中国海洋大学实验报告2017年11月3日星期五姓名：郑志胜专业年级：2014级生物科学学号：140500110098课程：植物生理学实验题目：植物硝态氮的比色测定一、目的学会植物组织中硝态氮含量的测定方法，了解植物组织中硝态氮的含量。
二、材料用具及仪器药品花生植株、分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠20%醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。
混合粉剂配法：硫酸钡100g、a一萘胺2g、锌粉2g、对氨基苯磺酸4g、硫酸锰10g、柠檬酸75g。
上述各试剂分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各试剂混合成无颗粒状灰白色的均匀体，粉剂宜在黑暗干燥条件中保贮，七天后方可使用。
三、原理硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下：四、方法步骤1.标准曲线绘测：取恒重亚硝酸钠（NaNO2）0.6071g溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。
分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml。
并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm）。
取上清液在520nm波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。
2.组织液的提取称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算：植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v）式中C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g植物组织所制备的提取液的总体积（ml），如本法为40ml。
五、实验报告计算植物组织中硝态氮的含量。
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
实验12 植物体内硝态氮含量的测定植物对氮的吸收与利用，对于其生长发育和产量形成具有重要的影响。
氮素如果以亚硝酸盐或硝酸盐的形式被植物吸收，则称为植物体内的硝态氮(N-NO3-)含量。
在植物体内量测硝态氮含量，不仅可以为揭示植物氮素代谢的特点和生理机制提供数据，还可以指导植物耐受性研究和农业生产。
1 实验原理硝态氮是植物生长发育和产量形成的重要因素，在不同发育阶段的植物中，其含量也相应发生变化。
硝态氮含量可采用摄谱光度法和电化学法测定，其中电化学法的准确性更高且应用范围更广。
本实验是利用电化学法，根据硝酸与还原剂还原成亚硝酸或氨态氮时的电离电流大小的差异，测定植物体内的硝态氮含量。
2 实验步骤2.1 样品处理取适量新鲜样品，如茄子、番茄等，去皮、去籽并洗净。
将样品碾磨成泥状，加入特定的醋酸钾(KCH3COO)提取液(醋酸钾10 g/L)，摇匀，封口密封24 h在4℃下提取。
离心后，取上清，用玛瑙瓶收集。
将所需植物红单色隐花苣、矮生豌豆、楸树等的种子按5 g每袋加入15 mL的海绵培养体，在恒温箱中翻转培养6 d至10 d。
2.3 制备电极制备硝酸电极(NH4NO3-SCE单接)和参比电极，使用前需打磨至光亮。
取同样量的植物提取液和硝酸标准溶液，加入还原剂及缘草酸进行反应。
反应完毕后，测量1 min内的电流，计算硝态氮含量。
2.5 数据处理及统计按照硝态氮含量公式计算并汇总数据，进行ANOVA方差分析及t检验。
3 注意事项3.1 样品应尽量新鲜，提取液操作要快，以避免样品中硝态氮被还原。
3.2 试剂应准确、无杂质、无缺损，若出现异常，应立即更换。
3.3 电极应保持干燥、光洁，并调整标定。
3.4 电化学池应密封，避免气泡干扰或溢液现象。
4 结果分析实验结果如下表所示：在统计学分析中，各组数据的p值均小于0.05，表明差异极显著，比较表明楸树叶片硝态氮含量最高，其次是红单色隐花苣和矮生豌豆，而茄子和番茄中硝态氮含量最低。
植物体内硝态氮含量的测定【实验目的】伤流是植物根系主动吸水的证明，不同植物或同一种植物在不同季节的伤流强度均不同，伤流强度反应根系生理活动强弱和根系又吸收面积大小。
伤流除含有大量水分外，还含有各种无机盐及根部合成有机物包括植物激素。
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
【原理】硝态氮与硝酸试粉作用，生成粉红色的偶氮化合物，其颜色深浅与硝态氮的浓度成正相关，将样品显示的颜色与标准比色阶进行比较，可快速求得硝态氮的浓度。
硝酸试粉主要是由锌粉、柠檬酸、ɑ-萘胺、对氨基苯磺酸混合而成，硝态氮与硝酸试粉反应如下：【实验材料】接骨木伤流液【实验试剂】硝酸试粉、50%醋酸、50mg/L氮流液【实验步骤】在比色盘的五个孔中加入如表所示溶液：5min后即成5个不同浓度20、40、60、80、100mg/mL硝态氮的比色阶。
再用6号孔中加入伤流液5滴及硝酸试粉1勺，搅拌，5min后，将其所显粉红色与标准比色阶比较确定样品液中硝态氮的浓度。
【实验结果及处理】1.经过比色样品溶液的颜色介于2~3之间。
2.根据结果，伤流液中硝态氮的浓约为（10/5+20/10）/2=2mg/mL原理及方法如下：— 1 —硝态氮在经过硫酸2过氧化氢消煮的植物消煮液中，硝态氮和亚硝态氮以硝酸根离子（NO3-）存在，利用NO3-在紫外光区220nm处有特征吸收峰，可以直接测定试液的吸光度来定量硝态氮。
测定时，吸取5mL 消煮液于50mL比色管中，无氨水稀释至刻度，摇匀，在波长210nm处，用1cm石英比色皿，以无氨水作参比，在紫外分光光度计进行硝态氮测定。
3.通过伤流法测定植物中硝态氮含量中，伤流法需要收集伤流液，此环节消费时间长。
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