植物样品中荧蒽的提取测定
首先将植物样品进行冷冻干燥后研磨成粉末状，取一定量（2g）该粉末状样品于50mL棕色玻璃提取瓶中，用30mL有机萃取剂（1:1的丙酮和正己烷溶液）分3次，每次10mL并在超声水浴中超声萃取30min；将萃取液收集、过无水硫酸钠柱后，转移到50mL旋转蒸发瓶中；用甲醇定容到2mL；取1mL过2g硅胶柱净化，用11mL1:1的二氯甲烷和正己烷溶液洗脱；洗脱液收集至旋转蒸发瓶，40℃恒温下浓缩至干，用甲醇定容到2mL，过0.22μm孔径滤膜后，用HPLC分析测定，测定条件为色谱柱为4.6mm×150mm烷基C-18反相柱，流动相为色谱醇甲醇，流速1mL/min，柱温30℃，进样量20μL（Gao et al.,2004）。
实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。
在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。
而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。
多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。
这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器，试剂和材料1、仪器（1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。
（5）试管架，试管夹各2个；2、试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。
3、材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。
四、操作步骤1、葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。
各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。
可溶性糖含量测定1，试剂配制1) 葡萄糖标液100μg/ml ：10mg/100ml;2) 蒽酮试剂：200mg蒽酮溶于100ml98%硫酸溶液中，用时现配2 ，标准曲线a) 加盖振荡5min（涡旋5min）b) 之后立即将其放入沸水浴中保温7minc) 取出自然冷却至室温，测620nm处吸光度3 ，样品测定a) 称取样品0.1g，剪成 1cm 小段，加 10ml 水沸水浴 1h，自然冷却后，定至10ml；b）加提取液0.2ml ①蒸馏水 0.8ml②蒽酮试剂 4ml③C）后续操作和标曲操作一样，测OD值4 计算可溶性糖含量=X*V T*(W F*V S)-1X——测定的值（ug/ml）V T——提取液体积（ml）V S——测定时吸取的体积（ml）W F——称取样品鲜重（g）一、试剂配制1) 50mM Na-phosphate 缓冲液 PH7.0 （PBS7.0）母液 A（0.2M NaH2PO4·2H2O）31.2g/L （蒸馏水定容）母液 B（0.2M Na2HPO4·12H2O） 71.628g/L （蒸馏水定容）97.5ml A + 152.5ml B 蒸馏水定容至 1000ml195ml A + 305ml B 蒸馏水定容至 2000ml2) 50mM Na-phosphate PH7.8 （PBS7.8）21.25ml A + 228.75ml B 蒸馏水定容至 1000ml42.5ml A + 457.5ml B 蒸馏水定容至 2000ml3) 10mM EDTANa2：0.372g/100ml PBS7.8 定容4) 酶提取液：100ml PBS7.0 + 1g PVP + 0.00744g EDTANa1000ml PBS7.0 + 10g PVP + 0.0744g EDTANa5) 硼酸-硼砂缓冲液：母液A(0.05mol/L硼砂溶液)：称19.07gNa2B4O7.10H2O(M=381.43)溶解稀释至1000ml，硼砂易失水，必须在带塞得瓶中保存。
多环芳烃的测定----液相色谱法1范围本法规定了用液相色谱分析法测定水中的萘（NPH）、荧蒽（FLU）、苯并（b）荧蒽（BbF）、苯并（k）荧蒽（BkF）、苯并（a）芘（BaP）、苯并（ghi）謋（BPer）和茚并（1，2，3，-cd）芘(IP)。
本法适用于供水和原水中多环芳烃（PAH S）的测定。
取水样500ml，将固相萃取洗脱浓缩到0.5ml，进样10μL，最低检测质量浓度（单位ng/L）为：NPH：35.5，FLU：1.2，BbF：1.7，BkF：0.05，BaP：1.0， Bper：1.3，IP：5.5。
2 原理硅胶基底的共价特性可使许多化学官能团（C8或C18）对其表面进行化学修饰，使水中半挥发、不挥发性有机污染物得以保留。
本法采用以粗颗粒（40μm左右）硅胶为基底的C18键合相作为固相吸附载体，对水中的PAH S进行吸附保留；用二氯甲烷等低极性有机溶剂洗脱PAH S后，用带紫外检测器的高效液相色谱仪进行定性和定量。
3 试剂3.1 流动相：甲醇和水3.1.1 甲醇：色谱纯，用前通过滤膜过滤和脱气。
3.1.2 水：用0.2μm滤膜过滤。
3.2 配制标准样品和水样预处理的试剂3.2.1 二氯甲烷：色谱纯。
3.2.2 四氢呋喃：色谱纯。
3.2.3 异丙醇：色谱纯。
3.2.4 硫代硫酸钠。
3.3 标准溶液：标准储备液。
4 仪器4.1 玻璃器皿所用玻璃器皿均需经铬酸洗液浸泡，洗净后自然晾干。
4.1.1 采样瓶：带磨口玻璃塞的棕色玻璃细口瓶。
4.1.2 尖底浓缩管：最小分度为0.1ml，容积必须进行标定，带磨口玻璃塞。
4.1.3 25μL微量注射器（液相色谱仪手下工进样器）。
4.1.4 量筒：50mL、100mL、和1000mL。
4.2 样品前处理装置4.2.1 固相萃取抽滤装置（负压）或恒流蠕动泵（正压）。
4.2.2 真空泵（30 L/min）。
4.2.3 SPE固相萃取柱：填料为40μm的C18键合相（500mg）吸附剂。
植物体内可溶性糖和淀粉的测定
试剂
1.葡萄糖标准溶液（100ug/ml）：
2.蒽酮试剂：称取1.0g蒽酮，溶于1L浓硫酸
标准曲线的制作
将试管混匀后在沸水浴中煮10分钟，取出冷却，在620nm波长下，用空白调零测光密度
样品提取
糖的提取
称取干粉末0.05g,放入试管中，加6ml蒸馏水，在沸水浴中煮20分钟，滤液过滤到20ml刻度试管中，重复3次，然后用蒸馏水定容到刻度。
淀粉的提取
将提取可溶性糖后留下的残渣中加3ml蒸馏水，在沸水浴中煮15分钟，取出冷却后加2ml9.2mol/L的高氯酸，沸水浴中煮15分钟，取出加4ml水，过滤到20ml刻度试管中，沉淀中再加2ml4.6mol/l 高氯酸，沸水浴中煮15分钟，取出加6ml水过滤，滤液用蒸馏水定
容到20ml。
样品的测定
糖的测定：1ml样品提取液加5ml蒽酮试剂，混匀后沸水浴中煮10分钟，取出冷却620nm波长下比色。
淀粉的测定：0.2ml样品提取液加5ml蒽酮试剂，混匀后沸水浴中煮10分钟，取出冷却620nm波长下比色。
