LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的对比探究

环介导等温扩增技术在食品安全检测领域的应用研究进展范安妮;佘之蕴;张娟;周臣清;梁宇斌【摘要】环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年发展起来的一种新型核酸检测技术其采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件下进行核酸扩增,与传统核酸检测技术(PCR法、实时荧光定量PCR法)相比,具有操作简单、特异性强、灵敏度高、可肉眼判读结果等优点核酸检测是食品安全检测技术的一个重要手段,本文综述了LAMP技术在食品微生物检测、转基因成分检测、过敏原成分检测和动物源性成分检测领域的应用研究进展,探讨了LAMP技术在食品检测领域的发展前景,以期为食品快速、高通量检测技术建立提供参考%loop-mediated isothermal amplification(LAMP) is a novel nucleic acid amplification method developed in recent years.The nucleic acid amplification is performed ender isothermal conditions by a set of four specially designed primers and a DNA polymerase with strand displacement pared with the traditional nucleic acid detection technology (PCR and real-time fluorescence quantitative PCR),it has the advantages of easy operation,high specificity,sensitivity and visual interpretation.Nucleic acid detectiou is an important means of food safety detection.This review summarized the application research progresses mainly focused on food safety detection,including food microorganisms testing,genetically modified organisms testing,food allergens testing and food derived ingredients testing.In addition,the perspectives of LAMP in food detectiou were discussed for better and high volume testing in food safety detection.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)010【总页数】5页(P330-334)【关键词】环介导等温扩增技术(LAMP);食品安全;检测;核酸扩增【作者】范安妮;佘之蕴;张娟;周臣清;梁宇斌【作者单位】广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300;广东产品质量监督检验研究院,广东顺德528300【正文语种】中文【中图分类】TS207.3核酸扩增是分子生物学研究领域的一项重要技术,目前已广泛应用于医学诊断、食品检测、动植物检验检疫等行业中。

LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的对比探究作者：颜学伟来源：《中外医学研究》2013年第05期【摘要】目的：研究LAMP法和PCR法在阪崎肠杆菌快速检测中的差异，指导临床在阪崎肠杆菌快速检测中方法的选择。

方法：针对阪崎肠杆菌的OmpA基因，设计相关特异性引物，分别建立LAMP法和PCR法两种检测方法体系对其进行检测，并对两种检测方法的灵敏度进行记录比较；分别采用两种方法对45株阪崎肠杆菌近源菌进行检测，分析比较两种方法的特异性；最后采用两种方法对60份商场奶粉样品进行检测，将检测结果与FDA检测结果进行比较分析。

结果：两种检测方法的灵敏度检测结果显示：LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测的敏感度（101 cfu/ml）明显高于PCR法（102 cfu/ml），两者比较差异有统计学意义（P【关键词】 LAMP； PCR；阪崎肠杆菌中图分类号 R33 文献标识码 A 文章编号 1674-6805（2013）5-0001-02阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。

由其可引发婴儿各种疾病，致病机制可能与其侵入、诱导凋亡及肠毒素作用有关[1]。

对于阪崎肠杆菌的检测，最新研究发现LAMP法对阪崎肠杆菌快速检测，灵敏度高、特异性强[2]。

笔者所在医院应用LAMP法和PCR法对阪崎肠杆菌快速检测的进行对比探究，现报道如下。

1 资料与方法1.1 菌株标本所研究的菌株共60株，其中2株阪崎肠杆菌标准菌株是由广东省微生物研究所提供的ATCC51329和ATCC29544，8株阪崎肠杆菌野生菌株是采用FDA传统手段从商场奶粉或果汁中提取出来的；其余在试验中用到的菌株均为本实验室自己保存。

1.2 仪器细菌基因组DNA抽提试剂盒（上海生工生物工程技术服务有限公司），Bst DNA Polymerase（美国NEB公司），betaine（美国Sigma公司），agarose（Promega），DK28D型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司），PCR仪：PTC-200型；美国Bio-rad公司，EPS301电泳仪（瑞典Amersham公司）。

婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测李莉; 陈泽辉【期刊名称】《《中国卫生标准管理》》【年(卷),期】2019(010)018【总页数】4页(P4-7)【关键词】阪崎克罗诺杆菌; Lamp; 婴儿配方奶粉; 快速检测; 特异性; 灵敏度【作者】李莉; 陈泽辉【作者单位】厦门市疾病预防控制中心业务质量管理科福建厦门361021; 厦门市疾病预防控制中心检验科福建厦门361021【正文语种】中文【中图分类】R155阪崎克罗诺杆菌，又称阪崎肠杆菌，多寄生于人和动物的肠道中，为食源性致病菌，多来源于婴幼儿食品。

阪崎克罗诺杆菌有鞭毛，兼性厌氧，属于革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。

婴幼儿感染后容易造成新生儿脑膜炎、坏死性结肠炎和败血症等，对尚未发育完全的神经系统造成影响，严重者可导致死亡[2]。

近年来，阪崎克罗诺杆菌感染的发生率呈上升趋势，因而快速检测阪崎肠杆菌，并制定相应的防控方案在公共卫生领域十分重要[3]。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验用菌株本研究用到的菌株见表1。

1.1.2 样品与试剂本研究检测采用的样品婴幼儿奶粉，来源于厦门市各超市。

万古霉素试剂：北京陆桥技术股份有限公司。

阪崎肠杆菌核酸快速检测试剂盒：广东环凯微生物科技有限公司。

1.2 主要仪器设备BSC-1500IIA2-X型生物安全柜：济南鑫贝西生物技术有限公司；GNP-9160型、GNP-9080型隔水式恒温培养箱：上海精宏实验设备有限公司；HV-25型高压灭菌器：日本平山制作所株式会社；Pico7500 2415型台式高速离心机：厦门联仪通医疗设备有限公司；EPPENDDO-RF型恒温金属浴：厦门宝能科技有限公司；IKA MS3型漩涡混合仪：福州齐力特实验设备有限公司；BCD-218S DA型海尔冰箱：青岛海尔股份有限公司。

1.3 方法1.3.1 传统分离鉴定应用GB 4789.40-2010方法，取100 mg样品，加到高压灭菌过的，44℃的装有900 mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，混匀。

阪崎肠杆菌检测方法的研究进展与优化作者：李帆来源：《环球市场信息导报》2014年第09期阪崎肠杆菌（Enterobacter Sakazakii ）是乳制品中近几年新发现的一种致病菌，是肠杆菌科的一种。

目前国际社会上针对该菌的研究无论是在医学还是公共卫生学上都具有极其重要的意义。

阪崎肠杆菌菌型繁多，传统的血清学鉴定、选择性和非选择性增菌等检测方法存在灵敏度低、耗时长等缺点，难以满足食品及临床应用。

国内外学者对阪崎肠杆菌检测技术进行了大量研究，并取得了一定的进展。

检测方法主要分为以免疫学为基础的方法、分子生物学方法、联合方法三类方法。

该文就这三类方法研究进展进行概述。

阪崎肠杆茵的生物学性状及其对人群的健康危害受到人们的关注并被报告。

例如，味全配方奶粉2008年年10月份被检出含有致病菌阪崎肠杆菌。

阪崎肠杆菌是奶粉（乳）制品中新发现的一种致病菌。

由其引发的婴儿、早产儿脑膜炎、败血症及坏死性结肠炎散发和暴发的病例已在全球相继出现。

多份研究报告表明婴儿配方奶粉是当前发现致婴儿、早产儿脑膜炎、败血症和坏死性结肠炎的主要感染渠道，在某些情况下，由阪崎肠杆菌引发疾病而导致的死亡率可达40%～80%。

阪崎肠杆菌已引起世界多国相关部门的重视。

传统的检测方法存在很多缺点，很难满足现代临床快速诊断和治疗，食品检测的需求。

要了解更准确，快速，简便，可靠的方法和技术，科学为此已作了大量的研究，试验方法和识别技术正在不断发展和完善，并在实践中不断取得新的进展，从传统到更敏感的检测方法，比较简单，在发展方向更短的时间。

1 以免疫学为基础的检测方法免疫学相关技术主要内容是抗原和抗体之间的特异性结合的反应，然后通过免疫放大技术来分辨细菌。

由于抗原抗体反应速度快，人们通过这种高灵敏度建立了一系列的检测方法。

已经实践了的方法有很多种，大致分为荧光抗体（免疫荧光法），同位素标记抗体（放射免疫试验），酶标抗体（ELISA）为基础方法。

2 分子生物学方法分子生物学诊断技术是现代分子生物学与分子遗传学取得巨大进步的结晶，是在人们对基因的结构以及基因的表达和调控等生命本质问题的认识日益加深的基础上产生的。

LAMP和荧光定量PCR检测食品中致病微生物的比较研究曾婷;谢逸欣;马丽【期刊名称】《临床军医杂志》【年(卷),期】2013(0)3【摘要】目的比较环介导等温扩增(LAMP)和荧光定量PCR技术对沙门菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的检测效果。

方法对2株沙门菌、2株大肠埃希菌和3株金黄色葡萄球菌分别采用LAMP及荧光定量PCR进行检测,比较两种方法的检测结果。

结果两种方法均展示很好的检测效果,在对牛奶和污水的检测中,两者的检测率相同,在对虾的检测中,荧光定量PCR相对于LAMP表现更高检测率,对沙门菌和大肠埃希菌的检测率,两法差异均无统计学意义(P>0.05),对金黄色葡萄球菌的检测率,两法差异有统计学意义(P<0.05)。

结论荧光定量PCR和LAMP对食品致病菌的检测都具有较高的敏感度。

【总页数】3页(P304-306)【关键词】环介导等温扩增技术;荧光定量PCR技术;食品安全【作者】曾婷;谢逸欣;马丽【作者单位】解放军广州军区疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】MP和荧光定量PCR检测食品中致病微生物的对比分析 [J], 钟秀茵;杨晓斌;刘钰钗;何湘鹃;2.实时荧光定量PCR与酶联定量PCR技术在 HBV-DNA载量检测中的比较研究[J], 马力;赵桂珍MP和荧光定量PCR检测食品中致病微生物的对比分析 [J], 钟秀茵;杨晓斌;刘钰钗;何湘鹃4.荧光定量PCR与LAMP检测IHHNV的特异性和灵敏性比较 [J], 赵哲;任春华;江晓;张吕平;冯娟;胡超群5.实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较[J], 吴晓利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

LAMP实时浊度法快速检测肠出血性大肠杆菌O157的研究肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157发病率越来越高，已经被世界卫生组织列为新的病原菌。

而大肠杆菌的传统检测方法消耗时间长、步骤多而复杂，因此开发高效、快速、特异性高的鉴定方法，已经成为当务之急。

在分子生物学水平上来研究EHEC O157的核酸结构和分子特征，采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)方法来进行检测EHEC O157，将可能取代PCR检测成为大肠杆菌O157快速检测的发展方向。

LAMP 实时浊度法是利用浊度仪全程监控等温扩增过程，主要通过LAMP扩增反应过程中会产生的一种白色沉淀副产物焦磷酸镁，与反应液中靶基因得到扩增的量成正比，通过沉淀产生的起始时间判断反应的进行的程度。

本研究主要针对EHEC O157的抗原基因rfbE和产Vero毒素的毒力基因stx1和stx2，设计特异性的LAMP引物对。

经条件优化后确定最适反应体系为，内引物（FIP和BIP）各1.6μM、外引物（F3和B3）各0.2μM、20mM Tris-HCl（PH8.8）、10mM KCl、8mMMgSO4、10mM（NH4）2SO4、0.1％Tween20、0.8M甜菜碱、8mM MgSO4、1.4mM dNTP、8U Bst DNA聚合酶和2μl DNA，63℃恒温反应60min以及在80℃下5min结束反应。

使用优化后的系统进行LAMP反应以确定3种引物的特异性、稳定性及灵敏度，研究结果显示，该方法的最低检出限为l03CFU/mL，比普通PCR法灵敏度提高100倍，可以检测添加菌量为100CFU/25g(mL)的样品。

运用此法对珠海地区的200份食品样品进行检测，为食品风险评估提供了基础数据。

LAMP实时浊度法解决了常规的LAMP法只能对反应终点进行检测的缺陷，它能对整个反应过程进行实时监控，无需通过凝胶电泳分析反应产物，使方法所得数据准确可靠，效率高，同时具有操作简单、灵敏快速等优势，是食品中致病微生物快速筛检的一种良好方法。

LAMP技术研究进展及其在动物疫病检测中的应用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技术是一种能够在恒温下快速、高效地进行核酸扩增的方法。

它通过特殊的引物和酶，在简单的实验条件下可以在短时间内扩增大量目标DNA序列，并且具有高度的特异性和灵敏性。

LAMP技术最早由日本学者Notomi等人于2000年首次提出，自此以后，LAMP技术在许多领域得到了广泛的应用，尤其在动物疫病检测中。

1.快速诊断：LAMP技术可以在一个小时内进行核酸扩增反应，比传统的PCR方法要快得多。

这对于迅速确定疫病的诊断结果非常重要，可以提高动物疫病的早期预警和防控能力。

2.高度特异性：LAMP技术使用多个特异性引物，在同一个反应体系中进行扩增，可以显著提高对目标序列的特异性识别能力。

这对于区分不同疫病病原体或者同一病原体的不同亚型具有重要意义，可以帮助鉴定传染病源和病原菌的变异。

3.高灵敏性：LAMP技术不仅在快速扩增速度上具有优势，还在扩增效果上具有高灵敏性。

在初始目标DNA浓度低至10个分子时，LAMP技术仍能够进行有效扩增，这对于低浓度病原体的检测非常关键。

4.操作简便性：LAMP技术不需要复杂的设备和特殊的实验条件，只需要一个简单的恒温器就可以进行核酸扩增反应。

这极大地降低了操作门槛，使得不同实验室和场所都可以进行动物疫病的检测工作。

5.物价低廉：LAMP技术所需的试剂和设备成本相对较低，特别是与PCR技术相比较，更加经济实惠。

这对于资源有限的地区和农村地区的疫病监测和防控工作尤为适用。

目前，LAMP技术已经在许多动物疫病的检测中得到了应用。

比如，它被成功用于禽流感、猪瘟、传染性胸膜炎、家禽新城疫等重大疫病的快速检测。

通过该技术，可以快速而准确地检测出病原体的存在，为疫病的早期检测和防控提供了有力的手段。

总之，LAMP技术在动物疫病检测中具有广阔的应用前景。

随着该技术的不断进步和完善，相信将能够更好地满足动物疫病检测的需求，为动物疫病的防控提供更加可靠、快速和经济实惠的手段。

PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究叶应旺;吴清平;郭伟鹏;张菊梅【期刊名称】《中国卫生检验杂志》【年(卷),期】2007(17)3【摘要】目的：针对当前国内外传统检测方法都存在时间长、检测结果假阳性突出等问题，建立阪崎肠杆菌快速检测法。

方法：根据阪崎肠杆菌中寡-1，6-葡萄糖苷酶基因设计引物建立PCR方法，并进行PCR反应的灵敏度、特异性实验以及模拟实际样品的最低检出限测定。

结果：纯菌检测灵敏度达10^2 cfu／ml，阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性，阴性对照菌株未扩增出特异性条带；单独接种阪崎肠杆菌（3．5—4．5 cfu／100g）和混合接种大肠杆菌或沙门菌的人工模拟污染奶粉样品中分别在增菌26h和28h时，阪崎肠杆菌均可以检出。

结论：该方法灵敏度高、快速、特异性强，可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。

【总页数】4页(P422-424)【关键词】阪崎肠杆菌(Enterobacter;sakazakii);寡-1;6-葡萄糖苷酶基因;奶粉【作者】叶应旺;吴清平;郭伟鹏;张菊梅【作者单位】中国科学院南海海洋研究所;广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R446.5【相关文献】1.婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌双重荧光PCR快速检测方法的建立 [J], 黄建飞;刘小青;刘斌;陈泽峰;兰全学;陈晶2.奶粉中阪崎肠杆菌PCR和荧光PCR 检测方法的研究 [J], 高虹;张霞;高旗利3.种特异性PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究 [J], 叶应旺;吴清平;郭伟鹏;张菊梅;董晓晖4.PCR快速检测奶粉中的阪崎肠杆菌 [J], 冯锋将5.婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌增菌培养对PCR快速检测的影响 [J], 张清平;张懿翔;刘洋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。