标记的羊抗人IgG（二抗）结合，在荧光显微镜下，细胞核显示荧光，提示血清中ANA的存在。
三、试验材料：0.1M，pH6.8PBS；小白鼠，待测血清，对照血清（阴性血清），羊抗人IgG荧光抗体、滴管、试管、孵箱、荧光显微镜等。
四、实验步骤：1、小鼠断颈处死取肝，NS漂洗，剪取肝横断面印片于玻片上，左右各一处，自然干燥；滴加无水乙醇固定，室温凉干；2、左右印片处分别盖上一片小纸片，分别滴加阳性血清和阴性血清各1滴，37℃30′；3、去除纸片，PBS冲洗1min×3次，吸干水分；4、左右印片处分别盖上一片小纸片，并滴加荧光标记羊抗人IgG（二抗）各1滴，37℃305、去除纸片，PBS漂洗1min×3次，吸干水分；6、荧光显微镜镜检。
五、实验结果：荧光显微镜下观察：细胞核发黄绿色荧光为阳性染色细胞，不发荧光为阴性；抗原片中出现阳性染色细胞为ANA 阳性，否则为阴性；阳性待检血清可作进一步稀释后测定效价。
（均质型）细胞核呈均匀一致的荧光(斑点型)细胞核内呈现斑点状荧光六、实验讨论：1、注意事项：1）制作核抗原片（印片）不宜太厚；2）滴加的血清或荧光抗体要充分盖满抗原片；3）荧光抗体孵育时要注意避光;4）染色后的片子应及时镜检，不宜放置过久。
5）注意各步骤的漂洗要充分。
2、临床意义：1）总的ANA检测在临床诊断与鉴别诊断中是一个极为重要的筛选试验。
绝大多数自身免疫性疾病均可呈阳性。
ANA阳性者进一步检测各亚类ANA抗体对明确诊断、临床分型、病情观察、预后及治疗评价有重要意义。
间接免疫荧光试验间接免疫荧光试验介绍：间接免疫荧光试验是用对应某一种抗原的抗体(这里被称为一抗)与细胞孵育结合，在采用对应一抗(也就是抗一抗)的抗体(这里被称为二抗，二抗上偶联有荧光素分子)与细胞孵育结合后在荧光显微镜下观察。
间接免疫荧光试验正常值：<1:64间接免疫荧光试验临床意义：异常结果：单份血清效价≥1:64或双份血清效价呈4倍增长或有IgM抗体出现即可诊断为立克次体感染。
本法不能区分患者感染的立克次体的类型。
特异性抗立克次体的IgM抗体的出现提示新近感染。
需要检测的人群：先天性弓形体感染地方性斑疹伤寒寇热小儿支原体肺炎布氏菌病等间接免疫荧光试验注意事项：检查前：抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
体检前一天的晚八时以后，应禁食，以免影响第二天空腹血糖等指标的检测。
检查时：应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难不适宜人群：没有间接免疫荧光试验检查过程：1. 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。
2. 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间(参考：30min)。
3. 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。
4. 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。
5. 立即用荧光显微镜观察。
观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：(-)无荧光;(±)极弱的可疑荧光;(+)荧光较弱，但清楚可见;(++)荧光明亮;(+++ --++++)荧光闪亮。
待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为(±)或(-)，即可判定为阳性。
