骨组织形态计量学方法课案
- 格式:doc
- 大小:249.00 KB
- 文档页数:10
一、课程基本信息1. 课程名称:骨科基础与临床2. 教学目标:- 知识目标:使学生掌握骨科基础理论知识和常见骨科疾病的诊断与治疗原则。
- 能力目标:培养学生运用骨科知识分析和解决实际临床问题的能力。
- 素质目标:提高学生的职业道德和团队协作能力。
3. 教学对象:医学相关专业本科生4. 教学时间:共计16学时,每周2学时二、教学大纲1. 第一周:骨科概述- 骨科发展史- 骨科研究进展- 骨科临床诊疗流程2. 第二周:骨骼系统解剖与生理- 骨骼系统结构- 骨骼系统生理功能- 骨骼系统常见疾病3. 第三周:关节疾病- 关节解剖与生理- 常见关节疾病(如:关节炎、关节损伤等)4. 第四周:骨折- 骨折的分类与诊断- 骨折的治疗原则- 常见骨折的治疗5. 第五周:脊柱疾病- 脊柱解剖与生理- 常见脊柱疾病(如:颈椎病、腰椎间盘突出等)6. 第六周:骨肿瘤- 骨肿瘤的分类与诊断- 骨肿瘤的治疗原则- 常见骨肿瘤的治疗三、教学过程1. 导入新课- 结合实际病例,激发学生学习兴趣,明确学习目标。
2. 讲授新课- 采用多媒体教学手段,结合图片、视频等资料,详细讲解骨科基础理论与临床知识。
- 注重理论与实践相结合,强调临床应用。
3. 课堂互动- 提出问题,引导学生思考,培养学生的分析问题和解决问题的能力。
- 鼓励学生积极参与讨论,分享自己的见解。
4. 案例分析- 通过分析典型病例,使学生掌握骨科疾病的诊断与治疗原则。
- 引导学生思考不同治疗方法的选择依据。
5. 实践操作- 组织学生进行骨科检查、体格检查等实践操作,提高学生的临床技能。
6. 总结与反馈- 对本节课的重点内容进行总结,解答学生疑问。
- 收集学生反馈意见,不断改进教学方法。
四、教学评价1. 课堂参与度:评价学生在课堂上的发言、提问、讨论等表现。
2. 知识掌握情况:通过课后作业、小测验等方式,评价学生对骨科知识的掌握程度。
3. 临床技能:通过实践操作考核,评价学生的临床技能水平。
2.5.4骨组织形态计量学方法2.5.4.1 不脱钙骨骨标本的包埋(1)包埋前单体(甲基丙烯酸甲酯)的洗脱方法①将1500ml的甲基丙烯酸甲酯倒入分液漏斗(2L)中。
②加入5% NaOH溶液500ml,充分摇匀,静置,待溶液分层后,放出下层溶液,弃去。
③重复操作“2”三次,三次的总量与单体量相当(洗脱阻滞剂)。
④加入500ml蒸馏水,充分摇匀,静置,待溶液分层后,放出下层溶液,弃去。
⑤重复操作“2”三次,三次的总量与单体量相当(洗脱NaOH)。
⑥将上述处理过的单体放入无水CaCl2(1000 ml:500g)脱水2次。
⑦滤纸过滤,收集滤液。
⑧-20℃保存备用,第二天取出看有无冰晶漂浮:无,表明无水可备用;有,则需重新脱水。
(2)胫骨上段包埋前的制备过程①暴露骨髓腔将固定液中的胫骨用低速锯锯开,暴露骨髓腔,解剖部位如下:②脱水分别通过70%乙醇2天,95%乙醇2天,100%乙醇1天,100%乙醇1天,四个脱水过程,二甲苯透明1天。
③渗透先后用浸液Ⅰ、浸液Ⅱ、浸液Ⅲ分别浸透2天。
三种浸液的配制方法如下:浸液Ⅰ甲基丙烯酸甲酯90ml,邻苯二甲酸二丁酯10ml,磁力搅拌器上搅拌3小时。
浸液Ⅱ甲基丙烯酸甲酯90ml,邻苯二甲酸二丁酯10ml,过氧化笨甲酰1.0g,磁力搅拌器上搅拌4小时。
浸液Ⅲ甲基丙烯酸甲酯90ml,邻苯二甲酸二丁酯10ml,过氧化苯甲酰2.5g,磁力搅拌器上搅拌6小时。
(3)包埋用新鲜配置的浸液Ⅲ(当日配置)倒入装有浸润好的骨头块容积约为15 ml 的小瓶中,倒入的包埋剂约,盖好瓶盖,并在瓶盖上插一注射器针头,室温过夜。
第二天把包埋瓶置入37-39℃的水育箱中聚合约48小时,直至包埋块形成。
若为胫骨中段骨,则需在包埋前几天预先倒入少量包埋剂于小玻璃瓶中作包埋块底衬,变硬后为1.5cm高为宜。
包埋时将胫骨中段至于瓶中央,在倒入2cm高的包埋剂。
若为胫骨上段,仅需将其锯开面贴瓶底中央包埋,倒入约3.5cm高的包埋剂即可。
2.5.4.2 不脱钙股组织片的制备(1)载玻片的制备①清洗把玻片在酸缸中浸泡24小时,取出,先用自来水冲洗,后用单蒸水冲洗,晾干。
②上胶称取1.8g明胶溶于200ml的双蒸水中,加热溶解明胶(90度)称取1g的硫酸铬钾溶于25ml的双蒸水中,待其完全溶解后缓缓倒入沸腾的明胶溶液中,边加边搅拌,直至其完全溶解再停止加热,溶液室温冷却至60℃左右即可使用;将载玻片浸入60℃的胶液中2min,取出晾干后即可使用。
(2)切片①打磨用石膏打磨机将包埋块打磨成合适大小,并暴露切面,把切面打磨到合适位置。
②切片将打磨好的块固定在切片机上,右手慢慢切下。
同时,左手用一沾有40%乙醇的软毛刷轻轻地拨下切片,注意不要弄烂切下的片,然后用毛刷把片转移到滴有一滴70%酒精的载玻片上,再滴一滴70%酒精,然后漫漫展平切片,盖上一张薄塑料片,并用滤纸将多余的酒精吸干。
一个标本切两种厚度的片5μm (薄片)和9μm(厚片):薄片用于Masson-Goldner Trichrome染色数破骨细胞;厚片可直接封片,测量动态参数;或硝酸银染色,测量静态参数。
③烤片将切好的一组片,用夹子夹稳,放入40℃左右的鼓风烤箱中烤4小时左右,取出备用。
(3)骨片染色5μm的薄片常采用Masson-Goldner Trichrome染色,染色后,骨质为绿色,骨髓为红色,用于观察骨小梁表面的破骨细胞和测量其周长。
9μm的厚片可采用硝酸银染色,染色后,骨质为黑色,反映矿化后的骨质,用于观察骨量和骨结构,下面是Masson-Goldner Trichrome染色过程。
①工作液的准备A.Weigert hematoxylin工作液:溶液A含Mematoxylin(苏木素精)1g加入95%酒精100ml中过滤备用;溶液B含29%氯化铁4ml、稀盐酸1ml(用40%的盐酸加蒸馏水1:4稀释),然后加蒸馏水至100ml。
将等份的溶液A和溶液B 混合即得工作液。
B. Poncean Fuchsin Stock工作液:配制溶液A含Poncean(丽春红)1g加蒸馏水100 ml,溶液B含Acid Fuchsin(品红)1g加蒸馏水100ml;将3份的溶液A和1份的溶液B混合配成原液,然后将原液用0.2%的醋酸按5:1的比例稀释成工作液。
C. Phosphotungstic acid-Orange G工作液:将Orange G 2g和Phosphotungstic acid 4g加入100ml蒸馏水中,用前过滤。
D. Light green工作液:将Light green(亮绿)0.2g和醋酸0.2ml加入100ml 蒸馏水中,用前过滤。
②染色过程脱塑剂2-Methyloxethyl acetate 25min 2次↓Weigerts hematoxylin工作液25min↓蒸馏水漂洗↓自来水漂洗10min↓蒸馏水漂洗↓Poncean-Fuchsin工作液染色17min↓1%醋酸漂洗2次,每次1min↓新鲜过滤的Orange G液染色7min↓1%醋酸漂洗2次,每次1min↓新鲜过滤的Light green染色15min-20min↓1%醋酸漂洗2次,每次1min↓95%酒精脱水1min↓无水酒精脱水2min,2次↓二甲苯清洗2次,每次2min,树脂封片(4)磨片制备磨片是将胫骨中段先用锯片机锯成100μm厚的骨片,锯骨时从胫腓韧带联合近侧端以胫骨干下端与腓骨完全分离为有效骨片,可尽量减少切片所造成的误差。
共锯三片,胫腓结合处为第一片,接下来依次为第二、三片。
在磨砂玻璃上将第二片磨成40μm的薄片,再进行酒精梯度脱水:70%-70%-95%-95%-100%-100%,二甲苯透明后树脂封片,测量皮质骨的各项参数。
2.5.4.3 骨组织形态计量学指标测定(1)测量分析范围胫骨上段测量范围:从生长板往下画出0.5mm,以避开初级海绵体,再从0.5mm处往下画3mm。
见图2.5。
皮质骨测量范围为横断面,见图2.6图2.5 胫骨上段测量范围图2.6 皮质骨测量范围Fig 2.5 Scope of PTM for bone histomorphometry Fig 2.6 Scope of MTM for measure(2)动、静态参数测量和计算本实验所有参数采用国际通用标准骨组织形态计量学术语命名[24-25]。
用半自动图象数字化仪直接测出参数的中英文名称、符号及单位等如表2.3和表2.5所示。
但这些参数还不能直接用于分析骨量、骨结构、骨形成和骨吸收等,要通过国际通用的公式[21]对直接测得的参数计算,才能用于分析。
计算参数的中英文名称、符号及计算公式等如表2.4和表2.6所示。
表2.3松质骨测量参数Tab2.3 Measurement s of PTM cancellous bone中文名称英文名称符号单位骨组织面积Tissue area T.Ar mm2骨小梁面积Trabecular bone area Tb.Ar mm2骨小梁周长Trabecular perimeter Tb.Pm mm单荧光周长Singlelabel perimeter sL.Pm mm双荧光周长Doublelabel perimeter dL.Pm mm双荧光间距Interlabel width Ir.L.Wi um破骨细胞数量osteoclast number N.Oc #破骨细胞周长ostelclast perimeter Oc.Pm mm表2.4松质骨计算参数及计算公式Tab2.4 Calculations of PTM cancellous bone中文名称符号单位公式骨小梁面积百分数%Tb.Ar % Tb.Ar/T.Ar*100骨小梁宽度Tb.Wi um (2000/1.199)(Tb.Ar/Tb.Pm)骨小梁数量Tb.N #/mm (1.199/2)*(Tb.Pm/T.Ar)骨小梁分离度Tb.Sp um (2000/1.199)*(T.Ar-Tb.Ar)/Tb.Pm荧光周长百分数%L.Pm % (dL.Pm±sL.Pm/2)/Tb.pm*100骨矿化沉积率MAR um/d IrL.Wi/intervel骨形成率BFR/BS um/d*100 (L.Pm±sL.Pm/2)*MAR/Tb.Pm*100BFR/BV %/year (dL.Pm±sL.Pm/2)*MAR/1000/Tb.Ar*365*10BFR/TV %/year (dL.Pm±sL.Pm/2)*MAR/1000/T.Ar*365*100Oc.N #/mm N.Oc/Tb.Ar单位骨小梁面积破骨细胞数破骨细胞周长百分率Oc.Pm% % Oc.Pm/Tb.Pm*100表2.5 松质骨测量参数Tab2.5 Histomorphometric measurements of Tx cortical bone中文名称英文名称符号单位骨组织总面积Total tissue area T.Ar mm2骨髓总面积Marrow area Ma.Ar mm2骨外膜面周长Periosteal perimeter P.Pm mm骨内膜面周长EndBGPortical perimeter E.Pm mm骨外膜面单荧光周长Single label perimeter P.sL.Pm mm双荧光周长Double label perimeter P.dL.Pm mm双荧光间距Inter label width P.Ir.L.Wi um骨内膜面单荧光周长Single label perimeter E.sL.Pm mm双荧光周长Double label perimeter E.dL.Pm mm双荧光间距Inter label width E.Ir.L.Wi um骨吸收周长Eroded perimeter Er.Pm mm表2.6皮质骨计算参数及计算公式Tab2.6 Histomorphometric calculations of Tx cortical bone中文名称符号单位公式皮质面积Ct.Ar mm2Tb.Ar-Ma.Ar皮质面积百分率%Ct.Ar % Ct.Ar/T.ar*100骨髓面积百分率%Ma.Ar % Ma.Ar/T.Ar*100骨外膜标记周长百分率%P-L.Pm % (P-dL.Pm+P-sL.Pm/2)/P.Pm*100 骨外膜骨矿化沉积率P-MAR um/d P-Ir.L.Wi/Interval骨外膜骨形成率P-BFR/BS um/d*100 P-L.Pm*P-MAR/P.Pm*100骨内膜标记周长百分率%E-L.Pm % (E-dL.Pm+E-sL.Pm/2)E.Pm*100 骨内膜骨矿化沉积滤E-MAR um/d E-Ir.L.Wi/Interval骨内膜骨形成率E-BFR/BS um/d*100 E-L.Pm*E-MAR/E.Pm*100(3)参数的意义① 静态参数用来评价药物防治效果,描述骨量多少和骨小梁的形态结构。