小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)酶联免疫分析(ELISA)

南京师范大学硕士学位论文氧化低密度脂蛋白检测及临床应用研究姓名：孟扬申请学位级别：硕士专业：生物学；生物化学及分子生物学指导教师：汪俊军2009-05-26氧化低密度脂蛋白检测及临床应用研究摘要目的：(1)人血清中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)自身抗体提取和鉴定。

(2)分别采用自身抗体和多克隆抗体建立血清ox-LDL 酶联免疫吸附测定法(ELISA)并进行临床研究。

(3)分析不同程度氧化、修饰低密度脂蛋白(LDL)特性变化，为ox-LDL检测标准化提供依据。

(4)探讨ox-LDL水平在动脉粥样硬化(As)性心脑血管疾病中的变化，准确评价其临床价值。

(5)采用自身抗体和多克隆抗体的ELISA法测定结果间比较。

方法：(1)采用溴化氰活化的琼脂糖凝胶sepharose 4B交联ox-LDL制备免疫吸附层析柱，从正常人血清中提取抗ox-LDL自身抗体。

(2)分别建立以抗ox-LDL 自身抗体、抗ox-LDL多克隆抗体为包被抗体，酶标抗载脂蛋白B (apoB)为检测抗体的ox-LDL ELISA检测法。

(3)分别采用不同浓度的Cu2+和丙二醛(MDA)对LDL进行氧化、修饰，观察不同时相硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)、共轭双烯(CD)和氧化位点等特性的改变。

(4)采用ELISA法测定139例冠心病(CHD)组患者[急性冠状动脉综合征(ACS) 76例，非ACS组63例]血浆ox-LDL水平，根据冠状动脉造影结果将冠心病组分为多支病变组、双支病变组及单支病变组进行比较。

结果：(1) 经亲和层析提取正常人血清中存在的抗ox-LDL自身抗体，与ox-LDL具有良好的反应性；(2)氧化、修饰的LDL结构和生物特性发生改变，产生了新的氧化位点，同时部分原有位点被隐蔽；采用ox-LDL自身抗体建立的ELISA法测定ox-LDL位点变化较多克隆抗体更为明显；(3)冠心病患者中，ACS 组患者和非ACS组患者ox-LDL水平均显著高于正常对照组[ACS: (188.01±69.88) mg/L, 非ACS: (137.88±59.74) mg/L, 对照组: (82.68±29.06) mg/L; P均<0.001]；且ACS组患者ox-LDL水平显著高于非ACS组患者(P<0.001)。

氧化低密度脂蛋白及其自身抗体与冠心病的相关性程华;马爱群;周萍;周朝霞;强华【期刊名称】《中国分子心脏病学杂志》【年(卷),期】2005(5)1【摘要】目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)及其自身抗体(ox-LDLAb)与冠心病(CHD)的相关关系,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),评价其临床诊断意义。

方法分别提取血浆和血清,用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定血浆ox-LDL及血清ox-LDLAb浓度。

结果冠心病患者ox-LDL、ox-LDLAb明显高于对照组(P<0.01),且急性心梗组(AMI)、不稳定心绞痛组(UAP)高于稳定心绞痛组(SAP)(P<0.05)。

ox-LDL与ox-LDLAb)负相关。

ROC曲线下面积ox-LDL为(0.805±0.039),0x-LD-LAb为(0.747±0.041),对急性冠脉综合征(ACS)有一定的鉴别力。

结论血ox-LDL、ox-LDLAb水平的高低与冠心病严重程度呈正相关,可作为预测ACS和识别斑块不稳定的一项血清学指标。

【总页数】6页(P410-414)【关键词】冠心病;氧化低密度脂蛋白;抗氧化低密度脂蛋白自身抗体;斑块稳定性【作者】程华;马爱群;周萍;周朝霞;强华【作者单位】教育部环境与疾病相关基因重点实验室西安交通大学第一医院心内科【正文语种】中文【中图分类】R781.4;R363.1【相关文献】1.冠心病氧化型低密度脂蛋白自身抗体影响因素分析 [J], 彭郑超2.冠心病患者氧化型低密度脂蛋白自身抗体的检测及临床意义 [J], 熊瑛;张武昌;戴文琴3.氧化低密度脂蛋白自身抗体与冠心病相关性研究 [J], 徐岷;王玉萍4.氧化型低密度脂蛋白自身抗体和高敏C-反应蛋白在糖尿病合并冠心病中的作用研究 [J], 魏明;卢永申;佘红纯;李素娟5.氧化型低密度脂蛋白自身抗体及其免疫复合物与冠心病的相关性 [J], 李晓春;陈鹏;朱永良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

氧化低密度脂蛋白测定方法的探讨（作者：__________ 单位： ___________ 邮编： ___________ ）作者：汪咏新，热阳古力•努尔麦麦提，廖洪利，姑丽娜尔•依明，田刚【摘要】目的探讨建立共扼双烯法（CD ）测定氧化低密度脂蛋白（OX J LDL）对临床诊断的指导意义。

方法采用改进分离低密度脂蛋白的方法，应用CD法与国内通用的ELISA法平行对比，经检测急性心肌梗死（AMI）、不稳定性心绞痛（UAP ）、稳定心绞痛（SAP）患者各30例，并与健康人30例比较。

结果ELISA法检测OX[LDL 的结果与CD法之间无相关性，各疾患组血清中LDL氧化形成CD 的延迟期显著短于对照组（P均V 0.01 ）。

结论阻断LDL的氧化可能成为预防或治疗此类疾患的手段之一。

【关键词】氧化低密度脂蛋白；共扼双烯法；ELISA法国外近年研究表明，促动脉硬化的低密度脂蛋白（LDL ）可在体内由多种因素形成氧化低密度脂蛋白（O X LDL），从而明显增强其促动脉硬化及促凝的作用。

体内Ox]LDL升高与缺血性心、脑血管病及多种老年病关系密切，已成为国内外医学关注的焦点问题。

本研究建立了体外LDL氧化产物共扼双烯（CD）检测法[1],并对急性心肌梗死（AMI）、不稳定性心绞痛（UAP）、稳定心绞痛（SAP）患者各30 例、及健康人30例的氧化易感性进行分析，以探讨应用此方法检测OX]LDL的可靠性。

资料与方法1. 观察对象急性心肌梗死（AMI）患者30例，不稳定性心绞痛（UAP）患者30 例,稳定心绞痛（SAP）患者30例，均符合WHO1999年诊断标准。

取体检及化验指标均正常的30例健康人作为对照组，各组对象均男女各半，年龄在50〜65岁，均同时空腹静脉取血，冷冻备用。

2. 主要试剂CuS04分析纯；pH 7.4的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）;溴化钾（天津化学试剂三厂出品）；ELISA测定Ox[LDL试剂盒；氨基黑10B （AR北京化学试剂厂）；油红0” MERCK ）。

氧化低密度脂蛋白正常值
1. 什么是氧化低密度脂蛋白
氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，简称oxLDL）是指在低密度脂蛋白（LDL）的分解代谢过程中被氧化的一种物质，属于一种不稳定的化学物质。

2. oxLDL的作用
oxLDL能够灌注到动脉壁中，与内皮细胞发生反应，刺激内皮细胞产生许多生物活性物质，导致动脉内皮细胞受损、炎症反应增强、细胞黏附分子表达增强、纤维蛋白形成增多等，同时产生的自由基与细胞膜进行反应，导致膜的结构破坏，引起血管损伤。

长期以来，oxLDL 被认为是动脉硬化的重要因素。

3. oxLDL的检测方法及正常值
oxLDL的检测方法有许多种，如ELISA法、免疫磁球法、单克隆抗体法等。

常用的是ELISA法，参考范围为0-48 U/L。

此外，不同的实验室可能会有些微的差异，因此，标准范围可能会有所不同。

4. oxLDL的影响因素
oxLDL的生成与摄入均可以导致oxLDL水平的增加，许多因素都与oxLDL增加有关，如高脂饮食、糖尿病、高胆固醇血症、肥胖、高血压等。

5. 如何控制oxLDL的水平
饮食和生活方式对控制oxLDL水平具有重要影响。

饮食上应该限
制高脂饮食和高糖饮食，增加富含纤维素的膳食，多食用水果和蔬菜，减少饮酒和吸烟等不健康的生活习惯。

此外，运动也是降低oxLDL的
重要措施。

6. 结论
oxLDL是一个重要的生物标志物，其水平增高与心血管病的发生密切相关。

了解oxLDL的正常值和影响因素，可以帮助人们采取防止oxLDL水平升高的措施，从而降低心血管疾病发生的风险。

氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）说明书【产品名称】通用名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）商品名称：氧化低密度脂蛋白定量测定试剂盒（酶联免疫法）英文名称：Requirement for Oxidized Low Density Lipoprotein Detection Kit （ELISA）【包装规格】96人份/盒；48人份/盒。

【预期用途】本品为体外定量检测血液中氧化低密度脂蛋白（Oxidized Low Density Lipoprotein，OxLDL）含量的试剂。

【检验原理】本试验采用双抗体夹心直接酶联免疫法。

用抗人OxLDL抗体预包被微孔板，使样品中的OxLDL与固相化在微孔板上的抗人OxLDL抗体结合后，将未反应的组分洗脱，再加入酶标记抗体进行酶底物显色，在450nm波长下测定光吸收值，并根据在同一微孔板内反应的校准品制作的剂量-反应曲线，求得样品中OxLDL的含量。

【主要组成成份】见表1。

表1 本试剂盒主要组成成份编号组成规格数量1 固相抗体微孔板96孔/ 48孔1块2 OxLDL校准品0，1，2，4，8，16U/ml 各1瓶3 质控物高、低各1瓶4 酶标记抗体100μl1支5 浓缩洗涤液（21×）30ml 1瓶6 浓缩稀释液（5×）10ml 1瓶7 样品反应液12ml 1瓶8 底物液A 6ml 1瓶9 底物液B 6ml 1瓶10 终止液6ml 1瓶【储存条件及有效期】1、储存条件：2~8℃避光保存。

2、有效期：12个月。

3、试剂复溶及开瓶/开袋后储存条件及有效期见表2。

表2 试剂盒组份复溶、配制及开瓶/开袋后储存条件及有效期组份效期及储存条件固相抗体微孔板（开袋后未使用板条）1个月，2~8℃，于封口的铝箔袋中OxLDL校准品（复溶后）1周，2~8℃质控物（复溶后）1周，2~8℃酶标记抗体（稀释后）1天，2~8℃，避光洗涤液（1×）1个月，2~8℃稀释液（1×）1个月，2~8℃底物液（配制后）新鲜配制后使用酶标记抗体（未稀释）12个月，2~8℃，避光洗涤液、稀释液（未稀释）12个月，2~8℃底物液A、B 12个月，2~8℃样品反应液、终止液12个月，2~8℃【适用仪器】1、带有单波长检测能力的酶标仪，有450nm滤光片，增益应小于20。

代谢综合征患者氧化修饰型低密度脂蛋白与胰岛素抵抗的关系李郁金;尹作民;李鹏;孙平【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2009(015)010【摘要】目的:探讨氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)在代谢综合征(MS)患者中的水平及其和胰岛素抵抗的相关程度.方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)测定单纯MS组(17例)、MS+CHD组(40例)和正常对照组(19例)氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平和空腹血浆真胰岛素水平,并收集MS的其他有关数据:腰围、体重指数、空腹血糖和血脂,计算胰岛素敏感指数(ISI).结果:氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平在正常对照组为(5.97±5.18)μg/L, MS组为(24.68±12.00) μg/L,两组间差异有显著性意义, (F=11.48,P<0.05).氧化修饰型低密度脂蛋白水平与ISI呈负相关(r=-0.472,P<0.05),与体重指数、腰围、低密度脂蛋白胆固醇、空腹真胰岛素无明显相关性.以氧化修饰型低密度脂蛋白水平为应变量的多元逐步回归分析提示,胰岛素敏感指数(r2=0.224)与氧化修饰型低密度脂蛋白具有相关性,体重指数、腰围、低密度脂蛋白胆固醇、空腹真胰岛素与氧化低密度脂蛋白无明显相关性.结论:MS 患者的氧化修饰型低密度脂蛋白(ox-LDL)水平增加,并与胰岛素抵抗相关,而且可能在MS发展为CHD中起一定作用.【总页数】4页(P1141-1144)【作者】李郁金;尹作民;李鹏;孙平【作者单位】山东省青岛市中心医院急救中心,山东,青岛,266042;山东省青岛市中心医院急救中心,山东,青岛,266042;青岛大学医学院附属医院急诊部,山东,青岛,266012;山东省青岛市立医院干部保健科,山东,青岛,266070【正文语种】中文【中图分类】R589.2【相关文献】1.氧化修饰型低密度脂蛋白与冠状动脉病变的关系 [J], 马绍椿;陈锡龙2.痰瘀型代谢综合征合并冠心病患者单核细胞趋化蛋白1和胰岛素抵抗的关系 [J], 鹿小燕;高永红;李耿;冯润3.对氧磷酸酯酶-1与氧化修饰型低密度脂蛋白的关系 [J], 夏岳;杨玉恒;原淑鸿;刘坤申4.氧化修饰型低密度脂蛋白、同型半胱氨酸与急性脑梗塞的关系研究 [J], 阿依古丽·艾山;窦媛媛5.对氧磷酸酯酶-1与氧化修饰型低密度脂蛋白关系的研究进展 [J], 杨玉恒;原淑鸿;夏岳;刘坤申因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

氧化低密度脂蛋白的检测方法氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, OX-LDL）在心血管疾病的发生发展中起着重要作用。

因此，准确检测OX-LDL对于评估心血管疾病风险具有重要意义。

本文将为您详细介绍几种常见的氧化低密度脂蛋白检测方法。

一、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是检测OX-LDP的常用方法，其基本原理是利用特异性抗体与OX-LDL结合，然后通过酶标记的二抗检测结合的OX-LDL。

该方法灵敏度高、特异性好，但操作相对复杂，需要一定的实验条件。

二、免疫比浊法免疫比浊法是利用OX-LDL与特异性抗体形成复合物，使溶液产生浊度，通过测量光散射或光吸收的变化来定量检测OX-LDL。

该方法操作简便、快速，但灵敏度相对较低，适用于大批量样本的快速检测。

三、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是利用OX-LDL与特定色谱柱填料的相互作用，实现OX-LDL与其他脂蛋白的分离，并通过检测器对OX-LDL进行定量。

该方法具有较高的准确性和重复性，但仪器设备要求较高，成本相对较高。

四、质谱法质谱法是通过检测OX-LDL中的特定分子标志物，如氧化磷脂、氧化胆固醇等，实现对OX-LDL的定性和定量分析。

该方法具有高灵敏度、高特异性，但操作复杂，对实验技术和设备要求较高。

五、电化学免疫传感器法电化学免疫传感器法是将OX-LDL与特异性抗体结合，通过电化学检测抗体与OX-LDL结合产生的电流信号，从而实现OX-LDL的检测。

该方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，适用于现场快速检测。

六、荧光免疫分析法荧光免疫分析法是利用荧光标记的抗体与OX-LDL结合，通过荧光检测仪器对结合的OX-LDL进行定量分析。

该方法灵敏度高、操作简便，但荧光标记可能存在交叉反应，影响检测特异性。

总结：氧化低密度脂蛋白的检测方法多种多样，各有优缺点。

在实际应用中，需要根据实验条件、检测需求及成本等因素综合考虑，选择合适的检测方法。

氧化低密度脂蛋白的检测方法氧化低密度脂蛋白（oxLDL）是低密度脂蛋白（LDL）在体内经过氧化后的产物，与动脉粥样硬化和心血管疾病的发展有密切关系。

因此，检测oxLDL的水平对于心血管疾病的预防和治疗具有重要意义。

以下是几种常用的oxLDL检测方法：1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：这是检测oxLDL最常用的方法之一。

通过使用特异性抗体识别和结合oxLDL，然后通过酶标记的二抗和底物的颜色变化来定量oxLDL的浓度。

ELISA方法具有较高的特异性和灵敏度，适合于临床和研究实验室的需要。

2. 免疫荧光法：通过使用特异性抗体，这些抗体对oxLDL有很高的亲和力，并且被荧光染料标记。

当抗体与oxLDL结合时，可以通过荧光显微镜或流式细胞仪检测到荧光信号，从而实现对oxLDL的定性和定量分析。

3. 流式细胞术：这种方法可以用来检测血液样本中含有oxLDL的细胞。

通过使用针对oxLDL的荧光标记抗体，可以在流式细胞仪上对单个细胞进行分析，从而评估oxLDL的水平和其在细胞中的分布。

4. 电化学发光法：这是一种灵敏度高、特异性强的检测方法，利用电化学发光标记的抗体与oxLDL的结合来测量oxLDL的浓度。

该方法适合于高通量筛选和大规模临床样本的分析。

5. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC可以用于分离和定量oxLDL中的特定氧化产物，如氧化脂质和胆固醇氧化物。

这种方法需要复杂的样品准备和专业的操作，但提供了关于oxLDL氧化程度的详细信息。

6. 直接检测氧化标志物：还可以通过检测与LDL氧化相关的标志物，如丙二醛修饰的LDL（MDA-LDL）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）修饰的LDL等，间接评估oxLDL的水平。

每种方法都有其优点和局限性，选择适合的方法通常取决于实验目的、样本类型、设备可用性以及成本等因素。

在临床和研究应用中，多种方法的结合使用可以提供更全面的信息，有助于更好地理解oxLDL在心血管疾病中的作用。

氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）是一种具有独特生物学功能的脂质分子，它在动脉粥样硬化形成中具有重要作用。

由于氧自由基和其他活性氧化物质的存在，氧化型低密度脂蛋白的水平会随着动脉粥样硬化的进展而升高。

1. 常见检测方法目前，常见的检测氧化型低密度脂蛋白的方法主要包括酶联免疫吸附法（ELISA）和免疫印迹法等。

通过这些方法，可以快速、准确地检测出氧化型低密度脂蛋白的水平，为相关疾病的早期诊断提供重要的参考数据。

2. 正常值范围根据现有研究资料，氧化型低密度脂蛋白的正常值范围通常在0-50 U/L之间。

当体内氧化应激状态较低时，氧化型低密度脂蛋白的水平会相对较低；而当体内氧化应激状态较高时，氧化型低密度脂蛋白的水平则会升高。

了解氧化型低密度脂蛋白的正常值范围，对于及时了解体内氧化应激状态具有重要意义。

3. 影响因素氧化型低密度脂蛋白的水平受多种因素影响。

饮食结构和生活习惯是影响氧化型低密度脂蛋白水平的重要因素。

高糖、高脂肪饮食以及大量摄入酒精等不良的饮食结构和生活习惯会导致体内氧化应激状态的升高，从而增加氧化型低密度脂蛋白的水平。

体内炎症反应也会显著影响氧化型低密度脂蛋白的水平。

当机体处于炎症状态时，氧化型低密度脂蛋白的水平通常会升高。

遗传因素、环境因素、芳龄等也会对氧化型低密度脂蛋白的水平产生一定影响。

4. 临床意义氧化型低密度脂蛋白作为动脉粥样硬化的重要诱发因子，其水平的升高与多种心血管疾病的发生密切相关。

了解氧化型低密度脂蛋白的正常值范围，对于心血管疾病的预防和治疗有着重要的临床意义。

通过定期监测氧化型低密度脂蛋白的水平，可以及时评估患者的心血管健康状况，采取合理的干预措施，降低心血管事件的发生风险。

5. 干预策略针对氧化型低密度脂蛋白水平的异常，应该采取相应的干预措施。

调整饮食结构和生活习惯，减少高糖、高脂肪和高热量食物的摄入，增加蔬菜、水果和高纤维食物的摄入，适量进行有氧运动等，有助于降低氧化应激状态，从而降低氧化型低密度脂蛋白的水平。