醋酸洋红染色液

他用来染细胞质时， 能把 胶 胚胎材料等。

刚果红 可以跟苏 所以洗涤和脱水 处理要迅速。

三、常用染料介绍 （一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木 （热带豆科植物） 干枝中用乙醚浸制出来的一种色素， 是最常用的染 料之 一。

苏木精不能直接染色， 必须暴露在通气的地方， 使他变成氧化苏木精 （又叫苏木素） 后才能 使用，这叫做“成熟” 。

苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力 愈强。

被染材 料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。

所以在配制苏木精染剂时都要用媒 染剂。

常用的媒染剂 有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体， 易溶于酒精， 微溶于水和甘油， 是染细胞核的优良 材 料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。

分化时组织所染的颜色因处理的情 况而异， 用酸性溶液 （如盐酸—酒精） 分化后呈红色， 水洗后仍恢复青蓝色， 用碱性溶液 （如 氨水）分 化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。

一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末， 提取出虫红，再用明 矾处 理，除去其中杂质， 就制成洋红。

单纯的洋红不能染色， 要经酸性或碱性溶液溶解后才 能染色。

常 用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料， 染色的标本不易褪色。

用作切片或组织块染都适宜， 尤其适宜于 小型 材料的整体染色。

用洋红配成的溶液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后 再用。

（二）人工染料人工染料， 即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多， 应用极广。

它们的缺点是经日光照射容易 褪 色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。

在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也 能经几年不 褪色。

1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ）。

他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

普知--关于遗传物质被碱性染料染色~碱性液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用1．2龙胆紫C笛HIN具有金属光泽的暗绿色粉末。

能溶于水、三氯甲烷和醇；难溶于醚。

加热至275℃分解。

其1％一2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。

2染色剂的配制2．1配方1醋酸一洋红染液取100mL45％冰醋酸，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗锈铁钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。

2．2配方2龙胆紫染液，取龙胆紫1～2g，溶解在100mL2％乙酸溶液中，直到溶液成深紫色为止(实验过程中视具体情况溶液可适当稀释)。

保存在棕色瓶内。

3染料的作用机理3．1碱性染料染色试剂的酸碱性与溶液的酸碱性不是一回事。

染色试剂的酸碱性，其划分依据在于染料分子电离后的有色成分是阳离子还是阴离子，如果着色的基团是阳离子的为碱性染料，着色的基团是阴离子的为酸性染料3_2染色机理龙胆紫能不能染DNA?还是只是把染色质上的蛋白质染色?或是DNA和蛋白质都被染色?上文提到，碱性染料的着色基团是阳离子，着色基团可以与细胞中的带负电荷部分牢固地结合。

DNA是酸性物质，可电离出H，其余的部分就带上了负电荷。

因此，带负电荷部分就能和碱性染料电离出的着色阳离子通过电荷问的引力作用牢固结合，而被染上颜色。

有的染色作用随溶液中的pH值而变动。

细胞的主要成分是蛋白质，它含有氨基和羧基，在酸性溶液中，当溶液的pH值小于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带正电荷，易被酸性染料染色；在碱性溶液中，当溶液的DH值大于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带负电荷。

容易被碱性染料染色。

所以，可以得出结论：碱性染料使染色体着色，使DNA和蛋白质都被染色。

只不过这2种物质被染色的机理是不同的。

4碱性染料用酸配制的原因龙胆紫和洋红都溶于水和酒精。

而做实验用的龙胆紫和洋红溶液。

却都是用醋酸溶液配制的。

这又是为什么呢?原因有2个：1)是为了染色物能方便地进入细胞内，又不会发生细胞膨胀。

植物细胞学分析之组织切片技术一、试剂（1）卡诺氏固定液：无水乙醇与冰醋酸按体积比为3:1混合配制。

（2）1mol／L盐酸溶液：取浓盐酸（比重1.19）82.5ml，加入蒸馏水917.5ml。

（3）醋酸洋红染液：4-5g洋红，冰醋酸45ml，蒸馏水55ml，先将冰醋酸加入蒸馏水中煮沸，然后将火移去，立刻加入洋红，用玻璃棒搅匀溶化，冷却后过滤即成。

（4）70%酒精；95%酒精。

二、细胞分析方法1．有丝分裂全过程的染色体制片方法步骤：取材-预处理-固定-根尖解离1mol/L HCL-醋酸洋红染色-压片（1）发根挑选每份黑麦种子材料25粒，经流水冲洗，放于培养皿内温水浸泡24h。

置于25℃恒温箱中发根。

待根长到1～2cm时，于适宜时间用蒸馏水洗净，将水吸干，剪取根尖0.5～1cm进行预处理。

为获得尽可能多的分裂相，根尖以上午9～10时剪取为宜。

（2）预处理为了有利于有丝分裂中，染色体的观察和计数，通常要对材料进行不同的预处理。

预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成，来获得更多的中期分裂相，同时还可以改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。

将根尖浸于蒸馏水内，1-4℃低温处理24h。

（3）固定材料经预处理后，用流水冲洗2次，然后投入卡诺液（3份甲醇∶1份冰乙酸）中固定26h，用95％的乙醇洗两次，转入70％乙醇中保存备用（4℃）。

固定的目的是：①迅速防止细胞死亡后的变化，如自溶、腐败等，尽量保持生长状态结构。

②使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。

③使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定。

④使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。

⑤防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。

（4）解离常用酸解法：从70％乙醇中取出固定好的根尖，用蒸馏水冲洗后，吸水纸吸干，放入盛有1 mol/L的HCl的1.5ml离心管中，60℃水浴，恒温条件下解离10min。

植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。

实验目的：1. 学习植物枝条染色技术的原理和方法。

2. 掌握植物染色体观察的基本步骤。

3. 了解染色体在植物细胞分裂过程中的变化。

实验原理：植物细胞染色体是遗传信息的主要载体，通过染色技术可以将染色体染成深色，便于在显微镜下观察。

染色体的着色原理是利用染料与染色体中的DNA或蛋白质结合，使染色体在显微镜下呈现明显的深色。

实验材料：1. 植物枝条（如小麦、洋葱等）2. 醋酸洋红染液3. 70%酒精4. 1%盐酸5. 生理盐水6. 显微镜7. 盘子、镊子、刀片、纱布等实验步骤：1. 制备材料：- 选取新鲜植物枝条，用刀片切取一小段。

- 将枝条放入70%酒精中浸泡5-10分钟，以消毒。

- 取出枝条，用纱布轻轻擦干。

2. 染色：- 将消毒后的枝条放入装有醋酸洋红染液的容器中。

- 在室温下染色10-15分钟，期间轻轻摇动容器，使染液均匀接触枝条。

3. 解离：- 将染色的枝条取出，放入装有1%盐酸的容器中。

- 在室温下解离10-15分钟，期间轻轻摇动容器，使盐酸均匀接触枝条。

4. 漂洗：- 将解离后的枝条取出，放入生理盐水中漂洗3-5分钟，去除多余的盐酸。

5. 制片：- 将漂洗后的枝条取出，用镊子轻轻压扁。

- 将压扁的枝条放在载玻片上，用盖玻片覆盖。

- 在盖玻片边缘滴加少量生理盐水，用吸水纸吸去多余的水分。

6. 观察：- 将制片放在显微镜下观察，调节焦距，观察染色体的形态、大小和数量。

实验结果：在显微镜下观察到，植物枝条细胞中的染色体被染成红色，呈现明显的深色。

染色体呈棒状，具有明显的着丝粒和染色单体。

根据染色体的形态、大小和数量，可以判断出植物细胞的染色体数目和染色体类型。

实验分析：1. 染色技术是观察植物染色体的重要方法，通过染色可以使染色体在显微镜下呈现明显的深色，便于观察。

2. 盐酸解离是染色过程中的关键步骤，可以软化细胞壁，使染色体易于观察。

3. 植物枝条细胞中的染色体数目和类型与植物种类有关，可以通过染色技术进行观察和比较。

醋酸洋红液为什么是碱性染料？醋酸洋红液为什么是碱性染料?一：醋酸洋红的PH值小于7高中生物学课本在描述染色质时指出:染色质(体)容易被碱性染料染成深色.实验中对染色质(体)进行染色.须使用龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液等碱性染色剂.这些染色剂是以龙胆紫或洋红溶解于醋酸溶液中制得.配制后的龙胆紫溶液pH值约小于7(呈酸性).二：醋酸洋红是碱性染色剂那么为什么把龙胆紫溶液称为碱性染色剂呢?作为染色剂必须具备两个条件:一是具有颜色,二是要与被染组织间有亲和力.染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的.产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质.作为染料物质.除了有发色基团外.还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团.如染料化合物中往往由硝基(-NO2).偶氮基(-N=N-).乙烯基等形成了发色基团.而由-OH.-SO3H.-COOH等酸性基团和-NH2.-NHCH3.-N(CH3)2等碱性基团构成了助色基团.它们的存在使染料物质离子化.极性增强.促进染料与组织间发生作用.产生染色效果.我们把助色基团中具有酸性或碱性基团的染料分别称为酸性或碱性染色剂.如硝基是一种发色基团.当苯环中的3个氢原子被3个硝基取代后就成为三硝基苯的黄色化合物.三硝基苯不是染料.仅有一个发色基团.它不溶解于水.也不能电离.既不酸也不碱.不能与酸或碱形成盐类.如果三硝基苯分子中.用羟基再置换一个氢原子.就成为三硝基苯酚.即苦味酸.它即是一种黄色染料.有电离作用.与强碱能形成盐.这里的羟基便是助色基团.由此可知.苦味酸的颜色是由发色基团(硝基)所致.而它的染色性能则是由助色基团(羟基)形成的.如用氨基代替硝基.就形成无色化合物.不是染料.由此可见.作为染料.必须有发色基团和助色基团相互配合.缺一不可.如伊红Y含有一个(-COOH)助色基团.在水中电离时放出氢离子.本身带负电荷.配制成伊红Y染料时.与强碱NaOH作用生成盐(-COONa).此物质的Na+反而在溶液中呈碱性.所以不能认为酸性染料在溶液中就是酸性.所以.酸性(碱性)染色剂的界定并非由染料溶液的pH值决定的.而是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定.一般来说.助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂.反之则为酸性染色剂。

实验室常用染色液和试剂配方【很全】实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。

2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。

将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。

将两者混合即成。

3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成。

4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。

5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。

7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。

8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。

醋酸洋红染色原理
醋酸洋红染色是一种常用的细胞核酸染色方法，其原理是基于亲和染色剂醋酸洋红（Acridine Orange）与细胞核酸的高亲和性。

醋酸洋红是一种荧光染料，能够通过非共价键结合到DNA和RNA分子上。

在染色过程中，醋酸洋红的阳离子部分与负电荷的细胞核酸相互作用，形成分子间的静电吸引力。

正常细胞的细胞核DNA呈现双链螺旋结构，而RNA则为单链结构。

醋酸洋红与DNA结合后，呈现出深红色，而与RNA 结合后则呈现出橙色。

这是因为醋酸洋红与DNA的复合物存在与激发光波长不同的吸收峰，分别位于480 nm和550 nm。

而与RNA的复合物只存在一个吸收峰，位于450 nm。

因此，在荧光显微镜下观察时，DNA区域呈现深红色，而RNA区域呈现橙色。

通过醋酸洋红染色，我们可以在细胞中观察到DNA和RNA 的分布情况，判断其在细胞内的活跃程度和含量。

此外，醋酸洋红还具有荧光功能，能够通过荧光显微镜直接观察细胞核酸的活性和形态特征。

研究人员通常会利用这种特性，通过醋酸洋红染色来检测细胞的DNA含量、核酸的合成速率以及细胞凋亡等生理过程。

同时，醋酸洋红染色也被广泛应用于细胞培养、组织切片等细胞学研究的领域中。

实验一细胞减数分裂观察实验原理减数分裂是有性繁殖生物形成配子时的一种特殊的细胞分裂方式，减数分裂和受精作用成为多细胞生物世代间传递的中间环节，这种分裂方式保证了生物在世代传递过程中体细胞染色体数目的恒定不变，即都含有两个基本染色体组（二倍体生物），又可以实现物种内个体间遗传上的多样性。

减数分裂包括两次细胞分裂阶段，第一次是细胞染色体数目减半的分裂，第二次分裂是细胞染色体数目等数的分裂。

３．试剂：卡诺氏固定液（乙醇: 冰乙酸= 3 : 1）；醋酸洋红染色液（45%乙酸100mL+洋红1g 加热煮沸不超过30秒，冷却，加一枚生锈的铁钉，静置片刻过滤）。

1. 玉米花药压片（2n = 20）⑴取材：玉米抽穗前的大喇叭口期，取出花序分枝备用；⑵固定：雄花序在卡诺氏固定液中固定12～24小时后，可用于制片。

⑶染色和压片；取一枚花蕾，去除颖片，取出花药，置于干净的载玻片上，吸去多余的固定液，滴加一滴醋酸洋红染色液，用解剖针将花药切断成碎段并压出花粉母细胞。

静置15～20分钟。

加盖玻片，再在上面覆盖吸水纸，用大拇指压片（切勿使盖玻片滑动），也可以用解剖针柄轻敲盖玻片以使细胞和染色体分开。

⑷镜检：低倍镜下寻找花粉母细胞，再用高倍镜观察减数分裂各个时期染色体的形态和运动特征。

蝗虫精巢压片（2n = 24）⑴取材并固定：从野外捕获的雄性蝗虫经卡诺氏固定液固定，即可用于制作减数分裂标本片。

⑵剖解精巢：实验前将蝗虫置于培养皿中，剖取蝗虫的精巢。

剔除精巢周围的其他组织后，就可以进行染色处理。

⑶染色和压片；挑取一小段精巢置于干净的载玻片上，滴加一滴醋酸洋红染色液，用解剖针反复将精巢切断成碎段（尽可能碎），挑出肉眼可见的组织碎块，静置15～20分钟。

再加盖玻片并在上面覆盖吸水纸，用大拇指压片（切勿使盖玻片滑动），也可以用铅笔头等轻敲盖玻片以使细胞和染色体分开。

⑷镜检：低倍镜下寻找具有清晰分裂相的细胞，再用高倍镜观察减数分裂各个时期染色体的形态和运动特征。

人结肠切片三种特殊染色的比较李甜;陈红香;廖礼彬;冯树梅;秦纹;白生宾【摘要】目的比较人结肠组织切片阿利辛蓝AB染色(Alcian Blue)、过碘酸雪夫氏PAS染色(Periodic Acid Schiff)及洋红三种染色方法及镜下特点.方法取人结肠,Carnoy氏固定液固定,对结肠组织进行阿利辛蓝AB染色、PAS染色及洋红染色,光学显微镜下观察染色效果.结果三种染色都能清晰显示结肠组织的结构,尤其对结肠的粘膜层进行了观察.阿利辛蓝染色使结肠上皮吸收细胞的细胞核染为红色,杯状细胞中的黏液染为蓝紫色;洋红染色使结肠上皮吸收细胞的细胞核染为蓝紫色,杯状细胞中的黏液染为红色.结论阿利辛蓝和洋红染色均能清楚显示杯状细胞中的黏液,且染色后的细胞质和细胞核成为互补色,结构清晰,对比明显.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2015(024)001【总页数】3页(P109-111)【关键词】人结肠;阿利辛蓝染色;过碘酸雪夫氏染色;洋红染色【作者】李甜;陈红香;廖礼彬;冯树梅;秦纹;白生宾【作者单位】新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区人民医院妇科,乌鲁木齐830000;新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,乌鲁木齐830011;新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】R329组织切片的化学染色有多种方法，其中苏木精－伊红染色（hematoxylin eosin staining，HE）是最常用的染色方法之一，但是HE染色也存在一些缺陷，例如染液配制步骤复杂、不适于现配现用等［1］。

然而一些常用的特殊染色操作相对简单，结果较为稳定，可以弥补HE染色中的不足，特殊染色技术在组织切片观察中起到了不可替代的作用。