骨形态计量学Bone histomorphometry

Table2:Derived indice in Bone histomorphometry 中文名称 英文名称英文缩写 单位公式骨小梁相对体积 Percent trabecular area BV/TV % Tb.Ar/T.AR*100骨小梁厚度 Trabecular thickness Tb.Th μm (2000/1.199)( Tb.Ar/Tb.Pm ) 骨小梁数量 Trabecular number Tb.N #/mm (1.199/2)( Tb.Pm/T.Ar)骨小梁分离度 Trabecular separation Tb.Sp μm (2000/1.199)(T.Ar-Tb.Ar)/Tb.Pm 荧光周长百分率 Percent labeled perimeter %L.Pm % (dL.Pm+ sL.Pm/2 )/Tb.Pm*100 矿化沉积率 Mineral appositeion rate MAR μm /d IL.WI / Intervel骨形成率 Bone formation rate BFR/BS BFR/BV μm /d*100 %/year (dL.Pm+ sL.Pm/2)*MAR / Tb.Pm*100(dL.Pm+ sL.Pm/2)*(MAR/100*365)/Tb.Ar*100 单位骨小梁OC 数Osteoclast numberOC.N#/mm 2N.Oc/Tb.Ar计算所得参数可分为静态和动态参数. 1)静态参数：用来评价药物防治效果，描述骨量的多少和骨小梁的结构。

骨小梁相对体积（BV/TV ）：指骨小梁体积占骨组织体积的百分比，反映骨量的多少。

它等于骨小梁厚度与数量的乘积的1/10，也就是说骨量多少由厚度和数量共同决定。

骨小梁厚度(Tb.Th)：用于骨小梁结构形态，解释骨量变化。

其变化可影响骨量，在骨小梁一定的情况下，厚度越大，骨量越大越多。

骨小梁数量(Tb.N)：用于描述骨小梁结构形态，解释骨量变化。

2.5.4骨组织形态计量学方法2.5.4.1 不脱钙骨骨标本的包埋（1）包埋前单体（甲基丙烯酸甲酯）的洗脱方法①将1500ml的甲基丙烯酸甲酯倒入分液漏斗（2L）中。

②加入5% NaOH溶液500ml，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。

③重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱阻滞剂）。

④加入500ml蒸馏水，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。

⑤重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱NaOH）。

⑥将上述处理过的单体放入无水CaCl2（1000 ml：500g）脱水2次。

⑦滤纸过滤，收集滤液。

⑧-20℃保存备用，第二天取出看有无冰晶漂浮：无，表明无水可备用；有，则需重新脱水。

（2）胫骨上段包埋前的制备过程①暴露骨髓腔将固定液中的胫骨用低速锯锯开，暴露骨髓腔，解剖部位如下：②脱水分别通过70%乙醇2天，95%乙醇2天，100%乙醇1天，100%乙醇1天，四个脱水过程，二甲苯透明1天。

③渗透先后用浸液Ⅰ、浸液Ⅱ、浸液Ⅲ分别浸透2天。

三种浸液的配制方法如下：浸液Ⅰ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，磁力搅拌器上搅拌3小时。

浸液Ⅱ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化笨甲酰1.0g，磁力搅拌器上搅拌4小时。

浸液Ⅲ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化苯甲酰2.5g，磁力搅拌器上搅拌6小时。

（3）包埋用新鲜配置的浸液Ⅲ（当日配置）倒入装有浸润好的骨头块容积约为15 ml 的小瓶中，倒入的包埋剂约，盖好瓶盖，并在瓶盖上插一注射器针头，室温过夜。

第二天把包埋瓶置入37-39℃的水育箱中聚合约48小时，直至包埋块形成。

若为胫骨中段骨，则需在包埋前几天预先倒入少量包埋剂于小玻璃瓶中作包埋块底衬，变硬后为1.5cm高为宜。

包埋时将胫骨中段至于瓶中央，在倒入2cm高的包埋剂。

若为胫骨上段，仅需将其锯开面贴瓶底中央包埋，倒入约3.5cm高的包埋剂即可。

表5男女闻体重相同的10对配对骨矿量比较男女显著性检验n均值标准差rt 均值标准差(t值) BMD下肢101．1791．104 101．196O．0780．369(P>O．5) (g／甜)全身101．150O．05410】．191O．085j．205(p)0．1) BMC下肢10987141109411640．125(P>O．05)(g)全身1027512971026493960．084(P>0．05)体重(1‘g)1072．413．98 1072．4 13．98无差异结论骨矿量可以代表60—80％骨强度，骨密度仪测量骨矿量有BMD和BMC两个指标可用，骨强度主要由体重决定，所以研究体重与BMD、BMC之间的关系作为选择应用指标的依据，经117例(男54，女 63)分析，发现BMC与体重之间呈密切正相关(r=0．611一O．846之间)，而BMD与体重之间仅有较弱相关。

经用体重标准化(BMC÷体重)及男女之间相同体重配对消除体重对BMC的影响后，发现男女之间的BMC基本上没有差异，所以BMC较BMD更能代表骨强度，如用BMC指标诊断骨质疏松比用BMD更有利，有关BMC在骨质疏松诊断实践中应用的其它问题有待进～步研究。

A13．骨组织形态计量与微损伤分析中南大学湘雅医学院附属二院代谢内分泌研究所(41001I)廖二元一、骨组织形态计量作为骨质疏松(OP)诊断和疗效评价金标准的BMD，在临床上已应用多年。

新一代的DEXA测量仪具有灵敏度高．可测量任意骨骼部位等优点，但．BMD所固有的缺陷必须克服，并急待将代谢性骨病的诊断和药物评价手段深入到更深层次。

BMD的固有缺点主要表现为：①测量结果受骨盐含量的影响，而骨盐含量并不反映骨病的病因和病理．而且受韧带钙化、骨质增生、动脉硬化等的影响；②BMD不能直接反映骨的力学性能，而骨折与否在很大程度上取决于骨的生物质量而非骨盐含量；③BMD表达的是整块骨骼的骨盐，无法了解更微小部位的病变特征。

含辅酶Q10和洛伐他汀的红曲胶囊对老年性骨质疏松大鼠腰椎骨丢失的改善作用作者：吕思敏于琼司徒永立孙金影崔燎吴铁来源：《中国医药导报》2017年第31期[摘要]目的评价含有辅酶Q10以及洛伐他汀的红曲胶囊对老年性骨质疏松模型腰椎骨骨药理学的作用。

方法采用3月龄SPF级雌性SD大鼠45只，根据体重随机分为5组：假手术组（CON组），去卵巢组（OVX组），模型组（MOD组），己烯雌酚组（DES组）以及红曲胶囊组（RYR组），每组9只。

取材前第13、14天和第3、4天进行皮下注射7 mg/kg钙黄绿素进行骨荧光标记。

给药60 d后，取第四腰椎进行Micro CT扫描，之后制成不脱钙的骨切片，进行骨形态计量学检测。

结果与CON比较，MOD组Micro CT指标：骨体积分数（BV/TV），骨小梁厚度（Tb.Th），骨小梁数量（Tb.N），连接密度（Conn-Dens）以及骨密度（Density）均显著下降（P < 0.01），而骨小梁分离度（Tb.Sp）和结构模型指数（SMI）显著增大（P < 0.01）；形态计量学参数：骨小梁面积百分数（%Tb.Ar）和Tb.N均显著降低（P < 0.01），而Tb.Sp和破骨细胞周长百分率（%Oc.Pm），单位骨小梁面积破骨细胞数（Oc.N），以及骨形成率（BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV）和荧光周长百分数（%L.Pm）均显著增加（P < 0.01）。

与MOD组比较，RYR组Micro CT指标：BV/TV，Tb.Th，Tb.N，Conn-Dens以及Density均显著增加（P < 0.01），而Tb.Sp和SMI均显著降低（P < 0.01）；形态计量学参数：%Tb.Ar和Tb.N均显著增加（P < 0.01），而Tb.Sp和%Oc.Pm，Oc.N以及BFR/BS、BFR/BV、BFR/TV和%L.Pm均显著下降（P < 0.01）。

2.5.4骨组织形态计量学方法2.5.4.1 不脱钙骨骨标本的包埋（1）包埋前单体（甲基丙烯酸甲酯）的洗脱方法①将1500ml的甲基丙烯酸甲酯倒入分液漏斗（2L）中。

②加入5% NaOH溶液500ml，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。

③重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱阻滞剂）。

④加入500ml蒸馏水，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。

⑤重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱NaOH）。

⑥将上述处理过的单体放入无水CaCl2（1000 ml：500g）脱水2次。

⑦滤纸过滤，收集滤液。

⑧-20℃保存备用，第二天取出看有无冰晶漂浮：无，表明无水可备用；有，则需重新脱水。

（2）胫骨上段包埋前的制备过程①暴露骨髓腔将固定液中的胫骨用低速锯锯开，暴露骨髓腔，解剖部位如下：②脱水分别通过70%乙醇2天，95%乙醇2天，100%乙醇1天，100%乙醇1天，四个脱水过程，二甲苯透明1天。

③渗透先后用浸液Ⅰ、浸液Ⅱ、浸液Ⅲ分别浸透2天。

三种浸液的配制方法如下：浸液Ⅰ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，磁力搅拌器上搅拌3小时。

浸液Ⅱ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化笨甲酰1.0g，磁力搅拌器上搅拌4小时。

浸液Ⅲ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化苯甲酰2.5g，磁力搅拌器上搅拌6小时。

（3）包埋用新鲜配置的浸液Ⅲ（当日配置）倒入装有浸润好的骨头块容积约为15 ml 的小瓶中，倒入的包埋剂约，盖好瓶盖，并在瓶盖上插一注射器针头，室温过夜。

第二天把包埋瓶置入37-39℃的水育箱中聚合约48小时，直至包埋块形成。

若为胫骨中段骨，则需在包埋前几天预先倒入少量包埋剂于小玻璃瓶中作包埋块底衬，变硬后为1.5cm高为宜。

包埋时将胫骨中段至于瓶中央，在倒入2cm高的包埋剂。

若为胫骨上段，仅需将其锯开面贴瓶底中央包埋，倒入约3.5cm高的包埋剂即可。

⾻形态计量学在⾻质疏松研究领域的研究进展主⾿量⾥堕坠垄查！螋！⾄！旦箜！！鲞箜！塑⽣些！！Ｑｅ！！塑！！！塑！！！№：！⾻形态计量学在⾻质疏松研究领域的研究进展刘康史晓林⾻质疏松症，是以⾻量减少及⾻组织显微结构退变为特征的⼀种全⾝性⾻骼疾病，伴有⾻脆性增加，易于发⽣⾻折。

⾻质疏松症可分为原发性、继发性和特发性３⼤类。

其中，原发性⾻质疏松症约占⾻质疏松症的９０％，它⼜可分为两型：其⼀，为绝经后⾻质疏松症，其⼆，为⽼年性⾻质疏松症ｏ“。

⽬前，随着⼈⼝⽼龄化Ｅｔ趋明显，⾻质疏松症的发病率已位居全球常见病的第７位，由⾻质疏松所致的⾻痛和⾻折直接影响中⽼年⼈的⽣存质量⼼ｏ。

以往对⾻质疏松症的研究主要集中于⾻量，⽽对⾻质量问题的研究是⼀个新近提出的热门⽅向。

⾻组织形态计量学⽅法对⾻质疏松症的防治研究有着不可或缺的价值与意义。

１⾻形态计量学在⾻质疏松研究领域的研究价值⾻组织形态计量学（ｂｏｎｅｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ，简称⾻计量学）属于体视学、⽣物医学组织形态计量学中的⼀个特殊分⽀，是依据⾻组织学和⽣理学，基于体视学原理，从⼆维切⽚上推导三维结构的⼀种⽅法¨引。

该⽅法除能将形态学观察到的⾻组织结构改变，⽤定性、定量的计量⽅法求得⾻体积密度、⾻⼩梁表⾯积、⽪质⾻厚、⾻⼩梁间距、⾻⼩梁厚的平均值等，还能对类⾻质进⾏分析，求得平均类⾻质体积、平均类⾻质表⾯、平均类⾻质宽、成⾻细胞活跃表⾯、破⾻细胞活跃表⾯和平均⾻壁厚等指标，并且还能通过活体四环素双标记的⽅法，利⽤四环素能与⾻特异结合并沉积在⾻矿化前沿的特性，把时间因素标记在⾻的重建过程中，可以测定多组⾻动⼒学组织参数¨１。

在荧光显微镜下，观测⾻组织内两次标记的四环素荧光线间距离，单、双标四环素荧光⾻矿化前沿的标记率等动态变化，从⽽求得诸如⾻矿化沉积率、单标四环素表⾯、双标四环素表⾯及基⾦项⽬：浙江省科技厅重点攻关项⽬（２００６Ｃ２３０１１）作者单位：３１００５３杭州，浙江中医药⼤学附属第⼆医院通讯作者：刘康，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｕｋａｎ９１９８２＠１６３．ＣＯ／ＩＩ?综述?单、双标四环素表⾯⽐、矿化延迟时间、⾻再建单位时间和纠正矿化沉积率等多项⾻动⼒学指标，从⽽可获取⾻细胞、组织以及器官⽔平上的信息。

补肾壮骨合剂对骨质疏松口腔种植体骨组织界面改建的形态计量学观察【摘要】目的: 通过建立犬骨质疏松模型，研究补肾壮骨合剂对骨质疏松口腔种植体骨组织界面改建的影响。

方法:选用动物犬9只，分为中药组、西药组、对照组各3只。

将9只犬制作成骨质疏松模型，在三组动物下颌骨分别2颗植入BLB种植体，分不同程期处死动物。

采用HE染色对种植体-骨界面改建过程进行动态观察骨质疏松对牙种植体骨结合的影响。

结果: 骨计量学测量表明:在种植术后4周及12周时，对照组与西药组比较，结合骨板宽度、种植体骨一结合率及松质骨区骨量均显著降低(P＜005或P＜0.01)。

中药组与对照组比较，除12周时皮质骨接合率及骨矿化率无显著差异外(P>0.05)，其它各项骨计量学参数均显著增高(P＜005或0.05)。

结论: 补肾壮骨合剂可使骨质疏松犬种植体结合骨板宽度、种植体一骨结合率及松质区骨量明显增加，并提高新生骨组织矿化率，从而促进种植体骨结合。

【关键词】骨质疏松;种植体;种植体-骨界面;改建骨质疏松症是以骨量减少，骨小梁稀疏变细为特征的系统性骨代谢疾病，目前被公认为牙种植的相对禁忌症。

由于牙种植的患者绝大多数是中老年人，他们也是骨质疏松的高发人群;因而研究骨质疏松对牙种植体骨结合的影响及机理，探索有效途径促进骨质疏松时牙种植体的骨结合，是提高种植体的成功率的关键，对临床上患有骨质疏松的患者行牙种植术具有重要的意义，也是需要解决的重要课题。

目前，国内外很多学者应用祖国医学治疗骨质疏松症，但其对骨质疏松时牙种植体骨结合的影响尚不清楚，国内外也未见该方面的实验研究报道。

为此，本课题采用双侧卵巢切除法建立犬骨质疏松模型，给予补肾壮骨合剂治疗，并通过制作带种植体的不脱钙骨组织切片，应用计算机图像分析系统，通过骨组织形态计量学方法观察，来进行如下研究: 补肾壮骨合剂对骨质疏松时牙种植体骨结合的影响，探索临床上应用补肾壮骨合剂治疗来促进骨质疏松患者种植体骨结合，提高种植体成功率的可行性，并为此提供科学的实验依据。

2021年 02月第18卷第1期生物骨科材料与临床研究O rthobabdic B iomechanics M aterials A nd C linical S tudy.9.doi: 10.3969/j.issn. 1672-5972.2021.01.003文章编号:swgk2020-l 1-00300一种简便的骨动态参数计量方法**基金项目:深圳市科创委项目（JCYJ20180305164659637, JCYJ20190806160407178, JCYJ2018030516454428& JSGG20180504170427135, SGLH20180625141602256,JCYE017041362104773）作者单位:深圳市人民医院（暨南大学第二临床医学院，南方科技大学第一附 属医院）脊柱外科，广东深圳,518020彭松林 王尚 王振民 龙灿玲 唐苑泽 贺小琴 陈高扬*［摘要］目的探索操作方法简便、耗时少且对切片仪器要求不高的大鼠股骨硬组织切片方法。

方法选取12只两 月龄SD 雌性大鼠，随机分组为假手术组和双侧卵巢切除组（每组各6只），构建骨质疏松模型。

在取材前第9天和第2天腹腔注射钙黄绿素（25 mg^g ）o 取材后釆用4%中性多聚甲醛固定并进行microCT 扫描和硬组织冰冻切片观察骨量情况。

结果卵巢切除组大鼠骨量明显少于假手术组，且股骨经蔗糖梯度脱水后冰冻切片完整，荧光显微镜下能明显观察到2条荧光带且卵巢切除组条带宽度明显小于假手术组。

结论利用常规冰冻切片机借 助透明胶带的黏附作用可对大鼠股骨进行冰冻切片，能有效提高骨组织切片完整度，此办法操作简单快捷，对 仪器要求不高，便于常规实验室的普及应用。

［关键词］冰冻切片；硬组织切片；骨质疏松；骨动态学参数［中图分类号］R318［文献标识码］AA simple method for measuring bone dynamic parametersPeng Songlin, WangShang, WangZhenmin, Long Canting, Tang Wanze, HeXiaoqin, Chen Gaoyang. Department of S pine Surgery, Shenzhen People's Hospital (The Second Clinical Medical College, Jinan University; The FirstAffiliated Hospital, Southern University of S cience and Technology), Shenzhen Guangdong, 518020, China[Abstract] Objective To explore a method for slicing mouse femoral hard tissues that is simple in operation, shorter in time and less stringent on slicing equipment. Methods Twelve two-month-old SD female rats were selected and randomly divided into a sham operation group and a bilateral ovariectomized group (6 in each group). After two months of r earing,the osteoporosis model was caused on the 9th day and the day before the collection. On the second day, calcein wasinjected intraperitoneally. After the material was taken, the attached muscles on the femur were removed and fixed with 4% neutral paraformaldehyde, and then microCT scan and frozen section were performed to observe the bone mass.Results The bone mass of t he rats in the ovariectomized group was significantly less than that in the sham operation group,and the femurs were dehydrated by a sucrose gradient and then frozen sectioned intact. Two fluorescent bands were clearly observed under a fluorescence microscope and the band width in the ovariectomized group was significantly smaller thanthat in the sham operation group. Conclusion The use of conventional cryostats with the aid of the adhesive effect ofscotch tape can be used to freeze section of r at femurs, which can effectively improve the integrity of b one tissue slices. This method is simple and quick to operate and does not require high equipment for popularization in conventional lab ­oratories.[Key words] Frozen section; Hard tissue section; Osteoporosis; Bone dynamics parameters骨形态计量学是骨科研究中常用的研究骨代谢的手段,但骨组织结构致密且富含钙盐和无机盐导致其脆性增加，普 通切片很难切除完整骨组织叫目前常用的骨组织切片需进 行脱钙处理，而普通脱钙液普遍需要3〜4周，甚至几个月的脱钙时间，耗时长且对组织形态有着不可逆转的损伤悶。